马戈甲
- 作品数：8 被引量：27H指数：2
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向人VEGF165的SiRNA慢病毒的构建和鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:构建靶向VEGF基因的SiRNA慢病毒载体,并包装病毒。方法:针对已经筛选确定的SiRNA有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,经双酶切后与PGC SIL-GFP慢病毒载体连接,构建慢病毒载体PGCSIL-SiVEGF,以293T细胞包装得到干扰病毒LV-SiVEGF,根据细胞表达绿色荧光蛋白水平计算病毒滴度;病毒感染人脐静脉内皮细胞HUVEC,通过定量RT-PCR检测VEGF的mRNA表达。结果:测序结果表明,靶向人VEGF的SiRNA慢病毒载体构建成功,包装后的慢病毒滴度为2×109 ifu/μl;感染HUVEC细胞后,实验组和对照组相比VEGF mRNA表达水平显著降低。结论:成功构建人VEGF SiRNA慢病毒LV-SiVEGF。
- 刘蓓马戈甲宋保强
- 关键词：VEGF慢病毒载体RNA干扰技术
- 基因移植人血管内皮细胞生长因子斜备小鼠新生血管模型
- 2011年
- 目的探讨血管内皮细胞生长因子基因用重组慢病毒为载体移植制备新生血管动物模型的可行性。方法构建重组慢病毒介导的人血管内皮细胞生长因子（humanvascularendothelialgrowthfactor，hVEGF165）基因，并转染小鼠成纤维细胞（NIH／3T3）。利用流式细胞仪挑选转染成功的细胞，将转染成功的表达人VEGF165的NIH／3T3细胞植入C57小鼠的骨骼肌，建立小鼠的新生血管模型。在新生血管模型上，用ELISA的方法进行小鼠血清VEGF测定。观察瘤体组织形态学。用免疫组化的方法观察是否有表达CD31的细胞。结果经酶切鉴定、聚合酶链反应（PCR）及基因测序证实Lenti—VEGF165-GFP构建成功，包装后测定滴度为6．19×10^7TU／ml。用基因移植的方法成功建立了稳定的小鼠新生血管模型，并证实小鼠外周血中有VEGF的分泌。14d后细胞植入处局部肿胀。44d后HE染色发现细胞植入部位有血管组织的新生，免疫组化显示有围成规则或不规则管状表达CD31的细胞。结论将表达人VEGF165的NIH／3T3细胞植入C57小鼠的骨骼肌，可以产生稳定有效的新生血管模型。
- 谢芳杨力汤苏阳郑岩易成刚夏炜潘勇马戈甲杨阳
- 关键词：血管内皮细胞生长因子小鼠成纤维细胞
- 抗菌肽的研究进展被引量：21
- 2005年
- 尹文徐晨马戈甲
- 关键词：抗菌肽抗菌抗病毒抗肿瘤药物开发
- 利用RNAi技术下调VEGF表达对血管瘤内皮细胞的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:培养人血管瘤内皮细胞(HemECs),利用RNA干扰技术下调HemECs中VEGF的表达,观察其对血管瘤内皮细胞的影响。方法:利用组织块法培养HemECs,鉴定、筛选和纯化后,分为A、B、C三组,分别为转染组、空脂质体组和对照组。利用脂质体法将pGCsi U6/Neo/dsRED-VEGF真核表达质粒转染到内皮细胞中。通过荧光显微镜大体观察转染效率和细胞生长情况、ELISA法检测细胞分泌VEGF蛋白和MTT法检测质粒转染对HemECs的影响。结果:转染组第五天转染细胞达到总细胞80%以上,但是细胞凋亡逐渐增加。第七天细胞稀少,漂浮死细胞增多。转染阳性细胞减少,细胞整体状态差。转染组培养上清中VEGF蛋白浓度在转染的第1、3、5、7天分别为141.3±7.82、92.34±5.71、68.07±5.95及40.65±6.71pg/ml。MTT法检测各组490nm的OD值在1、3、5、7天均有统计学差异(P<0.05)。结论:转染后的细胞活性降低,通过对其分泌的VEGF蛋白的测量发现,转染组VEGF蛋白明显下降,同时,细胞活力受到影响,漂浮的死细胞增多。这些都可以说明,VEGF在血管瘤内皮细胞生长、增殖之中起着非常重要的作用,这也为我们治疗血管瘤提供一个新的靶点。
- 马戈甲易成刚刘蓓杨力
- 关键词：RNAI血管瘤内皮细胞细胞转染
- VNP对碾压撕脱皮瓣P-选择素表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨血管钠肽(Vasonatrin peptide,VNP)对碾压撕脱伤皮瓣P-选择素表达的影响。方法:24只大鼠随机分为3组(n=8),分别为SHAM手术组、碾压撕脱组及VNP+碾压撕脱组,于术前、术后12h及24取材,用免疫组织化学染色标记不同方式处理组皮瓣中P-选择素的表达。结果:碾压撕脱组皮瓣中P-选择素表达水平较高,而采用VNP治疗组皮瓣中P-选择素表达量较前者显著降低(P<0.05)。结论:VNP可显著降低碾压撕脱皮瓣中P-选择素的表达量,进而减轻炎症反应并抑制血栓形成,可为临床上提高碾压撕脱皮瓣成活率提供一种新的治疗思路。
- 王师平兰志勇赵茜夏炜任静马戈甲孟宝玺郭树忠潘宝华
- 关键词：皮瓣P-选择素
- 血管钠肽(VNP)对大鼠碾压撕脱皮瓣微循环保护作用的机制研究
- 目的:探讨血管钠肽(Vasonatrin peptide,VNP)对碾压撕脱伤皮瓣微循环保护的作用。方法:39只大鼠随机分为3组(n=13),分别为SHAM手术组、碾压撕脱组及碾压撕脱+VNP治疗组。在大鼠术后不同时间点...
- 王师平兰志勇赵茜夏炜孟宝玺马戈甲任静郭树忠潘宝华
- 文献传递
- 小鼠Mmp-9 shRNA重组慢病毒包装、筛选及干扰效果检测
- 2013年
- 目的:设计、筛选、构建并鉴定Mmp-9小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),并构建其慢病毒表达载体,为血管化疾病的防治提供理论依据及实验室数据。方法:针对基质金属蛋白酶9靶基因设计siRNA序列,并合成小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)结构的DNA,与经AgeΙ和EcoRΙ酶切的pSIL-RFP连接、转化大肠杆菌感受态细胞,构建成携带Mmp9-shRNA慢病毒质粒载体(pSIL-RFP/MMP9-shRNA),PCR及测序鉴定后,Western blot筛选出携带最佳siRNA的慢病毒质粒载体,并利用慢病毒包装质粒(pHelper1.0和pHelper2.0)将其制备成MMP9-shRNA慢病毒,并测定病毒滴度为1×1010pfu/l。结果:PCR和DNA测序证实合成的含基质金属蛋白酶9短发卡RNA慢病毒载体寡核苷酸链正确插入pSIL-RFP载体,表明实验成功构建基质金属蛋白酶9RNA干扰慢病毒表达载体。结论:成功的构建并筛选出针对小鼠Mmp9基因沉默的特异性shRNA重组慢病毒,为血管化性疾病的防治研究提供基础。
- 张冠华易成刚马戈甲杨力
- 关键词：基质金属蛋白酶9RNA干扰慢病毒属
- 不同剂量雌激素对裸鼠血管瘤模型的影响被引量：3
- 2010年
- 目的:建立人毛细血管瘤裸鼠移植模型,探讨血管瘤裸鼠模型建立的最佳条件。方法:将手术切除的1例雌激素受体阳性的儿童增生期血管瘤组织制成组织块,植入20只裸鼠(BALB/cnudemice)皮下,每只4处,将20只裸鼠分为4个实验组。实验1组在移植后给予普通鼠食喂养;实验2组在1组基础上每周肌注雌二醇0.01mg;实验3组在1组基础上每周肌注雌二醇0.1mg;实验4组在1组基础上每周肌注雌二醇1mg,于移植后第30、60、90天切取移植瘤。移植瘤标本进行病理学光镜检查,用血管内皮细胞单克隆抗体CD31、CD34进行免疫组化染色。结果:移植后早期各组标本内皮细胞大量变性、坏死,30天后,单纯喂养的实验1组及实验2组部分移植瘤开始吸收或形成脓肿及纤维化。实验3、4组移植瘤开始缓慢生长。90天后实验1组、实验2组移植瘤均未成活,实验4组移植瘤部分成活,而实验3组移植瘤全部成活。光镜下成活的移植瘤与原血管瘤组织生物学特点相似。结论:不同剂量的雌激素对血管瘤裸鼠移植模型的建立有一定影响,适量的应用雌激素可建立稳定的人血管瘤裸鼠移植动物模型。该模型可以应用到基础和临床的血管瘤研究。
- 马戈甲易成刚孙智勇裴蛟淼王师平夏炜郭树忠杨力
- 关键词：血管瘤动物模型裸鼠雌激素
