钟梁
- 作品数：104 被引量：223H指数：6
- 供职机构：重庆医科大学附属永川医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家中医药管理局基金资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学文化科学更多>>
- 分离培养子宫内膜腺上皮和间质细胞方法的改进被引量：1
- 2007年
- 目的：探索一种获得高产量、高纯度子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的分离培养方法。方法：通过高浓度胶原酶和DNase联合消化、过滤及贴壁纯化等技术，分离培养30例子宫内膜腺上皮和间质细胞，并拟传代。结果：29例标本培养成功，每1g子宫内膜组织约可分别得到（40～50）×10^6个腺上皮细胞和（40～50）×10^6个间质细胞，细胞产量高。并且腺上皮细胞纯度率约96％，间质细胞纯度率达98％以上。间质细胞可以有限传代，腺上皮细胞不能传代。结论：通过改良步骤，可提高腺上皮和间质细胞产量，同时保证了其纯度及活性，不失为一种较理想的子宫内膜细胞分离培养方法。
- 王佳姚珍薇唐良萏钟梁令狐华谯建刘北忠
- 关键词：子宫内膜腺上皮细胞间质细胞细胞培养
- 大黄素三甲氧基衍生物合成及体外抗肿瘤活性试验被引量：4
- 2010年
- 目的:以天然存在的大黄素为原料合成了甲基化衍生物三甲氧基大黄素,并进行体外抗肿瘤活性的研究。方法:利用硫酸二甲酯/丙酮甲基化组合合成目标化合物1,3,8-三甲氧基-6-甲基蒽醌;通过常规方法,对其理化性质进行鉴定。采用HPLC及ESI-MS对其结构进行表征;通过MTT比色法与流式细胞术检测其对K562细胞增殖及细胞周期分布的影响。结果:三甲氧基大黄素为淡黄色粉末,mp:226～227℃,溶于氯仿等有机溶剂。其结构经HPLC及ESI-MS检测得到确证;浓度依赖性地抑制K562细胞的增殖,并使G0/G1期的细胞比例增加。结论:以大黄素为原料,成功合成了其新的衍生物。三甲氧基大黄素具有抑制K562细胞增殖及阻滞细胞周期由G0/G1期向S期移行的抗肿瘤活性。
- 金丹婷钟梁刘北忠袁佩刘畅王翀王春光朱丹吴燕
- 关键词：大黄素抗肿瘤活性
- 带核定位信号的RARα与谷氨酸氨连接酶蛋白相互作用的胞内外验证被引量：4
- 2010年
- 目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活细胞内的相互作用;通过构建GLUL及NLS-RARα蛋白标签融合表达载体,共转染至人胚肾HEK293细胞,利用免疫共沉淀技术在细胞外验证它们之间的相互作用。结果 GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色的阳性克隆;GLUL蛋白及NLS-RARα标签融合表达载体构建成功,共同转染至HEK293细胞,采用抗HA多克隆抗体免疫沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,抗c-Myc单克隆抗体免疫印迹检测,检测到GLUL-cMyc蛋白。结论采用酵母双杂交和免疫共沉淀技术成功地在胞内外验证了GLUL与NLS-RARα之间存在特异性的相互作用。
- 吴燕刘北忠王翀钟梁朱丹王春光金丹婷
- 关键词：维甲酸受体Α核定位信号蛋白质相互作用双杂交系统技术免疫共沉淀
- 重组腺病毒Ad5/F35-HF2S的构建及其鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建携带HA标签的重组腺病毒Ad5F35-HF2S。方法体外合成HA标签DNA双链,以K562细胞cDNA为模板,分别扩增FKBP1、FKBP2和SH2基因,依次亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV-HA中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-HF2S,穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAd5/F35在Ad5/F35-BJ5183感受态细胞中同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd5/F35-HF2S,经PacⅠ酶切线性化后,转染AD-293细胞进行包装、扩增,获得重组腺病毒Ad5/F35-HF2S,经2轮扩增后,测定病毒滴度;采用PCR及Western blot法检测感染细胞中HF2S基因的转录及蛋白的表达。结果重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-HF2S及重组腺病毒质粒pAd5/F35-HF2S经鉴定均构建正确;经包装及2轮扩增后,重组腺病毒Ad5/F35-HF2S病毒滴度可达1013IU/ml;经PCR及Western blot鉴定表明,重组腺病毒携带的HF2S基因能够在AD-293细胞中表达。结论已成功构建了表达HF2S基因的重组腺病毒Ad5/F35-HF2S,为研究Grb2-SH2结构域在CML中的基因治疗和作用机制奠定了基础。
- 李千音黄峥兰高淼钟梁冯文莉
- 关键词：SH2FKBP重组腺病毒
- 急性早幼粒细胞白血病患者血肿瘤细胞NLS-RARα蛋白的表达与定位被引量：2
- 2015年
- 目的验证急性早幼粒细胞白血病(APL)患者血肿瘤细胞中带核定位信号的维甲酸受体α(nuclear localization signal-retinoic acid receptor alpha,NLS-RARα)蛋白的存在及定位。方法采用蛋白质印迹法验证患者血肿瘤细胞中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)的存在;提取患者血肿瘤细胞核蛋白,蛋白质印迹法检测细胞核中NLS-RARα蛋白的表达;FITC/DAPI双染色免疫荧光法检测患者血肿瘤细胞中NLS-RARα的表达及定位;FITC/PI双染色激光共聚焦法检测患者血肿瘤细胞中NLS-RARα的表达及定位。以重组腺病毒Ad-NE感染的NB4细胞中NLS-RARα蛋白的表达及定位作阳性对照,以正常人血中性粒细胞中野生型RARα的表达和定位作阴性对照。结果阳性对照组设置成功。APL患者血肿瘤细胞中存在NE且有NLS-RARα蛋白表达。细胞免疫荧光法、激光共聚焦法检测结果提示APL患者血肿瘤细胞NLSRARα蛋白的表达主要位于胞核。结论成功用3种方法检测出APL患者血肿瘤细胞中NLS-RARα蛋白的存在并推测其定位,为进一步研究APL的早期诊断及复发监测提供了新思路。
- 王慧刘北忠阳小群朱新瑜马鹏鹏蒋开玲钟梁
- 关键词：维甲酸受体Α核定位信号急性早幼粒细胞白血病
- NLS-RARα与ISCA1相互作用在哺乳动物细胞中的验证被引量：2
- 2009年
- 目的:利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术验证铁硫簇组装蛋白1(ISCA1)与带核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)蛋白间的相互作用.方法:构建含融合蛋白的真核表达载体pCMV-HA-NLS-RARα和pCMV-Myc-ISCA1,酶切及测序鉴定正确后,转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术进一步证实二者之间的相互作用.结果:真核表达载体成功构建并经测序鉴定,转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,用抗Myc mAb进行蛋白印记检测,可以检测到Myc-ISCA1蛋白的表达.结论:分别成功构建了含HA-NLS-RARα与Myc-ISCA1融合蛋白的真核表达载体,并利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术在体外证实了NLS-RARα与ISCA1之间存在相互作用.
- 王东生王春光王翀曹炬张国元王勇钟梁刘北忠
- 关键词：核定位信号受体维甲酸蛋白质相互作用免疫共沉淀
- miR-382-5p通过靶基因PTEN阻滞NB4细胞分化被引量：2
- 2019年
- 该文主要研究在急性早幼粒细胞白血病NB4细胞中, miR-382-5p通过调控靶基因PTEN(phosphatase and tensin homologue)抑制了全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)诱导的急性早幼粒细胞分化。我们运用ATRA(1μmol/L)诱导细胞分化; Western blot检测PTEN及髓系分化标志物CD11b的蛋白质水平;实时荧光定量PCR检测miR-382-5p的表达水平;过表达PTEN的慢病毒载体分别感染NB4细胞和HL-60、THP-1细胞;脂质体转染miR-382-5p的模拟剂(mimics)和特异性抑制剂(inhibitors)NB4细胞。结果显示, PTEN促进ATRA诱导的NB4细胞分化,而在HL-60和THP-1细胞中并无明显促分化效应。NB4细胞中,脂质体转染miR-382-5p mimics在mRNA和蛋白水平均抑制了PTEN的表达,并且抑制了ATRA诱导的分化;转染miR-382-5p inhibitors则恢复了PTEN表达,同时促进了ATRA诱导的急性早幼粒细胞NB4细胞的分化。该文结果提示, miR-382-5p靶向抑制了PTEN的表达从而抑制ATRA诱导的NB4细胞分化。
- 刘冬冬刘北忠袁桢姚娟娟钟鹏强刘俊梅姚仕菲赵毅刘路陈敏李连文钟梁
- 关键词：PTEN急性早幼粒细胞白血病全反式维甲酸分化
- 安环所致子宫出血病人的血液流变性变化的观察被引量：1
- 2001年
- 本文测定了安环所致子宫出血病人的血流变指标 ,发现安环所致子宫出血病人的血浆粘度明显下降。另外测定了妇女在月经周期的分泌期的血液流变学指标 ,表明孕激素的水平明显影响血液粘度。
- 丁敏程绮馨易钢钟梁
- 关键词：节育环子宫出血孕激素
- 急性早幼粒细胞白血病诱导治疗阶段不同辅助治疗方案的疗效比较被引量：6
- 2018年
- 目的比较急性早幼粒细胞白血病(APL)诱导治疗阶段不同辅助治疗方案的疗效。方法回顾性分析44例APL初治患者的临床资料,将患者分为高危组15例及中低危组29例,均接受全反式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷(ATO)双诱导治疗,再根据诱导治疗过程中采用的辅助治疗方案将每组分为单加蒽环类药物(柔红霉素)组和蒽环类药物与阿糖胞苷联用组(DA组)。观察各组患者完全缓解(CR)率、早期死亡情况、化疗结束时PLT及凝血功能的好转情况以及诱导期间不良反应的发生情况。结果 44名初治APL患者均无早期死亡。低中危组和高危组中,单加蒽环类药物组与DA组的CR率、外周血PLT水平回升率、凝血功能好转率、WBC峰值、分化综合征发生率、感染率、肝功异常率以及凝血象恶化率,比较差异均无统计学意义(均P>0.05),但单加蒽环类药物组达CR所需时间明显短于DA组(P<0.05)。低中危组中,单用蒽环类药物组3~4级骨髓抑制率低于DA组(P<0.05)。结论在ATRA和ATO双诱导治疗的基础上,单用蒽环类药物进行辅助治疗较DA方案可获得更好的疗效,且可以降低低中危患者的3~4级骨髓抑制率。
- 李连文刘北忠陈建斌姚仕菲陈敏赵毅刘路钟梁
- 关键词：急性早幼粒细胞白血病阿糖胞苷蒽环类
- JTV1对K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制被引量：4
- 2011年
- 目的观察上调JTV1基因的表达对人白血病K562细胞系增殖与凋亡的影响并探讨其机制。方法将携带有JTV1基因的pcDNA3.1-JTV1载体转染人K562细胞作为阳性转染组,转染pcDNA3.1空载体作为空载体转染组,未转染的K562细胞为未转染组。通过集落形成实验检测各组K562细胞的增殖能力,采用流式细胞术与Annexin-PI双染色结合分析细胞周期和细胞凋亡率,同时采用RT-PCR法检测JTV1基因及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc mRNA水平的变化,采用Western blotting检测基因JTV1及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc蛋白水平的变化。结果集落形成实验结果显示上调JTV1基因表达后K562细胞的增殖能力明显降低。流式细胞术与Annexin-PI双染色检测结果显示,与空载体转染组及未转染组相比,阳性转染组K562细胞的G期细胞比例明显升高(P<0.05);阳性转染组中Bax基因的mRNA水平和蛋白水平较空载体转染组及未转染组均明显上升,而Bcl-2基因和C-myc基因的mRNA水平和蛋白水平则明显下调(P<0.05)。结论 JTV1基因过表达可能通过抑制基因Bcl-2和C-myc的表达增强基因Bax的表达,从而抑制K562细胞系的增殖并促进其凋亡。
- 吴燕刘北忠王翀钟梁朱丹王春光金丹婷高艳军黎亮
- 关键词：基因基因BCL-2基因C-MYC基因BAXK562细胞
