陈鹤
- 作品数：23 被引量：41H指数：4
- 供职机构：安徽医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生哲学宗教文化科学更多>>
- MAST3对胃癌细胞SGC-7901细胞增殖及迁移的作用被引量：1
- 2020年
- 目的探讨MAST3对胃癌细胞SGC-7901的增殖及迁移作用。方法使用Western blot及qRT-PCR法检测MAST3在胃癌组织中的表达情况,进一步将MAST3-RNAi和pEx-3-MAST3转染到SGC-7901细胞中,分别使用qRT-PCR、Western blot检测CyclinD1、C-myc及MMP-9、MMP-3的表达,观察MAST3对SGC-7901的增殖及迁移作用;通过流式细胞仪检测细胞周期。结果 Western blot结果显示,MAST3在胃癌组织中高于癌旁组织(P<0.01),且在TGF-β1刺激后表达也随之增加。使用MAST3-RNAi抑制MAST3表达后,CyclinD1和C-myc蛋白表达明显低于对照组(P<0.01),且S期和G2/M期细胞明显降低,同时MMP9和MMP3蛋白表达也明显低于对照组;使用pEx-3-MAST3过表达MAST3后,CyclinD1和C-myc蛋白表达明显高于对照组(P<0.01),且S期和G2/M期细胞升高,MMP-9和MMP-3蛋白表达也明显高于对照组。结论 MAST3能够调控胃癌细胞SGC-7901细胞的增殖及迁移能力。
- 王磊陈鹤张敏王中新
- 关键词：增殖迁移
- 应用免疫磁珠分离法纯化弓形虫速殖子的研究被引量：1
- 2014年
- 目的用免疫磁珠分离法分选弓形虫速殖子,以去除宿主细胞成分,并尽可能对虫体的生物学特性无不良影响,为弓形虫的基础与临床研究提供技术基础。方法采用弓形虫Wh3株(China 1基因型)速殖子感染小鼠,提取腹腔液,常规方法制备速殖子可溶性抗原,免疫家兔,获得兔抗弓形虫多克隆IgG抗体。用抗体包被的免疫磁珠对小鼠腹腔液内弓形虫速殖子进行纯化,比较其纯度、回收率、虫体活力、毒力与感染性。结果用免疫磁珠分离技术纯化弓形虫速殖子后,其纯度提高到98.2%,细胞清除率为96%,虫体回收率为73.5%;用内盐法(MTS)细胞增殖与毒性检测试剂盒检测分离后的速殖子活性为95.6%。定量分组感染小鼠后死亡时间无显著性差异。结论免疫磁珠分离的速殖子纯度、细胞清除率和虫体回收率较高,能有效去除宿主细胞,且对速殖子的活性和毒力无影响。该法操作简便快速,无需昂贵的仪器设备,具有较大的实用价值。
- 楼研沈继龙程维晟刘芳陈鹤罗庆礼王林
- 关键词：弓形虫速殖子纯化免疫磁珠分离
- 刚地弓形虫China 1基因型成囊株在小鼠体内的动态分布被引量：4
- 2012年
- 目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF级CD1雌性小鼠50只,于感染后第2、4、7、10、14、21、35、50和72天,分别大体观察小鼠健康状况并测定体重;颈椎脱臼法处死小鼠,脑组织压片观察弓形虫包囊形成时间,计算成囊率,测量包囊直径;荧光定量PCR和组织接种方法检测弓形虫在血液、心、肝、脑和淋巴结组织中的动态分布。结果实验小鼠感染后第7天体重减轻(3.650±0.252)g;第10天[(1.730±0.017)g]与第14天体重差值[(-0.390±0.554)g]比较,有统计学意义(P<0.05)。感染后第21天,在脑组织中查获包囊,成囊率为80%,直径为20～40μm;至感染后第35天,小鼠成囊率增为100%,包囊直径为50～60μm。感染后第2天,TgCtwh1虫体即出现在血液、心、肝和淋巴结组织中,拷贝数分别为3.510±0.152、4.100±0.198、4.220±0.209和4.960±0.052,感染后第4天见于脑组织(3.800±0.154);血液中的虫体在第7天达峰值(5.240±0.115),随后逐渐下降,至第35天消失;心和脑组织中的虫体分别于第14天和第10天达峰值后(5.640±0.214和5.790±0.060)维持相对稳定的水平;肝和淋巴组织中的虫体分别于第7天和第10天达峰值(5.310±0.038和6.200±0.152),此后虫体逐渐减少,至第50天转阴。结论流行中国的弓形虫China 1基因型成囊株在感染小鼠体内虫血症可持续至少21 d,感染后第21天首次在小鼠脑组织内检测到包囊。
- 王林霍星星陈兆武陈鹤余莉宋晓蓉Faustina Halm-Lai罗庆礼沈继龙
- 关键词：刚地弓形虫基因型荧光定量PCR
- WPBL教学法在《临床血液学检验》教学中的应用研究被引量：4
- 2018年
- 为了提高学生的学习效果,培养学生解决实际问题的能力和自主学习的能力,在总结多年教学经验的基础上,将WPBL与案例教学法整合,建立一套以案例为先导,问题为基础,教师为引导,学生为中心的《临床血液学检验》教学新模式,并采用问卷调查的形式对教学效果进行评估。结果表明,以案例为先导的WPBL教学法在《临床血液学检验》的教学中获得良好的教学效果。
- 赵燕陈鹤蔡朝阳
- 关键词：案例教学法临床血液学检验
- Chinese1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的基因克隆表达及生物信息学分析
- 2015年
- 目的构建弓形虫Chinese 1基因型Tg Ct Wh3(以后均简称Wh3)株棒状体蛋白(rhoptry protein,ROPs)16的原核和真核重组表达质粒及其3D结构。方法参照ROP16序列分别设计引物,采用PCR从弓形虫Chinese 1基因型Wh3株基因组DNA中扩增出编码ROP16的基因片段,克隆至p MD18-T载体;经PCR及测序分析鉴定;阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达载体p ET-28a和真核表达载体p EGFP-C2,分别转化大肠杆菌BL21和DH5α,PCR和酶切鉴定转化菌落插入的序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达;将构建的真核重组质粒经脂质体转染293T细胞,观察其在细胞中表达;采用生物信息学方法分析构建了蛋白的3D结构。结果各组均PCR扩增出约2.1 kb ROP16基因的特异片段,序列检测结果均正确;分别亚克隆到原核表达载体p ET-28a和真核表达载体p EGFP-C2中,成功构建了Chinese 1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的原核表达质粒和真核表达质粒;原核表达质粒在大肠杆菌中表达了ROP16的融合蛋白;真核表达质粒在293T细胞中成功表达,成功构建出ROP16基因的3D结构图。结论以p ET-28a和p EGFP-C2为载体,分别成功构建并表达了ROP16的原核和真核重组质粒,并构建出其3D结构图。
- 唐媛媛莫绪维陈鹤李群蔡亦红沈继龙
- 关键词：弓形虫克隆生物信息学分析
- 弓形虫ROP16_(Ⅰ/Ⅲ)DNA疫苗不能诱导小鼠有效的保护性免疫被引量：1
- 2015年
- 目的利用ROP16I/III基因真核表达重组质粒免疫BALB/c雌性小鼠,检测小鼠体液免疫和细胞免疫,评估ROP16I/III作为潜在的分子疫苗的价值。方法克隆Chinese 1型弓形虫ROP16I/III,将其插入真核表达载体pEGFP-C2中构建重组质粒pEGFP-ROP16I/III,脂质体法转染T293细胞并观察体外表达。Western blotting分析鉴定。将36只SPF级小鼠随机均分为:1PBS组;2空质粒组;3pEGFP-ROP16I/III组。每2周肌注免疫1次(100μg/只),共3次;于免疫前及每次肌注前1d和末次免疫后2周收集小鼠血清,间接ELISA法检测血清抗弓形虫IgG。于末次免疫2周后取小鼠脾脏,分离淋巴细胞培养测细胞因子。剩余小鼠腹腔注射Chinese 1型弓形虫Wh3株速殖子1 000个/只,观察小鼠攻击感染后的存活时间和存活率。结果真核表达载体构建成功,体外见到重组质粒pEGFP-ROP16I/III在T293细胞的表达;pEGFP-ROP16I/III末次免疫后血清中IgG水平及脾淋巴细胞细胞因子均无明显升高(P>0.05);攻击感染后,免疫组小鼠比对照组的存活时间无延长(P>0.05);生物信息学分析发现ROP16I/III缺乏线性B细胞表位。结论 Chinese1型弓形虫的ROP16I/III由于其分泌的定位和结构特点,不能诱导小鼠产生有效的抗Wh3株攻击感染的免疫保护。
- 周芹芝李曼陈鹤都建罗庆礼沈继龙
- 关键词：弓形虫分子疫苗
- 慢性弓形虫感染小鼠小胶质细胞的活化与炎症因子的表达被引量：6
- 2013年
- 目的探讨慢性弓形虫感染小鼠小胶质细胞的活化与炎症因子的表达。方法将30只ICR小鼠随机分成慢性弓形虫感染组和健康对照组,每组15只,感染组小鼠每只经口服感染弓形虫TgCtwh6株包囊30个,对照组喂饮等量生理盐水0.3 ml。感染后60 d,分离脑组织,应用免疫组化法分析小胶质细胞的数量和形态变化,逆转录PCR(RT-PCR)检测脑组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和α肿瘤坏死因子(TNF-α)水平,免疫荧光标记和蛋白质印迹法(Western blotting)检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果免疫组化法检测结果显示,感染组小鼠的皮层区和海马区的离子钙接头分子(Iba-1)阳性细胞数(即小胶质细胞)(16.5±0.8和17.9±1.1)显著高于对照组(8.4±0.2和10.3±0.8)(P<0.05),且细胞呈明显活化状态,胞体增大,分支增多。RT-PCR结果显示,弓形虫感染组IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA转录水平(0.862±0.169、0.407±0.158和0.305±0.073)均显著高于对照组(0.149±0.030、0.037±0.008和0.001±0.001)(P<0.05)。慢性弓形虫感染小鼠的脑组织中iNOS蛋白表达水平(0.252±0.164)显著高于对照组(0.043±0.004)(P<0.05)。免疫荧光标记结果显示,iNOS蛋白均由小胶质细胞表达。结论慢性弓形虫感染小鼠脑内小胶质细胞显著活化,IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子和iNOS水平升高。
- 张义华王璐汪学龙沈继龙张倩孔兰婷王为为陈鹤
- 关键词：刚地弓形虫慢性感染小胶质细胞炎症因子
- FSCN1与钌配合物在抗胃癌中的作用及相关性研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨FSCN1在胃癌增殖中的作用,并研究FSCN1与钌配合物在胃癌中的相互作用。方法通过荧光定量PCR及Western blot法检测胃癌组织中FSCN1的表达水平;MTT、Ed U法检测干扰FSCN1后细胞增殖能力变化;用钌配合物处理SGC-7901后检测FSCN1 mRNA、蛋白表达水平及细胞的增殖能力;siRNA抑制FSCN1的表达,过表达FSCN1后检测钌配合物对细胞的增殖能力影响。结果荧光定量PCR及Western blot法均显示胃癌组织中FSCN1表达水平显著高于癌旁组织;MTT与Ed U法结果显示,与si NC组比较,干扰FSCN1后细胞的增殖受到明显抑制(P<0.01);钌配合物处理SGC-7901后,定量PCR结果显示,与si NC组比较,FSCN1表达水平受到抑制(P<0.01),MTT法结果显示,与si NC组比较,细胞增殖受到抑制(P<0.01);MMT法结果显示过表达FSCN1后抑制钌配合物对细胞增殖能力的影响。结论 FSCN1具有促进胃癌细胞增殖的能力,钌配合物通过抑制FSCN1的表达起抑癌作用。
- 张敏徐元宏董兵斌卢敏陈鹤
- 关键词：胃癌钌配合物SGC-7901
- 线上线下混合式教学模式在实验诊断学教学中的应用
- 2023年
- 目的:探讨线上线下混合教学模式在实验诊断学教学应用情况。方法:在某医科大学采用线上线下混合教学,并通过自制调查问卷进行教学方式认可度、满意度和教学建议调查综合评价线上线下教学效果,同时采用统一难度试卷与线上教学组两届学生的成绩进行对比,并进行统计分析。结果:和线上教学模式比较,线上线下混合教学模式学生的满意度更高(P<0.01);同时混合教学模式有助于学生对知识点的理解和帮助,混合教学模式学生考试成绩优于线上教学模式的学生,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:通过实践发现线上线下混合教学方式能够调动学生学习积极主动性,发散学生思维并且提高教学质量。
- 陈鹤王中新贾中伟陆琼
- 关键词：教学模式实验诊断学
- 小胶质细胞活化介导神经元凋亡致弓形虫脑炎的研究
- <正>目的弓形虫是一种专性细胞内寄生虫原虫,能感染所有的恒温脊椎动物。免疫功能正常的个体感染后通常表现为无症状或者是良性自限性疾病。慢性感染者一旦出现免疫力低下,弓形虫隐性感染活化会导致致死性弓形虫病。弓形虫脑炎是免疫功...
- 沈继龙张义华张倩陈鹤唐媛媛莫绪维罗庆礼
- 文献传递
