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顾美荣: 作品数：56 被引量：16H指数：3; 供职机构：北京民海生物科技有限公司更多>>; 发文基金：北京市科技计划项目国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>

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重组肠道病毒71型疫苗的免疫原性和保护效果研究被引量：3: 2018年; 目的评价重组肠道病毒71型(EV-A71)疫苗的免疫原性和保护效果.方法将重组EV-A71疫苗按0、14d程序免疫BALB/c小鼠,采用微量细胞病变法测定一针免疫、二针免疫14d后的EV-A71中和抗体效价,应用酶联免疫吸附法测定二针免疫14d后小鼠脾单个核细胞分泌的细胞因子水平.乳鼠颅内攻击EV-A71病毒,同时将疫苗免疫后小鼠血清通过腹腔注射乳鼠,计算乳鼠生存率及半数动物保护性抗体水平.结果重组EV-A71疫苗一针免疫小鼠后诱导产生的EV-A71中和抗体阳转率即达100%,二针免疫小鼠后诱导产生的EV-A71中和抗体效价显著高于一针免疫(P=0.000),疫苗可诱导小鼠产生Th1和Th2类细胞因子应答.乳鼠颅内攻击20μl原倍EV-A71/M6病毒,同时将疫苗免疫小鼠血清160、40、10、2.5、0.625和0.15625U分别经腹腔注射乳鼠,连续观察22d,乳鼠生存率分别为100%、100%、70%、20%、0和0,对照组乳鼠于第8天全部死亡,采用Reed-Muench法计算平均半数动物保护中和抗体效价(ED50)为5.59U.结论重组EV-A71疫苗可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,并可保护乳鼠免受EV-A71病毒感染.; 顾美荣高帆张改梅肖霞李国顺陈磊郭林肖海峰刘建凯毛群颖郑海发; 关键词：手足口病肠道病毒71型疫苗免疫原性体液免疫细胞免疫

重组肠道病毒71型疫苗(汉逊酵母)抗原含量测定方法的建立被引量：4: 2018年; 目的建立重组肠道病毒71型疫苗(EV-A71)(汉逊酵母)抗原含量测定方法,用于重组EV-A71(汉逊酵母)疫苗的质量控制.方法以抗EV-A71(汉逊酵母)多克隆抗体为包被抗体,经辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的抗EV-A71单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),确定定量限度及最佳定量范围,并对该方法的准确度、精密度和特异性进行方法学验证.结果线性范围为5~80U/ml,线性和平行性良好.定量下限为5U/ml,检测不同浓度的EV-A71国家抗原标准品,回收率在88%~115%,准确度良好;重复性和中间精密度测定,其变异系数均小于15%;与重组柯萨奇病毒A16、甲型肝炎灭活疫苗(HAV)、冻干水痘减毒活疫苗(VZV)、Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)、五价口服轮状病毒减毒活疫苗(RV)等疫苗、Tris缓冲液、PBS缓冲液、破碎液、汉逊酵母宿主蛋白(HCP)均无交叉反应,其专属性良好.结论建立了重组EV-A71疫苗(汉逊酵母)抗原含量测定方法并进行了初步验证,为疫苗研制中抗原含量的质控提供了可靠的检测手段.; 张改梅陈磊高帆姚昕李国顺顾美荣毛群颖刘建凯郑海发; 关键词：疫苗汉逊酵母抗原含量

HPV16L1-f蛋白及其编码基因与应用: 本发明提供了一种人乳头瘤病毒16型L1蛋白HPV16L1-f及其编码基因与应用。该HPV16L1-f蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其编码基因如序列表中SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了HPV16L...; 顾美荣宋琳琳孟凡童戚治国张凯泉魏文进刘建凯; 文献传递

RD细胞库的建立及其相关研究: 2022年; 目的建立人恶性胚胎横纹肌瘤(human rhabdomyosarcoma,RD)细胞工作细胞库,并对RD细胞工作细胞库应用于肠道病毒灭活疫苗滴度的测定及中和抗体检测的可行性进行相关研究。方法建立工作细胞库,按照《中华人民共和国药典》对其进行检定,包括细胞活力、细胞形态、无菌检查、支原体及细胞外源病毒因子检查等,并对RD细胞生长曲线、传代稳定性及肠道病毒敏感性进行研究。结果实验建立的RD细胞工作细胞库呈梭形、大的多核上皮样细胞形态,有良好的生长状态,细胞活率为98.85%,无菌检查、支原体以及细胞外源病毒因子指标均符合规定。RD细胞生长曲线呈S型,细胞在3~6 d进入对数生长期,而后到达平台期,细胞倍增时间为27 h,连续传20代细胞形态正常。不同代次RD细胞检测肠道病毒71型(enterovirus 71,EV-A71)、柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus 6,CVA6)、柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus 10,CVA10)、柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus 16,CVA16)肠道病毒的滴度均值分别为(8.20±0.07)、(7.84±0.12)、(7.93±0.09)、(7.34±0.16)lgCCID/ml,变异系数(coefficient of variation,CV)在0.88%~2.12%。结论建立的工作细胞库符合《中华人民共和国药典》规定,传代稳定性良好,RD细胞对肠道病毒较为敏感,可以用于肠道病毒疫苗相关病毒滴度的测定及疫苗中和抗体检测.; 谢学超赵丽丽陈磊曹慧佼顾美荣张改梅; 关键词：横纹肌肉瘤细胞细胞库

柯萨奇病毒A16型毒株及其应用: 本发明涉及生物技术领域，具体公开了柯萨奇病毒A16型毒株及其应用。本发明的柯萨奇病毒A16型毒株，其P1结构蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。该毒株型内和型间交叉性良好、遗传稳定，可作为柯萨奇病毒A16型血清...; 张改梅刘建凯梁祁潘红星张黎赵丽丽谢学超陈磊马廷涛顾美荣

一种汉逊酵母表达系统及其构建方法和应用: 本发明提供了一种汉逊酵母表达系统及其构建方法和应用，该表达系统含有尿嘧啶缺陷型汉逊酵母菌AU-0501，保藏编号为CGMCC No.7013。本发明提供的尿嘧啶缺陷型汉逊酵母菌具有突变位点明确、回复突变率低、遗传稳定性好...; 顾美荣宋琳琳孟凡童戚治国张凯泉魏文进刘建凯; 文献传递

一种抗柯萨奇病毒A10型的单克隆抗体及其制备方法和应用: 本发明涉及抗体技术领域，具体涉及一种抗柯萨奇病毒A10型的单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明的抗体或其抗原结合片段的重链互补决定区CDR1、CDR2、CDR3具有如SEQ ID NO.1‑3所示的氨基酸序列，轻链互补决...; 张改梅高帆李国顺陈磊赵丽丽谢学超马廷涛顾美荣刘建凯

标准质粒及制备方法、使用该质粒检测重组EV71疫苗外源基因拷贝数的方法及方法的应用: 本发明属于肠道病毒71型的制备技术领域，特别涉及标准质粒及制备方法、使用该质粒检测重组EV71疫苗外源基因拷贝数的方法及应用。本发明的标准质粒主要由内源基因MOX、外源基因P1和外源基因3CD经PCR扩增后连接于克隆载体...; 张改梅顾美荣刘建凯朱征宇甘建辉郑海发

肠道病毒71型灭活疫苗(Vero细胞)抗原含量检测方法的建立及应用: 2023年; 目的建立肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV-A71)灭活疫苗(Vero细胞)抗原含量检测方法并对其进行方法学验证及初步应用。方法以抗EV-A71兔多克隆抗体为包被抗体,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的抗EV-A71鼠单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA并验证其线性范围、专属性、准确度、精密度及耐用性等。通过检测EV-A71疫苗原液及研发生产工艺各中间制品的EV-A71抗原含量评价该方法的适用性。结果包被抗体与酶标抗体最佳稀释度分别为1∶5000和1∶10000。抗原为5~80 U/mL时,线性良好;与同为肠道病毒的其他抗原不存在交叉反应,专属性良好;对不同浓度抗原进行6次测定,其回收率在90%~100%,准确度良好;不同实验员对不同浓度抗原样品检测3次,CV均<11%,精密度良好;针对不同影响因素设计耐用性试验,回收率均在80%~120%,耐用性良好。该方法检测EV-A71疫苗原液和制备过程中的中间制品均具有良好的线性和平行性,表明该方法具有良好的适用性。结论建立了EV-A71疫苗(Vero细胞)抗原含量检测方法并进行了初步应用,为EV-A71疫苗和HFMD多价疫苗的研发及质量控制提供了可靠的检测方法。; 赵丽丽谢学超陈磊李国顺顾美荣张改梅; 关键词：肠道病毒71型双抗体夹心酶联免疫法抗原含量

重组CA16病毒样颗粒的纯化、在疫苗中的应用及疫苗: 本发明提供重组CA16病毒样颗粒的纯化方法、在疫苗中的应用及疫苗。通过将重组表达的工程菌高密度发酵培养和甲醇诱导表达CA16类病毒颗粒蛋白，离心收集菌体进行高压均浆破碎，上清液经超滤、离子交换层析、羟基磷灰石层析和分子筛...; 李国顺顾美荣张改梅刘司航刘俊杰马廷涛郭林简伟肖海峰刘建凯朱征宇甘建辉郑海发; 文献传递

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