黄俏佳
- 作品数：51 被引量：90H指数：6
- 供职机构：福州总医院更多>>
- 发文基金：南京军区医药卫生科研基金国家自然科学基金福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Akt2 may contribute to inhibit GAPDH mediated-apoptosis in ovarian cancer cells leading to increased cell survival
- Many cancers are genetic diseases.A lots of studies have demonstrated that the aberration or mutation of signa...
- 黄俏佳兰风华郑智勇韩俊勇董荔红解燕川郑峰
- 文献传递
- MyD88基因真核表达载体的构建及表达
- 2009年
- 目的:构建人髓样分化因子88(MyD88)基因编码区序列(cDNA)的真核表达载体,观察其在GES-1细胞中的表达.方法:从健康人外周血单个核细胞中提取总RNA,应用RT-PCR方法扩增MyD88基因cDNA全长序列,经NheI和KpnI酶切位点,插入到pcDNA3.1/myc-His(-)A质粒中,构建成MyD88基因的真核表达载体;用脂质体Lipo-fectamine2000将其转染入人胃黏膜细胞株GES-1细胞中,Western Blot检测其在GES-1细胞中的表达.结果:重组载体经酶切鉴定和测序证实目的基因正确无误;Western Blot结果显示MyD88基因在GES-1细胞具有良好的表达.结论:成功构建了pcDNA3.1/myc-His(-)A-MyD88真核表达载体,并在GES-1细胞中进行了表达,为进一步研究MyD88的结构和功能奠定了基础.
- 沈瑞明凌彩虹黄俏佳
- 关键词：基因克隆基因转染
- MEKK3对IL-1受体和Toll样受体信号转导途径的差异调节被引量：2
- 2009年
- 目的探讨有丝分裂原激活的蛋白激酶/细胞外信号调节激酶的上上级激酶3（MEKK3）在IL-1R和TLR信号转导途径中的作用。方法①分别用IL-1、LPS和CpG刺激MEKK2、MEKK3基因敲除及MEKK2和MEKK3基因双敲除的小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）,通过检测IL-6的表达,确定MEKK3在IL-1R-TLR信号转导中的作用;②将NF-кB报告基因分别与MEKK3负性表达载体、MEKK3、MyD88、IRAK1和TRAF6基因,共转染入野生型（MEKK3-WT）或MEKK3基因敲除（MEKK3-/-）的MEFs中,通过检测IL-1及LPS刺激后NF-кB基因的表达,确定MEKK3在IL-1R-TLR信号转导链上的位置;③Westernblot、激酶活性及NF-кBDNA结合活性测定检测ERKMAPK、JNKMAPK、p38MAPK和NF-кB的活性,确定MEKK3的下游信号途径;④免疫共沉淀测定检测MEKK3与TRAF6的相互作用,初步研究MEKK3在IL-1R-TLR信号途径中的激活机制;⑤将MEKK3基因重新导入MEKK3-/-MEFs中,观察其接受IL-1和LPS刺激后IL-6产生的恢复能力,确定MEKK3调控IL-1R-TLR的特异性。结果通过与MEKK3-WT对比,发现接受IL-1及LPS刺激后,MEKK3-/-MEFs中IL-6的产生明显受阻（CpG刺激无变化）;MEKK3-/-MEFs中NF-кB报告基因的激活受到显著抑制;MEKK3-/-MEFs中NF-кB信号途径以及JNKMAPK、p38MAPK的激活明显受阻;MEKK3-/-MEFs丧失了与TRAF6相互作用的能力;当MEKK3-/-MEFs重新获得MEKK3基因后,恢复了IL-1和LPS刺激后IL-6的产生。结论MEKK3是IL-1R-TLR4信号转导途径的关键性信号分子,在信号转导链上,它位于MyD88-IRAK1-TRAF6复合物的下游,在接受IL-1和LPS刺激后,通过与TRAF6形成复合物被激活;MEKK3在IL-1和LPS介导的NF-кB、JNKMAPK和p38MAPK信号途径的激活中起关键性作用,NF-кB、JNKMAPK和p38MAPK是MEKK3在IL-1R-TLR4信号转导途径中激活的下游信号通路;MEKK3不参与调控CpG–TLR9信号转导途径。
- 黄俏佳Su Bing
- 关键词：白细胞介素-1细菌脂多糖细胞信号转导
- 肾上腺脑白质营养不良等若干遗传病的分子诊断研究
- 兰风华吴玉水谢飞郑德柱杨渤生吴一波黄俏佳程烽朱晓辉朱忠勇
- 项目对肾上腺脑白质营养不良（ALD）、遗传性凝血因子VII缺乏症、遗传性凝血因子V缺乏症和遗传性高铁血红蛋白血症4种单基因遗传病进行了分子诊断研究。3种遗传病的分子诊断以mRNA途径为主，以基因组DNA途径为辅：从外周血...
- 关键词：
- 关键词：肾上腺脑白质营养不良遗传病分子诊断
- Akt3稳定表达细胞株的建立及其对MDA-MB-231细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的 构建人蛋白激酶Bγ（Akt3）基因编码区序列（cDNA）的真核表达载体、建立其稳定表达细胞株并观察其对MDA-MB-231细胞增殖的影响.方法 从流产胎儿脑组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增Akt3 cDNA的全长序列后克隆入pEGFP-N2质粒中,构建成Akt3基因真核表达载体,然后转染入MDA-MB-231细胞中,新霉素筛选稳定转染细胞克隆,通过MTT实验,研究转染Akt3基因前后细胞增殖的变化.结果 重组载体经酶切鉴定和测序证实目的 基因正确无误.Western印迹检测结果显示AKT3融合蛋白在MDA-MB-231细胞中表达良好,而转染空载体及未转染细胞对照中未见有此融合蛋白质条带;MTT结果显示AKT3表达上调的稳定克隆组,其增殖活性显著高于空载体稳定转染细胞组及未转染亲代细胞组,差异具有统计学意义（P＜0.01）,而后两者差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 Akt3过表达可增强MDA-MB-231细胞的增殖.
- 韩俊永黄俏佳
- 关键词：基因克隆基因转染基因表达
- MEK5基因siRNA重组腺病毒表达载体的构建及其对MEK5的表达抑制被引量：1
- 2011年
- 目的 构建人MEK5基因的小干扰RNA（siRNA）重组腺病毒表达载体,观察其在胃腺癌SGC7901细胞中对MEK5的表达抑制.方法 设计并合成针对人MEK5基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,以MluⅠ及XhoⅠ克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,将得到的重组穿梭质粒用PmeⅠ线性化后在大肠埃希菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组.将PacⅠ酶切鉴定正确的重组腺病毒质粒经乙醇沉淀后转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒.病毒体外转导人胃腺癌SGC7901细胞,Western印迹法检测其对MEK5表达的抑制.结果 经酶切和测序鉴定均证实pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒载体构建成功,其插入序列正确无误.Western印迹检测结果显示pAd-MEK5-siRNA2可抑制MEK5基因的表达,其有效抑制率达75.5 %.结论本研究成功地构建了针对人MEK5基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步深入研究MEK5基因在人胃腺癌细胞中的作用和功能奠定了基础.
- 解燕川李文生黄俏佳
- 关键词：腺病毒载体基因表达与调控
- 丝氨酸526位点在MEKK3介导的IL-1信号途径中的作用被引量：3
- 2007年
- 目的:确定MEKK3分子中介导IL-1信号途径的关键性氨基酸.方法:对哺乳动物MEKK3活性环526位点的丝氨酸进行人工诱变后,用瞬时转染的方法分别将526A基因单独及与TRAF6基因同时导入GES-1细胞中;用免疫印迹、NF-κB荧光素酶报告基因测定及免疫沉淀实验检测了526A突变体的表达水平、对IL-1及TRAF6介导的NF-κB基因的表达及MEKK3与TRAF6相互作用的影响.结果:通过与野生型MEKK3的对比,观察到526A不但阻断了IL-1及TRAF6介导的依赖于MEKK3的NF-κB基因的激活,同时阻断了TRAF6与MEKK3的相互作用.结论:526位点的丝氨酸在MEKK3介导的IL-1信号途径中起关键性的作用,是不可缺少的关键性氨基酸.
- 黄俏佳兰风华朱忠勇董荔红
- 关键词：TRAF6NF-KB白细胞介素-1
- 用快速斑点免疫金渗滤法检测抗双链DNA抗体被引量：3
- 1996年
- 目的为了提供一种简便、快速、可靠的检测抗双链ＤＮＡ（ｄｓ－ＤＮＡ）抗体的新方法。方法将生物素化的质粒ｄｓ－ＤＮＡ结合于包被了亲和素的硝酸纤维素（ＮＣ）膜上，以胶体金标记的葡萄球菌蛋白Ａ（ＳＰＡ）作为显示剂，建立了一种检测抗ｄｓ－ＤＮＡ抗体的快速斑点免疫金渗滤法（ＤＩＧＦＡ）。结果ＤＩＧＦＡ对未经选择的系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）和活动性ＳＬＥ的阳性率分别为６７．２％和９５．９％；对非ＳＬＥ的自身免疫病患者的阳性率仅为２．９％；正常人未见假阳性。与短膜虫免疫荧光法（ＣＬ．ＩＦＡ）、放射免疫法（Ｆａｒ）、酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）和斑点免疫结合法（ＤＩＢＡ）四种方法比较，ＤＩＧＦＡ的敏感性优于ＣＬ．ＩＦＡ、ＥＬＩＳＡ和ＤＩＢＡ，特异性优于Ｆａｒ和ＥＬＩＳＡ。结论ＤＩＧＦＡ快速、简便，整个检测过程只需２分钟，不需特殊设备，是一种值得推广的检测抗ｄｓ－ＤＮＡ抗体的常规方法。
- 兰小鹏黄俏佳叶小芬冯修高唐玉钗朱忠勇
- 关键词：红斑狼疮全身性抗双链DNA抗体斑点免疫金渗滤法
- 全文增补中
- MEKK3在TNF-α刺激后的恶性肿瘤细胞所产生的IL-6中的作用
- 目的：探讨有丝分裂原激活的蛋白激酶(MEKK3)在TNF-α刺激后的肺癌A549和乳腺癌MDAMB-231细胞所产生的IL-6中的作用.
方法：应用EUSA测定IL-6的产生,Western blot测定MEK...
- 沈瑞明兰风华钱风英董荔红王志红林炎鸿黄俏佳
- 关键词：TNF-Α恶性肿瘤细胞IL-6
- SFF—200酶标荧光仪的研制及在酶免疫测定中的应用
- 1993年
- 以辣根过氧化物酶(HRP)为结合物的固相酶免疫测定(ELISA)常用邻苯二胺(OPD)等显色底物进行比色测定。荧光光度法较比色法有敏感度高检测范围大的优点。曾有报道在以HRP作为标记酶的ELISA中改用荧光底物对羟基苯丙酸(HPPA)
- 章蔚娟于德源刘爱琴朱林福黄俏佳蔡康陆云彪陶义训
- 关键词：ELISAHRP
