钟梁
- 作品数：105 被引量：224H指数：6
- 供职机构：重庆医科大学附属永川医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家中医药管理局基金资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学文化科学更多>>
- 分离培养子宫内膜腺上皮和间质细胞方法的改进被引量：1
- 2007年
- 目的：探索一种获得高产量、高纯度子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的分离培养方法。方法：通过高浓度胶原酶和DNase联合消化、过滤及贴壁纯化等技术，分离培养30例子宫内膜腺上皮和间质细胞，并拟传代。结果：29例标本培养成功，每1g子宫内膜组织约可分别得到（40～50）×10^6个腺上皮细胞和（40～50）×10^6个间质细胞，细胞产量高。并且腺上皮细胞纯度率约96％，间质细胞纯度率达98％以上。间质细胞可以有限传代，腺上皮细胞不能传代。结论：通过改良步骤，可提高腺上皮和间质细胞产量，同时保证了其纯度及活性，不失为一种较理想的子宫内膜细胞分离培养方法。
- 王佳姚珍薇唐良萏钟梁令狐华谯建刘北忠
- 关键词：子宫内膜腺上皮细胞间质细胞细胞培养
- 大黄素三甲氧基衍生物合成及体外抗肿瘤活性试验被引量：4
- 2010年
- 目的:以天然存在的大黄素为原料合成了甲基化衍生物三甲氧基大黄素,并进行体外抗肿瘤活性的研究。方法:利用硫酸二甲酯/丙酮甲基化组合合成目标化合物1,3,8-三甲氧基-6-甲基蒽醌;通过常规方法,对其理化性质进行鉴定。采用HPLC及ESI-MS对其结构进行表征;通过MTT比色法与流式细胞术检测其对K562细胞增殖及细胞周期分布的影响。结果:三甲氧基大黄素为淡黄色粉末,mp:226～227℃,溶于氯仿等有机溶剂。其结构经HPLC及ESI-MS检测得到确证;浓度依赖性地抑制K562细胞的增殖,并使G0/G1期的细胞比例增加。结论:以大黄素为原料,成功合成了其新的衍生物。三甲氧基大黄素具有抑制K562细胞增殖及阻滞细胞周期由G0/G1期向S期移行的抗肿瘤活性。
- 金丹婷钟梁刘北忠袁佩刘畅王翀王春光朱丹吴燕
- 关键词：大黄素抗肿瘤活性
- 带核定位信号的RARα与谷氨酸氨连接酶蛋白相互作用的胞内外验证被引量：4
- 2010年
- 目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活细胞内的相互作用;通过构建GLUL及NLS-RARα蛋白标签融合表达载体,共转染至人胚肾HEK293细胞,利用免疫共沉淀技术在细胞外验证它们之间的相互作用。结果 GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色的阳性克隆;GLUL蛋白及NLS-RARα标签融合表达载体构建成功,共同转染至HEK293细胞,采用抗HA多克隆抗体免疫沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,抗c-Myc单克隆抗体免疫印迹检测,检测到GLUL-cMyc蛋白。结论采用酵母双杂交和免疫共沉淀技术成功地在胞内外验证了GLUL与NLS-RARα之间存在特异性的相互作用。
- 吴燕刘北忠王翀钟梁朱丹王春光金丹婷
- 关键词：维甲酸受体Α核定位信号蛋白质相互作用双杂交系统技术免疫共沉淀
- 重组腺病毒Ad5/F35-HF2S的构建及其鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建携带HA标签的重组腺病毒Ad5F35-HF2S。方法体外合成HA标签DNA双链,以K562细胞cDNA为模板,分别扩增FKBP1、FKBP2和SH2基因,依次亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV-HA中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-HF2S,穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAd5/F35在Ad5/F35-BJ5183感受态细胞中同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd5/F35-HF2S,经PacⅠ酶切线性化后,转染AD-293细胞进行包装、扩增,获得重组腺病毒Ad5/F35-HF2S,经2轮扩增后,测定病毒滴度;采用PCR及Western blot法检测感染细胞中HF2S基因的转录及蛋白的表达。结果重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-HF2S及重组腺病毒质粒pAd5/F35-HF2S经鉴定均构建正确;经包装及2轮扩增后,重组腺病毒Ad5/F35-HF2S病毒滴度可达1013IU/ml;经PCR及Western blot鉴定表明,重组腺病毒携带的HF2S基因能够在AD-293细胞中表达。结论已成功构建了表达HF2S基因的重组腺病毒Ad5/F35-HF2S,为研究Grb2-SH2结构域在CML中的基因治疗和作用机制奠定了基础。
- 李千音黄峥兰高淼钟梁冯文莉
- 关键词：SH2FKBP重组腺病毒
- 急性早幼粒细胞白血病患者血肿瘤细胞NLS-RARα蛋白的表达与定位被引量：2
- 2015年
- 目的验证急性早幼粒细胞白血病(APL)患者血肿瘤细胞中带核定位信号的维甲酸受体α(nuclear localization signal-retinoic acid receptor alpha,NLS-RARα)蛋白的存在及定位。方法采用蛋白质印迹法验证患者血肿瘤细胞中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)的存在;提取患者血肿瘤细胞核蛋白,蛋白质印迹法检测细胞核中NLS-RARα蛋白的表达;FITC/DAPI双染色免疫荧光法检测患者血肿瘤细胞中NLS-RARα的表达及定位;FITC/PI双染色激光共聚焦法检测患者血肿瘤细胞中NLS-RARα的表达及定位。以重组腺病毒Ad-NE感染的NB4细胞中NLS-RARα蛋白的表达及定位作阳性对照,以正常人血中性粒细胞中野生型RARα的表达和定位作阴性对照。结果阳性对照组设置成功。APL患者血肿瘤细胞中存在NE且有NLS-RARα蛋白表达。细胞免疫荧光法、激光共聚焦法检测结果提示APL患者血肿瘤细胞NLSRARα蛋白的表达主要位于胞核。结论成功用3种方法检测出APL患者血肿瘤细胞中NLS-RARα蛋白的存在并推测其定位,为进一步研究APL的早期诊断及复发监测提供了新思路。
- 王慧刘北忠阳小群朱新瑜马鹏鹏蒋开玲钟梁
- 关键词：维甲酸受体Α核定位信号急性早幼粒细胞白血病
- NLS-RARα与ISCA1相互作用在哺乳动物细胞中的验证被引量：2
- 2009年
- 目的:利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术验证铁硫簇组装蛋白1(ISCA1)与带核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)蛋白间的相互作用.方法:构建含融合蛋白的真核表达载体pCMV-HA-NLS-RARα和pCMV-Myc-ISCA1,酶切及测序鉴定正确后,转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术进一步证实二者之间的相互作用.结果:真核表达载体成功构建并经测序鉴定,转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,用抗Myc mAb进行蛋白印记检测,可以检测到Myc-ISCA1蛋白的表达.结论:分别成功构建了含HA-NLS-RARα与Myc-ISCA1融合蛋白的真核表达载体,并利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术在体外证实了NLS-RARα与ISCA1之间存在相互作用.
- 王东生王春光王翀曹炬张国元王勇钟梁刘北忠
- 关键词：核定位信号受体维甲酸蛋白质相互作用免疫共沉淀
- BPHL与PML-C间相互作用的胞内、外验证
- 2013年
- 目的通过酵母双杂交实验及免疫共沉淀技术验证人联苯样水解酶(BPHL)与缺失核定位信号的人急性早幼粒细胞白血病(PML)基因的coiled-coil的结构域(PML-C)蛋白之间的相互作用。方法将表达PML-C诱饵蛋白及BPHL靶蛋白的重组质粒pGBKT7-PML-C及pACT2-BPHL共转化AH109酵母菌,通过酵母双杂交实验验证两者在活细胞内的相互作用。构建能在人胚肾293细胞中表达带HA标签的PML-C融合蛋白的重组载体pCMV-HA-PML-C,经酶切鉴定正确后,和表达带myc标签的BPHL融合蛋白的重组真核表达载体pCMV-myc-BPHL,共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术验证BPHL与PML-C间的相互作用。结果 pGBKT7-PML-C及pACT2-BPHL质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆。构建的重组表达载体pCMV-HA-PML-C及pCMV-myc-BPHL经双酶切鉴定正确后共转染HEK293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-PML-C相互作用蛋白复合物后,用抗c-myc单克隆抗体进行Western blot检测,可以检测到myc-BPHL的表达蛋白。结论成功构建了pCMV-HA-PML-C及pCMV-myc-BPHL融合蛋白真核表达重组载体,利用酵母双杂交实验及免疫共沉淀技术证实BPHL与PML-C之间存在着相互作用。
- 初晨刘北忠钟梁吴秀娟朱丹吴燕
- 关键词：蛋白质相互作用酵母双杂交
- PML(NLS~–)蛋白在NB4细胞及其裸鼠移植瘤中定位的验证
- 2014年
- 验证中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)切割PML-RARα后,PML(NLS–)蛋白的存在和定位。将质粒pCMV-HA-NE电转染NB4细胞,用Western blot法验证质粒转染成功;提取电转染质粒成功的NB4细胞的胞浆蛋白,用Western blot法检测NB4细胞中PML(NLS–)蛋白的表达;免疫荧光法和激光共聚焦检测电转染质粒成功的NB4细胞中PML(NLS–)蛋白的表达及定位;同时,建立NB4细胞、K562细胞和电转染质粒成功的NB4细胞裸鼠皮下瘤模型,用Western blot、免疫组化法检测PML(NLS–)蛋白在移植瘤组织细胞中的表达与定位。结果表明,Western blot检测电转染质粒pCMV-HA-NE的NB4细胞成功表达NE蛋白;NE酶成功切割PML-RARα,Western blot检测到电转染质粒pCMV-HA-NE的NB4细胞表达PML(NLS–)蛋白;免疫荧光和激光共聚焦均可检测到电转染质粒成功的NB4细胞中PML(NLS–)蛋白定位于细胞胞浆;Western blot和免疫组化法检测到电转染质粒成功的NB4细胞裸鼠移植瘤中的PML(NLS–)蛋白的表达且定位于细胞胞浆,而NB4和K562细胞裸鼠皮下瘤中PML蛋白主要定位于胞核。综上所述,该文成功将质粒pCMV-HA-NE电转染NB4细胞并用Western blot、免疫荧光、激光共聚焦、免疫组化验证PML(NLS–)蛋白存在于NB4细胞胞浆,这一现象可以为急性早幼粒细胞白血病的临床早期诊断与治疗提供新的依据。
- 朱新瑜刘北忠高远梅马鹏鹏王慧钟梁
- 关键词：急性早幼粒细胞白血病NB4细胞
- 全反式维甲酸通过降解核定位信号-视黄酸受体α促进人白血病细胞分化被引量：3
- 2019年
- 目的研究全反式维甲酸(ATRA)对核定位信号-视黄酸受体α(NLS-RARα)过表达细胞分化的作用。方法用慢病毒在NB4细胞和U937细胞过表达NLS-RARα蛋白,用实时定量PCR检测NLS-RARα、CD11b、CCAAT增强子结合蛋白β(CEBPβ)的mRNA水平,Westernblot法检测NLS-RARα、CD11b、CEBPβ蛋白水平;ATRA处理后,用Western blot法检测细胞CD11b蛋白水平以及ATRA对NLS-RARα蛋白的降解情况;用改良Wright染色法观察细胞分化形态。结果慢病毒感染的NB4细胞和U937细胞过表达NLS-RARα蛋白,过表达NLS-RARα可下调细胞CD11b、CEBPβ的表达水平;ATRA可以促进NLS-RARα过表达细胞的分化;ATRA可以降解NLS-RARα且呈时间浓度依赖性。结论ATRA通过降解NLS-RARα促进白血病细胞的分化。
- 李健刘北忠叶娇熊玲余莉华钟鹏强袁桢刘冬冬姚娟娟刘俊梅钟梁
- 关键词：急性早幼粒细胞白血病细胞分化
- PML coiled-coil结构域与RAN结合蛋白9相互作用的验证
- 2012年
- 目的验证前髓细胞性白血病的卷曲螺旋结构域（PML—C）和RAN结合蛋白9（RANBP9）之间的相互作用。方法构建分别表达诱饵蛋白PML—C和靶蛋白RANBP9的载体pGBKT7-PML-C和pACT2-RANBP9，然后转人酵母AH109，培养3～5d后对其是否有胞内相互作用进行检测。将目的片断PML-C和RANBP9再次构建于真核生物表达载体pCMV—HA和pCMV—myc里，然后共转染人胚肾293细胞里（HEK293），最后对其是否有体外相互作用通过免疫共沉淀和免疫印迹进行分析。结果在共转化了质粒pGBKT7-PML—C和pACT2-RANBP9的AH109酵母平板里观察到蓝色菌落生长。用抗HA多克隆抗体对共转染过重组质粒的HEK293细胞的蛋白提取物进行免疫共沉淀，再用抗myc单克隆抗体作为一抗进行免疫印迹，最终检测出融合蛋白myc—RANBP9条带。结论酵母双杂交实验验证了PML—C和RANBP9之间存在胞内相互作用，同时免疫共沉淀实验也从体外验证了它们之间的相互作用。
- 黎亮刘北忠钟梁朱丹王翀高艳军吴秀娟初晨
- 关键词：白血病蛋白质相互作用酵母双杂交系统免疫共沉淀
