王忠芳
- 作品数：13 被引量：94H指数：6
- 供职机构：北京医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 内含人前列腺特异性抗原 mRNA 的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达被引量：1
- 2006年
- 目的构建原核表达系统,表达内含人前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)mRNA 部分序列的病毒样颗粒,该病毒样颗粒因噬菌体蛋白包被重组 RNA 而使其包裹的RNA 具有耐核糖核酸酶(RNase)的特性。方法采用聚合酶链反应扩增人前列腺特异性抗原cDNA 的部分保守区域,进行 TA 克隆后用限制性内切酶 Hind Ⅲ酶切获得所需要的目的片段,与用Hind Ⅲ酶切的表达载体 pNCCL1相连接.构建一新的表达载体 pNCCL1-PSA,再转化 E.Coli BL21-DE3,用 IPTG 诱导表达噬菌体 MS2包膜蛋白,包膜蛋白可进行自我组装成病毒样颗粒并将 PSAmRNA 部分序列包裹到病毒样颗粒内。结果成功构建得到了新的表达载体 pNCCL1-PSA,经原核表达得到耐 RNase 的内含 PSA mRNA 部分 RNA 序列的病毒样颗粒。结论本研究得到的表达载体 pNCCL1-PSA 及原核表达系统.可以作为以后构建和制备耐 RNase 的 PSA mRNA 标准品和质控品的的平台,为实验室 PSA mRNA 的检测提供新的标准品及质控品。
- 王露楠吴健民彭建明李金明王忠芳邓巍
- 关键词：前列腺特异性抗原病毒粒子噬菌体
- 基于日常检测结果的核酸扩增检测假阳性统计室内质量控制方法被引量：5
- 2006年
- 目的建立一种利用核酸扩增检验实验室日常检测数据进行定性测定假阳性监测的实验室室内质量控制方法。方法以实验室日常不少于20次检测的阳性率比值为基础,计算阳性率比值的均值(x)和标准差(s),绘制质控图,以1+2S为“告警”规则,1+3S和3+2S为失控规则。结果对实验室212次HBVDNA聚合酶链反应(PCR)实测数据分析,x和s分别为0.527和0.078,与前20次测定的x(0.532)和s(0.09)相近。212次测定中,出现5次超出x±2s,按照所定的质控规则有两次失控。符合统计上的正态分布。结论为核酸扩增常规检测提供了一种具有可操作性的假阳性统计室内质控方法。
- 李金明林尊慧王露楠靳海英彭建明王忠芳邓巍
- 关键词：核酸扩增技术假阳性反应
- 严重急性呼吸综合征病因及其检测的研究进展
- 2002年底,在我国广东省出现了一些病因不明的非典型肺炎,伴有严重的可以危及生命的呼吸系统症状。随即在越南,加拿大和香港等地出现家庭成员或医护人员聚集感染的现象。非典型肺炎于2003年2月被命名为严重急性呼吸综合征(Se...
- 王忠芳李金明
- 文献传递
- 含人甲胎蛋白mRNA部分序列的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达被引量：5
- 2005年
- 原发性肝癌为一种严重威胁人们健康的恶性肿瘤.甲胎蛋白(AFP)mRNA在监测原发性肝癌的肝外转移以及术后复发方面是一个很好的标志物,也可用于肝癌治疗效果的评价.通常AFP mRNA的检测方法为逆转录巢式聚合酶链反应(RT-PCR)法进行定性检测,或利用凝胶电泳扫描的方法进行半定量检测.近来随着实时荧光PCR技术的发展使得准确定量检测AFP mRNA成为可能.
- 彭建明李金明徐克前王忠芳王露楠邓巍
- 关键词：甲胎蛋白MRNA病毒样颗粒细菌噬菌体原发性肝癌
- 利用MS2噬菌体包膜蛋白与RNA的特异性相互作用构建临床检测用病毒样颗粒被引量：2
- 2007年
- MS2噬菌体是单链正链RNA病毒，为26nm长的20面体，共有3569个核苷酸，包含有3个基因，编码成熟酶蛋白、包膜蛋白、复制酶蛋白和裂解蛋白等4种蛋白质分子。噬菌体由180个包膜蛋白单体、一分子成熟酶蛋白和一分子基因组RNA组成。在MS2噬菌体包膜蛋白的研究中发现包膜蛋白与噬菌体复制酶5’端由19个碱基（19mer）组成的茎环结构RNA序列有特异性相互作用，这种作用可引发噬菌体外壳的组装，同时，将噬菌体基因组RNA包装到包膜内。国外研究人员发现在包装位点后引入非噬菌体基因序列也可以引发包装。本研究拟利用MS2包膜蛋白与RNA的相互作用来观察RNA序列对包装的影响以及基于两者相互作用构建病毒样颗粒在临床分子检测中的应用。
- 黄杰王忠芳杨昌梅李金明
- 关键词：MS2噬菌体正链RNA病毒包膜蛋白病毒样颗粒相互作用
- 建立定性免疫测定中假阳性监测的室内质控方法被引量：9
- 2006年
- 目的建立利用实验室日常检测数据进行定性免疫测定假阳性监测的室内质控方法。方法测定数据为正态分布,采用半LEVEY-JENNINGS质控图法,即以实验室日常不少于20次检测的阳数率为基础,计算阳性率的均值(X-)和标准差(S),绘制质控图,以1+2S为失控规则。如为非正态分布,则采用直接概率计算法。结果半LEVEY-JENNINGS质控图法和直接概率计算法均适用于定性免疫测定假阳性统计室内质控。结论为临床免疫常规检测提供了具有可操作性的假阳性统计室内质控方法。
- 李金明王露楠邓巍王忠芳
- 关键词：免疫测定假阳性反应
- 含风疹病毒部分核酸序列的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达被引量：7
- 2005年
- 目的 构建原核表达系统,表达内含风疹病毒部分核酸序列的由噬菌体包膜蛋白构成的病毒样颗粒,并包被重组RNA,使其具耐核糖核酸酶 (RNase)的特性。方法 用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)扩增风疹减毒活疫苗中风疹病毒糖蛋白E1的部分保守区域,进行TA克隆后,用限制性内切酶HindⅢ酶切,获得所需要的目的片段,并与用HindⅢ酶切的表达载体pNCCL1相连接,构建一新的表达载体pNCCL1 Ru。再转化E ColiBL21 DE3,用IPTG诱导表达噬菌体MS2包膜蛋白后,再自我组装成病毒样颗粒,并将风疹病毒部分序列包裹到病毒样颗粒内。结果 成功构建了新的表达载体pNCCL1 Ru,其原核表达产物病毒样颗粒中所包裹的风疹病毒RNA序列与风疹BRDⅡ株同源性高达98%,所包裹的RNA具有耐RNase消化的特性以及良好的稳定性。结论 我们构建的表达载体pNCCL1 Ru及原核表达系统,可作为构建和制备耐RNase的风疹病毒核酸标准品和质控品的平台,可为实验室进行风疹病毒核酸的检测提供稳定的无传染性的标准品和质控品。
- 彭建明李金明徐克前王忠芳王露楠邓巍
- 关键词：风疹病毒病毒样颗粒包膜蛋白核糖核酸酶核酸序列IPTG
- 内含RNA病毒核酸的病毒样颗粒及其制备方法与应用
- 本发明属于病毒基因工程领域，具体是一种内含RNA病毒核酸的病毒样颗粒及其制备方法与应用。该病毒样颗粒耐RNase，含有外壳蛋白以及包含在内的重组基因序列：MS<Sub>2</Sub>噬菌体的部分序列、RNA病毒核酸序列；...
- 李金明王忠芳王露楠彭建明邓巍
- 文献传递
- 丙型肝炎病毒核酸检测的国家标准物质的研制被引量：41
- 2006年
- 目的研制国内用于丙型肝炎病毒核酸（HCV RNA）扩增检测的血清标准物质.方法用HCV RNA阴性血浆将阳性血浆稀释至含量约300 000拷贝数/ml,然后进行真空冷冻干燥.检测方法采用实时荧光定量聚合酶链反应方法和罗氏公司的PCR内标定量方法.制备标准品含量通过与国际标准（世界卫生组织属下的国家生物标准研究所标准物质编号：96/790）比对获得.结果该标准物质定值为：（1.29±0.24）×10^5 IU/ml.其稳定性实验表明室温20～25℃（相对湿度20%～50%）14 d、37℃（相对湿度60%～80%）7 d均稳定.长期监测结果表明： 2～8℃6个月及-20℃保存两年的含量均无明显变化.均一性检测结果：瓶间不精密度为3.53%.结论该制备物可以作为用于核酸扩增检测的丙型肝炎病毒核酸国家标准物质.
- 王露楠吴健民李金明邓巍王忠芳申子瑜陈文祥
- 关键词：肝炎病毒核酸
- 严重急性呼吸综合征实验室检测中应注意的问题被引量：4
- 2003年
- 李金明王露楠王忠芳
- 关键词：严重急性呼吸综合征非典型肺炎免疫测定法
