王玮
- 作品数：6 被引量：9H指数：1
- 供职机构：内蒙古大学更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项内蒙古自治区自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4基因并稳定转染胎儿成纤维细胞被引量：6
- 2010年
- 【目的】克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4(thymosinbeta4,Tβ4)基因,构建皮肤特异性表达载体,转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达红色荧光蛋白并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】通过RT-PCR克隆Tβ4基因cDNA序列,然后与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成Tβ皮肤特异性表达载体pCDsRed-KT。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。【结果】克隆了内蒙古白绒山羊Tβ4基因,cDNA全长142bp,其中包含135bp的完整ORF,编码44个氨基酸残基,氨基酸序列与已报道的牛胸腺素β4(NM_001002885)同源性为100%。测序显示构建的表达载体pCDsRed-KT中,Tβ4基因正确连接在皮肤特异性启动子KAP6-1下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。PCR检测显示外源KAP6-1启动子和Tβ4基因整合到细胞基因组中,筛选出的转基因细胞高效表达红色荧光蛋白。【结论】克隆得到内蒙古白绒山羊Tβ4基因并构建成功其真核表达载体,可稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,为下一步通过核移植方法获得转胸腺素β4基因绒山羊提供了条件。
- 王彦凤梁燕金永王晓晶郭旭东王玮王潇王志钢刘东军
- 关键词：胸腺素Β4稳定转染
- 以体细胞核移植技术制备IGF1转基因白绒山羊的研究
- 究拟利用毛囊特异表达IGF1(Insulin like growth factor I)的真核表达载体pCDsR-KI转染绒山羊胎儿成纤维细胞(Caprine Fetal Fibroblast Cells, CFFCs)...
- 郭旭东朱兵仓明刘东军袁建龙王玮金永任宇温建勋肖红梁伟吴海青
- 关键词：体细胞核移植白绒山羊
- 构建骨骼肌特异表达人FS基因载体及其稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞被引量：1
- 2011年
- 旨在构建骨骼肌特异表达人卵泡抑制素(follistatin,FS)基因载体并得到其稳定转染的蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。首先通过RT-PCR方法克隆得到人FS基因cDNA序列,然后与猪骨骼肌特异表达启动子α-actin以及红色荧光蛋白表达元件连接,构建成FS基因骨骼肌特异表达载体pCFCDS。脂质体介导外源表达载体转染绵羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选后得到稳定转染的绵羊转基因细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,分析转基因细胞系的核型和生长状况。结果显示,成功构建得到绵羊骨骼肌特异表达人FS基因的真核表达载体,并得到其稳定转染的转基因绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。
- 王玮袁建龙金永朱兵岳群华梁浩郭旭东刘东军仓明
- 关键词：卵泡抑制素
- 表达红色荧光及转胸腺素β4基因绵羊胎儿成纤维细胞系的制备被引量：1
- 2010年
- 旨在构建胸腺素β4(thymosin beta4,Tβ4)基因真核表达载体并转染绵羊胎儿成纤维细胞,获得稳定表达胸腺素β4及红色荧光蛋白的转基因细胞克隆。将克隆载体pMD19TT中的胸腺素β4基因亚克隆到表达载体pIRES2-DsRed2的多克隆位点,构建表达载体pIRES2-DsRed2-Tβ4,脂质体介导转染绵羊胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。RT-PCR检测Tβ4基因在宿主细胞中的转录。测序结果显示,构建的表达载体pIRES2-DsRed2-Tβ4序列中,Tβ4基因正确连接在CMV启动子下游,顺序连接IRES2序列和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。脂质体介导的稳定转染效率约为15%,经G418筛选得到转基因细胞克隆并高效表达红色荧光蛋白。RT-PCR检测显示外源Tβ4基因在绵羊胎儿成纤维细胞中得到转录。成功构建具有红色荧光蛋白和新霉素抗性双选择标记的胸腺素β4基因真核表达载体并稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞,筛选得到的超表达胸腺素β4绵羊胎儿成纤维细胞系为下一步通过核移植和克隆技术获得转基因绵羊提供了条件。
- 王彦凤梁燕王玮史偈君金永王晓晶郭旭东王潇王志钢刘东军
- 关键词：胸腺素Β4
- 骨骼肌特异表达卵泡抑制素基因转基因绵羊研究
- 体细胞核移植技术和转基因技术的发展为转基因动物新品种的培育提供了新的技术平台。卵泡抑制素/(follistatin, FST/)具有促进肌肉生长和增加肌肉力量的功能,是近几年高产肉量家畜研究和治疗肌肉萎缩的热点基因。本研...
- 王玮
- 关键词：转基因绵羊卵泡抑制素体细胞核移植
- 文献传递网络资源链接
- 人工合成启动子特异启动IGF-1真核载体的构建与绵羊成纤维细胞转染被引量：1
- 2010年
- 构建了肌肉特异表达IGF-1载体,并转染绵羊成纤维细胞获得了稳定整合外源基因可用于细胞核移植的转基因细胞.通过人工合成骨骼肌特异启动子SP片段,与羊IGF-1相连,最终连接到骨架载体pCDsRed2中构建成骨骼肌特异表达IGF-的真核表达载体pSPICDS.使用脂质体法转染绵羊成纤维细胞,通过红色荧光与G418双重选择,获得了转基因细胞.经PCR检测证实得到的细胞克隆外源基因稳定整合,可以作为供体细胞用于体细胞核移植.
- 袁建龙王玮金永肖红梁伟郭旭东仓明
- 关键词：胰岛素样生长因子基因转染
