陈秀枢
- 作品数：31 被引量：172H指数：7
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- 发文基金：国家高技术研究发展计划浙江省科技厅科技计划项目温州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 壳聚糖微球固定化重组TEM-116型ESBL的研究被引量：2
- 2011年
- 目的利用固定化酶技术,使重组TEM-116型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)在清除环境中残留抗生素的应用中可重复使用,并改善其稳定性。方法以戊二醛为交联剂将重组TEM-116型ESBL固定于壳聚糖微球载体,并采用单因素轮换法和响应曲面法对固定化条件进行优化。结果 4℃条件下,当戊二醛浓度0.54%、交联pH5.4、给酶量0.58IU/g壳聚糖微球、固定化pH6.2时,固定化酶的酶活和回收率分别可达到0.49IU/g和84%(0.49IU/0.58IU)。与游离酶相比,固定化酶的酸碱稳定性和可重复利用性得到显著提高,在pH5.8～7.4范围内酶活性保持在73%～100%的水平,经7次重复性使用,每次1h,酶活力保留高达80%。结论通过固定化酶技术,以重组TEM-116型ESBL为代表的耐药酶能够开发为具有广泛应用前景的环保制剂,以消除外环境中残留的抗生素。
- 徐荣韩冬青王震楼永良陈秀枢
- 关键词：壳聚糖固定化酶超广谱Β-内酰胺酶
- 超广谱Β内酰胺酶SHV-4型基因克隆表达与纯化研究
- 2006年
- 楼永良王震郑颖吕建新陈秀枢尹惠琼邱薇李作生范泉水高国辉陆永绥
- 关键词：超广谱Β内酰胺酶基因克隆表达微生物学诊断食品监测药物生产耐药菌
- 超广谱和耐酶抑制剂β-内酰胺酶的研究进展被引量：13
- 2005年
- 产超广谱和耐酶抑制剂 β -内酰胺酶是革兰阴性菌对 β -内酰胺类抗生素耐药的重要原因。近几十年 ,这些酶的种类迅速增加 ,掌握它们的分类、构效关系和耐药模式等方面的知识 ,对临床合理使用抗生素和防止耐药菌的产生具有重要意义。对超广谱和耐酶抑制剂 β -内酰胺酶的最新分类 ,它们水解 β -内酰胺类抗生素的主要结构特点 ,及其氨基酸位点突变对构效关系的影响进行了介绍。
- 王震吕建新陈秀枢
- 关键词：Β-内酰胺酶酶抑制剂Β-内酰胺类抗生素广谱构效关系位点突变
- TEM-116型ESBL天然酶与重组酶的动力学特性研究被引量：5
- 2007年
- 目的研究TEM-116型ESBL天然酶与重组酶的动力学特性,并比较它们的差异。方法采用紫外分光光度法检测酶促抗生素水解反应,以Lee-Wilson改良双倒数方程数据处理法进行数据处理,测定天然酶与重组酶的Km、Vmax及kcat。观察温度和pH对酶促反应的影响。结果以Lee-Wilson改良双倒数方程数据处理法进行数据处理方便而准确地测定了天然酶与重组酶的Km与Vmax并计算出kcat。温度和pH对天然酶与重组酶酶促反应效应相似。天然酶与重组酶最优先的底物均为头孢哌酮,其次是头孢氨苄;对氨苄西林、阿莫西林、青霉素和哌拉西林有最高的催化效率。结论天然酶与重组酶的动力学参数无显著差异。
- 曾贤铭陈秀枢王震吕建新楼永良孙长贵陆永绥
- 关键词：动力学Β-内酰胺酶重组蛋白Β-内酰胺类抗生素
- 氨基糖苷-(3)-乙酰转移酶II的表达纯化及初步活性
- 2007年
- 用PCR扩增的氨基糖苷-(3)-乙酰转移酶II[aac(3)-II]基因构建了能表达较高活性AAC(3)-II的重组工程菌,并获取重组AAC(3)-II。含pET28a质粒的工程菌转入aac(3)-II基因前后对氨基糖苷类抗生素的最低抑菌浓度进行比较,重组菌超声裂解上清液及其纯化的AAC(3)-II进行SDS-PAGE和Western印迹电泳鉴定。最低抑菌浓度表明转入aac(3)-II基因的工程菌比未转入的工程菌对庆大霉素(gentamicin,GEN)的提高了256倍,对妥布霉素(tobramycin,TOB)及其奈替米星(netilmicin,NTL)提高了16倍,电泳鉴定表明纯化获取的是重组AAC(3)-II,其相对分子质量约为32kDa,纯度大于95%,纯化后的10μgAAC(3)-II,分别在10s内使80μgGEN、30s内使80μgTOB和NTL乙酰化而失去抑菌作用。研究为氨基糖苷类抗生素伴侣的开发研究初步打下基础。
- 王震陈云波查长森邹立林彭颖季敬璋陈秀枢吕建新
- 关键词：最低抑菌浓度氨基糖苷类抗生素
- 血清总蛋白测定不同双缩脲试剂及标准化评价被引量：22
- 1996年
- 在１２家医院考察了国内三种高ＮａＯＨ浓度的双缩脲试剂的应用效果。用这些双缩脲试剂测定的血清总蛋白结果偏高，精密度不如Ｄｏｕｍａｓ配方。用Ｄｏｕｍａｓ双缩脲试剂测得蛋白原始标准（ＳＲＭ９２７ａ）和二份蛋白次级标准的吸光系数均为０．２９８２±０．００１６Ｌｇ￣（－１）（５４０ｎｍ），２５Ｃ时呈色曲线在６０分钟达到平衡。用吸光系数法测定三份定值冻干质控血清的总蛋白值，均较厂方标定值略高。表明有必要统一双缩脲试剂配方和方法，吸光系数法可作为蛋白次级标准的定标方法。
- 陆永绥潘秋英陈秀枢金亚平江摩海杨昌国
- 关键词：蛋白质双缩脲试剂血清诊断
- 高效液相色谱快速测定尿假尿苷被引量：2
- 1996年
- 介绍一种不用苯硼酸亲和柱的高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）快速测定尿假尿苷。本法只需简单的标本预处理，使用ｐＨ３．３磷酸盐缓冲液流动相和２６８ｎｍ检测，每个标本测定只需１２分钟，批内和批间变异分别为３．２７％和４．８６％，线性范围超过１７００μｍｏｌ／Ｌ常见的１０种抗肿瘤药物不干扰测定。２６例男性原发性肝癌患者中有１６例尿假尿苷升高，超过了正常男性＋２ｓ（３５．７μｍｏｌ／ｍｍｏｌ肌酐），结果表明本方法诊断原发性肝癌有较大意义。
- 曾贤铭张丽君邢旺兴陈汉美陈秀枢
- 关键词：高效液相色谱假尿苷
- 体外抗菌素后效应的方法学及其对临床金黄色葡萄球菌的研究被引量：26
- 1991年
- 本文报告了PAE 方法学及其对临床金葡菌的研究结果.氨苄青霉素、头孢雷定、庆大霉素和四环素对金葡菌ATCC25923的PAE 具有可接受的天内和天间重复性。临床11株β-内酰胺酶阴性金葡菌的测定结果中,将PAE<20min 作无意义处理,则抑制蛋白质和RNA 合成的庆大霉素和四环素之PAE 均值明显高于β-内酰胺类的氨苄青霉素和头孢雷定(P<0.01),而类内种间不具有显著性差异(P>0.05),该结论与传统敏感度无关。PAE<20min 的3株MIC 敏感菌株提示由这些菌株引起的临床感染宜持续给药。PAE 高达72min 的SA11菌株尽管对氨苄青霉素耐药,可是MIC 仅为4.0μg/ml 的临床剂量,故预示良好的疗效,相比之下,对四种药物均具较长PAE的SA1。因MIC 为临床剂量难以达到的高度耐药水平,所以提示了不良的疗效.这些结果均说明:PAE 与MIC 的联合应用对确定给药剂量和方式以及评价抗菌素的全面敏感性具有深远的意义.
- 陈秀枢李有武孙长贵
- 关键词：抗菌素葡萄球菌后效应
- SHV-4型ESBL在pET26b/BL(DE3)中的表达纯化及其特性研究被引量：3
- 2007年
- 目的:表达SHV-4型超广谱β-内酰胺酶,对纯化的SHV-4酶进行特性研究。方法:将SHV-4基因克隆到pET26b表达质粒,重组质粒转入E.coli BL21(DE3)构建工程菌,重组工程菌经摇瓶发酵后获得种子菌,种子菌转入发酵罐发酵,当菌体密度OD600为0.8时,加入诱导剂IPTG至终浓度为1.0mmol/L,于37℃培养6h。培养液离心收获菌体沉淀,其超声裂解上清液进行Ni2+亲和层析,获取的SHV-4酶进行分子量、纯度、等电点、最适条件、米氏常数、催化常数等特性进行分析。结果:SDS-PAGE电泳,等电聚焦电泳及系列的酶动力学实验表明SHV-4酶分子量约为30kD,纯度大于95%,等电点为7.9,最适pH值为6.0～8.0,最适温度为37℃,以头孢硝噻吩为底物测定的Km值为2.61×10-6mol/L,Kcat为258s,Kcat/Km为9.88×107mol-1·s-1·vL。结论:重组的SHV-4酶初步满足制成商品酶的条件。
- 王震叶明君邹立林季敬璋陈秀枢吕建新
- 关键词：超广谱Β-内酰胺酶纯化
- 大肠埃希菌氨基糖苷类耐药株aac(3)—Ⅱ基因保守区分析
- 2003年
- 常规分离鉴定47株大肠埃希菌,以标准纸片扩散法(K—B法)对其进行常用氨基糖苷类药物敏感性测定,耐药株经PCR检测aac(3)—Ⅱ基因保守区,扩增产物进行DNA测序分析。初步探讨大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株与aac(3)—Ⅱ基因保守区之间的关系,结果显示本地区大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株的aac(3)—Ⅱ基因保守区具65位G、84位T和65位A、84位C两种基因型,且高度耐药菌株皆为65位G、84位T。
- 陈接根吕建新楼永良彭颖陈秀枢陆永绥
- 关键词：大肠埃希菌氨基糖苷类耐药株药物敏感性
