黄亮群
- 作品数：13 被引量：49H指数：4
- 供职机构：中南大学湘雅医学院医学遗传学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- p11融合蛋白表达、纯化及抗血清的制备被引量：6
- 2002年
- 目的 :表达GST p11和 6xHis p11融合蛋白并制备GST p11特异性抗体。方法 :将人p11基因克隆入两种原核表达载体pGEX 4T 2和pQE30 ,分别在大肠杆菌BL2 1和M15中表达 ,用GlutathioneSepharose 4B和Ni NTAagar ose亲和柱分别纯化目的蛋白。利用纯化的GST p11蛋白制备多克隆抗体。结果 :得到高表达量的融合蛋白 ,经亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST p11和 6xHis p11蛋白。以GST p11蛋白免疫新西兰兔得到p11多克隆抗体 ,Westernblotting证实该抗体能够识别 6xHis p11蛋白 ,具有较高特异性。结论 :利用原核表达人p11融合蛋白制备的p11多克隆抗体具有较好的特异性 。
- 谭志平黄亮群郑多房海燕夏昆夏家辉
- 关键词：纯化抗血清
- 酵母双杂交技术分析耳聋基因功能的实验研究被引量：2
- 2004年
- 目的 在耳聋基因功能的蛋白质相互作用研究领域建立酵母双杂交实验技术 ,探讨第三代酵母双杂交系统在该领域的应用价值。方法 利用第三代MATCHMAKERGAL4酵母双杂交系统 ,以最常见的耳聋基因GJB2(Cx2 6 )为诱饵 ,以人胎脑cDNA文库为猎物 ,钓取Cx2 6的相互作用蛋白质的阳性克隆 ,DNA测序阳性克隆并行生物信息学分析。结果 从胎脑文库筛选到Cx2 6互作蛋白的 5 6个阳性克隆 ,对其中 2 6个克隆分析认定为 11个独立克隆 ,DNA测序发现 3个克隆是已克隆基因 ,8个克隆是新基因序列。结论 第三代MATCHMAKERGAL4酵母双杂交系统是筛选Cx2 6相互作用蛋白质的一个可靠的实验手段 。
- 肖自安谢鼎华房海燕黄亮群施小六夏家辉
- 关键词：酵母双杂交技术耳聋基因克隆
- 开花灌浆期干旱胁迫对水、陆稻细胞膜透性和产量性状的影响被引量：22
- 1998年
- 在开花灌浆期对三个水、陆稻品种进行干旱胁迫处理。结果发现，叶片中自由水含量较高的湘粳2号（粳型水稻）在复水后细胞膜透性仍然较高，束缚水含量下降，平均减产幅度最小，表现出明显的耐旱特性。而湘中籼3号（籼型水稻）的表现相反，是不耐旱品种。陆稻品种奉爱的抗旱性明显较强，但产量较低，有待进一步改良。
- 姜孝成周广洽陈良碧黄亮群李训贞
- 关键词：干旱胁迫水稻陆稻膜透性产量性状
- TGFβ_1反义RNA对腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响
- 2004年
- 目的 :研究转化生长因子 β1(TGFβ1)反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞 (HPMC)细胞外基质合成与分泌的影响。方法 :将反义TGFβ1基因真核表达载体转染HPMC ,用ELISA法检测转染细胞上清液中纤维连接蛋白 (FN)和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1)的蛋白质水平 ;用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)法检测转染细胞内FN ,PAI 1和胶原Ⅰ (ColⅠ )的mRNA表达 ,并与未转染HPMC对照组和转染空载体组比较其变化。结果 :TGFβ1反义RNA转染HPMC后 ,与对照组相比 ,转染 2 4h后 ,FN ,ColⅠ ,PAI 1mRNA分别下调 17% ,2 6 % ,9.6 % ;转染 4 8h后FN ,PAI 1蛋白含量亦明显下降 (P <0 .0 5 )。结论 :人反义TGFβ1基因真核表达载体可抑制HPMC合成细胞外基质 。
- 袁芳刘伏友刘映红段绍斌彭佑铭黄亮群
- 关键词：TGFΒ1HPMC反义RNA腹膜间皮细胞分泌细胞
- 结肠腺瘤性息肉病蛋白通过与SMAP/KAP3相互作用与微管结合被引量：2
- 2002年
- 结肠腺瘤性息肉病基因 (adenomatouspolyposiscoli,APC)的突变导致家族性结肠息肉腺瘤病和散发性结肠癌 ,APC基因编码一个具有多个结构域、多种磷酸化状态的大分子蛋白质 .APC蛋白可通过C段直接或间接与微管结合 ,同时还可以通过中段与微管结合 ,但其结合的机制目前还不清楚 .为进一步研究APC与其他蛋白质的相互作用 ,利用酵母双杂交技术运用APC中段 (15 0 0bp～ 4 80 0bp)构建诱饵质粒 ,筛选人胎脑cDNA文库 ,得到一个与APC相互作用的蛋白SMAP/KAP3,SMAP/KAP3是驱动蛋白KIF3A/ 3B的相关蛋白 .通过免疫共沉淀和双色免疫荧光共定位的方法 ,证实了APC与SMAP/KAP3在体内的相互作用 ,提示APC可能通过SMAP/KAP3
- 王成郑多钟向阳夏昆黄亮群戴和平陈玉祥夏家辉
- 关键词：相互作用微管酵母双杂交
- 人正、反义转化生长因子beta1基因真核表达载体的构建被引量：2
- 2003年
- 目的 :构建人转化生长因子beta 1(TGFβ1)正、反义基因真核表达载体。方法 :从人胎脑的cDNA文库中扩增出TGFβ1共 12 84bp长的DNA片段后 ,与T载体直接进行高效连接 ,并测序证实无突变。接着利用TGFβ1引物两端所设计的酶切位点将目的片段定向亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1( )。构建的正反义表达重组体 (pcDNA3.1 TGFβ1和pcDNA3.1 antiTGFβ1)经限制性内切酶消化证实其中有目的片段完整插入。结果 :本实验成功构建了人正、反义TGFβ1基因真核表达载体。结论 :人正、反义TGFβ1基因真核表达载体的构建 ,为今后研究腹膜纤维化的防治奠定了实验基础。
- 袁芳段绍斌刘伏友彭佑铭刘映红李军黄亮群夏家辉
- 关键词：转化生长因子Β基因疗法
- Connexin31显性听力下降相关突变体研究被引量：2
- 2005年
- Cx31突变可以导致常染色体显性听力下降、常染色体隐性听力下降、周围神经疾病伴听力丧失,以及变性红皮肤病角化病,其导致不同疾病的机理一直是研究的重点.利用定点突变技术(site-directed mutagenesis,SDM)构建connexin31显性听力下降相关突变体Cx31R180X,Cx31E183K并插入到真核表达载体pEGFP-N1,转染HeLa细胞,转染Cx31R180X-pEGFP-N1和Cx31E183K-pEGFP-N1Cx31突变体质粒的HeLa细胞质膜上没有出现斑块状染色和聚集现象,分别用内质网染料conA和高尔基体染料WGA进行免疫荧光染色,结果显示Cx31显性听力下降相关突变体蛋白主要分布在细胞质内,且大部分定位在内质网和高尔基体上.同时分别用抗Cx31和抗GFP抗体进行蛋白质印迹检测,证实Cx31R180X,Cx31E183K在转染的HeLa细胞中都有表达.研究发现Connexin31显性耳聋相关突变体Cx31R180X,Cx31E183K不能正常地形成间隙连接通道,这与connexin31 EKV(变性红皮肤病角化病)相关突变体能够运输到细胞膜上形成间隙连接通道的报道不相同,提示connexin31不同部位突变导致不同疾病的致病机理可能不一样,从而为解释“one connexin two diseases”提供分子水平的依据.
- 谭志平刘宇蔡芳潘乾贺立强黄亮群戴和平夏昆夏家辉张灼华
- 关键词：定点突变技术突变体绿色荧光蛋白
- 连接蛋白26与神经内分泌特异蛋白的羧基端相互作用被引量：1
- 2004年
- 目的 :应用酵母双杂交技术筛选和鉴定连接蛋白 2 6 (connexin 2 6 ,Cx2 6 )的相互作用蛋白质。方法 :以正常人DNA为模板 ,PCR扩增Cx2 6 (GJB2 )全长编码区作为诱饵 ,基因重组法定向克隆到第 3代MatchMakerGal4双杂交系统的 pGBKT7质粒 ,用构建的pGBKT7 Cx2 6质粒筛选人胎脑cDNA文库 ,获得的阳性克隆的插入子为Cx2 6的相互作用蛋白质 (猎物 ) ,将Cx2 6和筛选到的相互作用蛋白再一对一回复进行酵母双杂交实验 ,去除假阳性。对阳性克隆插入子的DNA序列进行测序 ,在GenBank中作匹配及生物信息学分析。结果 :1个阳性克隆的插入子与神经内分泌特异蛋白 (neuroendocrinespecificprotein ,NSP)羧基端的 1 4 5个氨基酸残基序列一致 ,阅读框无移位。结论 :Cx2 6与NSP的羧基端具有相互作用 ,NSP可能在Cx2 6蛋白的转运。
- 肖自安谢鼎华黄亮群施小六夏昆杨曙夏家辉
- 关键词：连接蛋白胎脑人胎阳性克隆
- 一种特异性多用途抗人Connexin31抗体的获得与应用
- 2005年
- 间隙连接蛋白31(Connexin31,Cx31)是间隙连接蛋白(Connexin)家族的一员,目前对于Cx31的功能及其调节方式知之甚少。本实验利用Fmoc固相多肽合成的方法合成Cx31羧基端一个多肽片段(250 266AA),经HPLC纯化后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血检测、并纯化,采用Cx31myc表达蛋白进行Westernblotting、细胞免疫荧光染色、免疫沉淀实验,证实得到的抗体为抗间隙连接蛋白31的特异抗体。
- 刘宇蔡芳谭志平贺立强蒋泰文黄亮群夏昆夏家辉
- 关键词：多肽合成WESTERNBLOTTING免疫荧光免疫沉淀
- 影响籼稻愈伤组织再生频率的几个因素被引量：6
- 1998年
- 本文研究了影响湘早籼１９号愈伤组织植株再生频率的几个因素。在诱导培养基中添加不同配比的细胞分裂素（ＫＴ，ＢＡＰ，Ｚｅａｔｉｎ）和萘乙酸，可使再生频率大幅度提高，以补加Ｚｅａｔｉｎ和ＮＡＡ效果最为显著，达２５．３３％；诱导培养基和分化培养基的不同琼脂浓度组合处理，以诱导培养基０．７５％琼脂和分化培养基１％琼脂与诱导培养基１％琼脂与分化培养基０．５％琼脂两组合再生频率最高。同时还发现：诱导分化后转移至植株生长培养基也可提高再生率，而诱导培养基中补加脯氨酸的合适浓度是５０ｍｇ／Ｌ。
- 黄亮群李训贞姜孝成梁满中梁满中
- 关键词：籼稻再生植株
