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人乳腺癌SCID小鼠模型的建立及自杀基因治疗研究: 使用可调控的逆转录病毒载体系统—RevTet-On表达系统,建立Tet-On调节单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSVtk)表达的人乳腺癌细胞株(MCF-7),以及人乳腺癌SCID小鼠模型,进行自杀基因表达调节研究。首先将HS...; 胡维新曾赵军罗赛群陈迁易伟峰; 文献传递

可调控自杀基因的SCID小鼠乳腺癌基因治疗的研究被引量：1: 2003年; 目的 :探讨经强力霉素 (Dox)诱导后 ,丙氧鸟苷 (GCV)对SCID小鼠乳腺癌的调控性治疗作用。方法 :重组逆转录病毒载体 pRevTRE/HSVtk与pRevTet On共转染乳腺癌细胞MCF 7,接种SCID小鼠成瘤后 ,腹腔内分别注射生理盐水(NS)、GCV及Dox +GCV治疗 15d。观测肿瘤体积和组织病理改变及用RT PCR分析肿瘤组织有无HSVtk的表达。结果 :乳腺癌SCID小鼠经Dox +GCV治疗 15d后 ,肿瘤体积明显减小 ,生长受抑 ,组间比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;HE染色发现治疗组肿瘤有局部坏死 ,炎性细胞浸润。RT PCR结果显示Dox诱导后肿瘤组织HSVtk表达较明显。结论 :在Dox的诱导作用下。; 曾赵军胡维新陈迁易伟峰罗赛群; 关键词：TET-ON 丙氧鸟苷 GCV 乳腺癌 SCID鼠

Tet-On调控HSVtk表达的重组腺相关病毒载体的构建和感染活性的检测被引量：7: 2005年; 构建含有Tet基因调节系统及自杀基因HSVtk的重组腺相关病毒载体pAAV TRE HSVtk Tet_On ,并使用PCR技术和限制性内切酶消化进行鉴定。用构建好的重组质粒分别与辅助质粒pAAV_RC、pHelper以磷酸钙共沉淀法转染HEK2 93细胞,进行病毒包装后得到了AAV TRE HSVtk Tet_On重组腺相关病毒,以氯化铯密度梯度离心对包装好的病毒进行纯化。用纯化后的重组腺相关病毒感染乳腺癌细胞株MCF_7后,斑点杂交检测结果显示,HSVtk基因整合进入MCF_7细胞基因组中。有感染活性的重组腺相关病毒能将目的基因转移到宿主细胞中,在Dox诱导下,GCV对AAV感染的MCF_7细胞具有明显的杀伤作用。; 陈迁李子博曾赵军罗赛群胡维新

可调控自杀基因的SCID小鼠乳腺癌的基因治疗实验研究: ＜正＞目的:探讨经强力霉素（Dox）诱导后,丙氧鸟苷（GCV）对SCID小鼠乳腺癌的调控性治疗作用。方法:重组逆转录病毒载体pRevTRE/HSVtk与pRevTet-On共转染乳腺癌细胞MCF-7,接种SCID小鼠成...; 曾赵军胡维新陈迁易伟峰罗赛群; 文献传递

双效逆转录载体的构建和受控自杀基因在乳腺癌细胞中表达的研究被引量：3: 2003年; 目的　构建含有Tet On基因调节系统及自杀基因HSVtk的重组逆病毒载体 ,研究其在乳腺癌细胞中HSVtk基因的受控表达。方法　用PCR方法扩增Tet On基因 ,将其插入 pRevTRE/HSVtk ,形成重组载体pRevTRE/HSVtk/Tet On。用脂质体介导法将 pRevTRE/HSVtk/Tet On导入乳腺癌细胞株 (MCF 7)。经过HygromycinB筛选建立了一株稳定的受四环素衍生物强力霉素 (Doxcycline,Dox)调控表达HSVtk基因的乳腺癌细胞株MCF/TRE/HSVtk/Tet On。用RT PCR的方法检测不同Dox浓度下HSVtk基因的表达 ,以MTT法检测不同Dox浓度下Ganciclovir (GCV)对乳腺癌细胞的杀伤作用。结果　成功构建了pRevTRE/HSVtk/Tet On逆病毒载体。筛选出MCF/TRE/HSVtk/Tet On细胞株 ,该细胞能在Dox的诱导下表达HSVtk基因并被GCV杀伤。结论　HSVtk基因产物可以将无毒性的Ganciclovir (GCV)转变成一种有毒的代谢产物 ,杀死乳腺癌细胞。而该基因的表达受到Tet On调控 ,由强力霉素调节HSVtk基因表达。; 陈迁胡维新罗赛群曾赵军刘静; 关键词：乳腺癌癌细胞

Tet基因调控系统研究进展被引量：3: 2003年; Tet基因调控系统是将原核生物基因调控元件引入真核基因调控领域而构建的一种新型基因表达调控系统。它具有高效、无毒、严密的开 /关功能 ,故被广泛应用于基因表达调控、基因功能研究以及基因治疗中。; 陈迁胡维新; 关键词：基因表达调控基因治疗

逆转录病毒载体介导的HSVtk基因表达及提高重组逆转录病毒滴度的研究被引量：4: 2004年; 目的　探讨逆转录病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSVtk)基因表达及提高逆转录病毒滴度的措施。方法　将HSVtk基因插入逆转录病毒载体pRevTRE中 ,构建重组逆转录病毒载体。通过微乒乓感染法导入包装细胞PA317中 ,以潮霉素B筛选克隆细胞 ,浓缩克隆细胞上清制备重组逆转录病毒。在不同时间及不同丁酸钠浓度下 ,检测分析经筛选获得阳性克隆靶细胞中有无HSVtk基因的表达及如何获得高滴度的重组病毒液。结果　成功构建了重组逆转录病毒载体RevTRE tk ,制备的重组病毒感染靶细胞后有HSVtk基因的表达。结论　通过微乒乓感染法在包装细胞PA317培养 30h和 10mmol L丁酸钠浓度下 ,经冷冻超速离心能获得携HSVtk基因的高滴度逆转录病毒颗粒 ,为其基因治疗的应用及研究奠定了基础。; 曾赵军胡维新罗赛群陈迁; 关键词：TK基因逆转录病毒载体高滴度介导包装细胞潮霉素

重组腺相关病毒载体pAAV/TRE/HSVtk/tet-On的构建及包装的研究: ＜正＞目的:探讨携带HSVtk基因的重组腺相关病毒载体在基因治疗中的应用。方法:使用PCR技术从pRevTet-On扩增Tet-On基因片段,回收Tet-On基因片段,以ClaI和Hpa I消化后走向克隆插入质粒pRe...; 陈迁胡维新罗赛群曾赵军; 文献传递

可调控重组腺相关病毒对MCF-7细胞基因转染效率及表达的研究: 2007年; 目的探讨Tet调控下自杀基因HSVtk重组腺相关病毒载体(rAAV/HSVtk/Tet-On)对人乳腺癌细胞株(MCF-7)的作用。方法将HSVtk和Tet-On基因分别定向克隆入腺相关病毒质粒pAAV MCS中,构建重组腺相关病毒载体pAAV/TRE/HSVtk/Tet-On,与辅助质粒pAAV-RC、pHelper和包装细胞293进行包装、纯化。用β半乳糖苷酶原位染色法检测报告基因rAAV/LacZ在MCF-7中的表达,计算其基因转染效率。采用斑点杂交、RT-PCR检测MCF-7细胞基因组中HSVtk基因整合、病毒滴度及其表达。结果rAAV/HSVtk/Tet-On病毒滴度为2.38×1011particle/ml,LacZ基因在感染的MCF-7中能持续表达,感染效率为20%～30%。纯化后的重组腺相关病毒感染MCF-7后,能将目的基因转移到靶细胞中,并在Dox诱导下,使GCV对rAAV感染的MCF-7细胞具有明显的杀伤作用。结论HSVtk/Tet-On自杀基因调控系统可通过重组腺相关病毒载体成功转染人乳腺癌细胞株MCF-7,使其HSVtkmRNA表达增加,在Dox诱导下,GCV对rAAV(≥104v.p/cell)感染的MCF-7细胞具有明显的杀伤作用。; 曾赵军李子博胡维新罗赛群陈迁; 关键词：腺相关病毒乳腺肿瘤基因治疗

携带自杀基因的重组AAV载体的构建及其在乳腺癌基因治疗中的研究: 乳腺癌是人类常见的一种恶性肿瘤，也是女性主要恶性肿瘤之一。手术、放疗、化疗构成了肿瘤治疗的三大模式。在现代分子生物学和基因工程技术飞速发展的推动下，肿瘤的生物学治疗日益受到人们的重视，显示出良好的应用前景，成为肿瘤治疗的...; 陈迁; 关键词：TET-ON TET-OFF 腺相关病毒载体基因治疗; 文献传递

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陈迁