于小青
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：华中科技大学生命科学与技术学院资源生物学与生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 红豆杉细胞遗传转化体系优化及转基因细胞株ORCA3、MET1-RNAi基因表达分析
- 红豆杉细胞大规模培养是最有前景的解决紫杉醇药源途径之一。红豆杉细胞培养过程中紫杉醇含量低而且极不稳定在一定程度上限制其工业化生产。随着紫杉醇生物合成途径的阐明和关键酶及转录因子的克隆,使得通过利用基因工程方法构建高产转基...
- 于小青
- 关键词：红豆杉细胞紫杉醇
- 文献传递
- ORCA3转录因子对红豆杉细胞中紫杉醇生物合成的影响被引量：6
- 2012年
- ORCA3是一个受MeJA诱导的调控植物基础和次生代谢的转录调控因子。本文拟探讨ORCA3转录因子对红豆杉细胞中紫杉醇生物合成的影响,旨在为创制紫杉醇稳定高产的红豆杉细胞系,解决细胞大规模培养中紫杉醇含量低的瓶颈问题提供参考。从长春花中克隆ORCA3基因后,采用农杆菌介导法转入红豆杉细胞中,通过PCR、组织化学活性染色等检测法,筛选得到20余株转基因细胞系。HPLC检测转基因细胞系内紫杉醇含量表明:与阴性对照相比,转基因细胞系的紫杉醇含量增加了0.5～2.5倍,最高可达159.315μg/g。因此,ORCA3转录因子可以调控红豆杉细胞中紫杉醇合成。
- 于小青杨海燕张蒙栗茂腾付春华余龙江
- 关键词：红豆杉紫杉醇
- DNA甲基转移酶RNAi干涉载体的构建及其鉴定
- 2010年
- DNA甲基化(DNA Methylation)是真核生物基因组最常见的DNA共价修饰形式,影响蛋白质-DNA的相互作用,在基因表达的调控上起着重要作用。RNAi(RNA interference)干涉是关闭特定基因功能的新技术,在植物功能基因组、植物发育及生理代谢途径调控等方面有着广泛应用。本文根据植物DNA甲基转移酶(DNMTs)的保守序列设计引物,首先从拟南芥总基因组DNA中克隆出DNA甲基转移酶基因保守片段,然后以此保守片段为模板扩增长度约570bp的靶序列用于构建RNAi载体。根据RNAi作用机制,将570bp靶序列正向、反向连接到pHANNIBAL载体上,然后将带有此反向重复结构的完整ORF框连接到植物表达载体pGreeII上,经过酶切鉴定和测序分析证实DNA甲基转移酶RNAi重组表达载体构建成功。转化红豆杉细胞表明该干涉载体具有生物学功能,为研究受DNA甲基化调控的性状改良打下基础。
- 王志伟于小青郭兴东邝美华余龙江栗茂腾付春华
- 关键词：RNAI
- 农杆菌介导的曼地亚红豆杉细胞遗传转化体系的建立被引量：3
- 2012年
- 建立了根癌农杆菌介导的红豆杉细胞遗传转化体系,为红豆杉细胞的遗传改良打下基础。最优转化条件是:菌液光密度A600=0.6,侵染时间25 min,共培养最适温度21℃,共培养时间48 h;最适头孢霉素(Cephamycin,Cef)抑菌浓度为300 mg/L;最优的除菌及筛选方式为:用含100 mg/L头孢霉素的无菌水冲洗共培养后的细胞10 s,然后将细胞转至含300 mg/L头孢霉素的抑菌培养基上,两周后转至含150 mg/L卡那霉素(Kanamycin,Kan)或8 mg/L潮霉素(Hygromycin,Hyg)的筛选培养基上筛选。采用小愈伤团法筛选转基因纯系,GUS染色显示,筛选后转化细胞株的阳性细胞占80%以上。
- 许想平于小青董艳山付春华余龙江
- 关键词：红豆杉细胞
