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于少芳: 作品数：11 被引量：15H指数：3; 供职机构：浙江大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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BmNPV多角体蛋白片段引导外源蛋白固定入多角体的研究被引量：7: 2010年; 家蚕核型多角体病毒(BmNPV)晚期产生大量多角体,其主要作用是包埋病毒粒子免受外部恶劣环境的影响,为次代感染提供保障。将BmNPV多角体基因分段克隆并与报告基因——增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合,利用BmNPVPolh+Bac-to-Bac表达系统构建重组病毒,使多角体蛋白与融合蛋白在BmN细胞内共表达。分析感染细胞和形成的多角体中融合蛋白的含量,研究不同的多角体蛋白片段引导EGFP固定入多角体的效果,结果表明构建的5种重组病毒都能大量表达融合蛋白,每种多角体蛋白片段都能引导EGFP固定入多角体内部,且外源融合蛋白在多角体总蛋白中占有较高的比例,其中,以多角体蛋白N末端100个氨基酸和完整多角体蛋白序列作为信号固定EGFP的效率最高。这一现象为解决活性蛋白长期保存提供了新思路,同时对于开发含有毒素蛋白的新型生物杀虫剂和新型疫苗的转运载体也具有较好的参考价值。; 曹翠平于少芳郭爱芹杨锐相兴伟陈琳吴小锋; 关键词：家蚕核型多角体病毒多角体

以家蚕作为宿主生产重组蝎毒素蛋白的方法: 本发明公开了一种以家蚕作为宿主生产重组蝎毒素蛋白的方法，主要包括以下步骤：以蝎cDNA为模板、以含有BglII酶切位点的5′-ACGTAGATCTATGGATGGATATATAAG-3′为正向引物、以含有B...; 相兴伟于少芳吴小锋; 文献传递

昆虫质型多角体病毒与杆状病毒多角体的结构比较被引量：6: 2011年; 依据已有的研究结果,分析比较昆虫质型多角体病毒和杆状病毒多角体的结构差异。2种病毒都产生多角体,其中质型多角体病毒多角体的原子结构展现一个错综复杂的三聚体组装,即通过多角体蛋白分子突出的N-端螺旋臂互相连接在一起;杆状病毒和质型多角体病毒的多角体晶体相似,蛋白序列的N-末端也是α-螺旋。由此表明这2种病毒的多角体蛋白及其共同结构基础具有同源性。但一些研究表明质型多角体病毒和杆状病毒的多角体基础分子组织形成不同。尽管这2种病毒多角体含有相近的结构单位及共有对称方式,但是多角体分子在结构上差别较大,在晶体内的组装形式也不同,特别是二硫键和N-端区域的区域交叉使杆状病毒多角体的晶体构造稳定坚固,C-端臂使其结构单位相互连接在一起。有研究表明N-末端螺旋突出臂在杆状病毒和质型多角体病毒中也具有不同的结构功能,但目前并没有结构方面的证据证明这2种病毒多角体具有共同的进化起源。; 陈琳于少芳吴小锋; 关键词：多角体蛋白质型多角体病毒杆状病毒分子结构进化起源

家蚕BmNPV多角体蛋白与外源蛋白共包埋入多角体的研究被引量：1: 2011年; 为了探索家蚕核型多角体病毒多角体的包装特性,构建了一种不形成多角体但能大量表达绿色荧光蛋白(EGFP)的重组病毒vBmBac(polh-)-5B-EGFP,将其与野生型BmNPV共同感染BmN细胞,于荧光显微镜下观察到EGFP与多角体可以在同一细胞中同时表达。从感染的BmN细胞中收集纯化多角体,观察到多角体能被激发出绿色荧光,进一步利用Western blot证实多角体中含有EGFP。上述结果表明,多角体可以将自身病毒粒子以外的其他病毒粒子的成分包装进入多角体,表明多角体的包装机制中存在非特异性识别机制。; 相兴伟杨锐陈琳胡小龙于少芳吴小锋; 关键词：家蚕核型多角体病毒多角体蛋白 EGFP 多角体

利用家蚕BmN细胞表达重组蝎毒素蛋白及其杀虫效果分析: 用天然毒素蛋白杀灭害虫是农林病虫害防治的一个重要发展方向。利用家蚕核型多角体病毒（BmNPV）多角体蛋白基因的部分序列与蝎毒素蛋白基因（BmK ITa1）融合表达，经SDS-PAGE分析表明，通过融合表达策略构建的含...; 于少芳陈琳相兴伟胡小龙杨锐吴小锋; 关键词：家蚕核型多角体病毒生物活性

家蚕核型多角体病毒ODV囊膜蛋白基因的融合表达及引导外源蛋白进入多角体的研究被引量：3: 2010年; 为了探索家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的包涵体衍生病毒(ODV)囊膜蛋白在病毒粒子包涵入多角体过程中的作用,选择2个ODV囊膜蛋白ODV-E25和ODV-E56作为研究对象,利用能够表达多角体蛋白的BmNPV Polh+Bac-to-Bac表达系统构建了融合表达E25-EGFP和E56-EGFP的重组病毒,在家蚕卵巢培养细胞系(BmN)中进行表达和定位分析。结果表明2种融合蛋白均在BmN细胞中成功表达,并于荧光显微镜下观察到绿色荧光主要分布在细胞核中。从感染的BmN细胞中收集纯化多角体,观察到多角体也能激发出绿色荧光,用Western blot方法进一步证实多角体中含有融合蛋白。这一现象表明当囊膜蛋白基因与外源基因融合表达时,外源融合蛋白能够进入多角体内部,推测这2种ODV囊膜蛋白不仅在病毒粒子包涵入多角体的过程中起信号引导作用,并能引导外源目的蛋白进入多角体。; 相兴伟陈琳于少芳杨锐吴小锋; 关键词：家蚕核型多角体病毒多角体

提高昆虫杆状病毒表达系统重组蛋白表达水平的技术被引量：1: 2010年; 昆虫杆状病毒表达系统已广泛用于各种重组蛋白的生产。然而,由于各种因素重组蛋白的表达量远远达不到理想的水平。提高重组蛋白的表达水平成为提高昆虫杆状病毒表达系统效率的核心问题。根据目前的研究,提高外源基因表达水平的技术主要包括抑制目的蛋白降解、合理调控目的基因的转录、优化启动子类型以及利用活体昆虫而非培养细胞,如用家蚕幼虫或蛹进行表达等。这些技术也为家蚕成为更加高效的生物反应器奠定了基础。; 于少芳吴小锋; 关键词：昆虫杆状病毒表达系统重组蛋白

家蚕BmNPV Polh+Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的构建方法: 本发明公开了一种家蚕BmNPV Polh+Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的构建方法：以家蚕野生型BmNPV基因组DNA为模板，分别以P10-upF/P10-upB和P10-downF/P10-...; 相兴伟吴小锋于少芳杨锐; 文献传递

利用家蚕细胞表达蝎毒素蛋白及其杀虫效果分析: 利用家蚕核型多角体病毒BmNPV Bac-to-Bac表达系统构建了能够表达蝎毒素蛋白基因的重组病毒载体，在培养细胞中进行了表达，并通过生物学实验分析了重组蝎毒素蛋白的生物活性和杀虫效果。研究结果如下：　　 1、为了提...; 于少芳; 关键词：家蚕核型多角体病毒生物杀虫剂; 文献传递

以家蚕作为宿主生产重组蝎毒素蛋白的方法: 本发明公开了一种以家蚕作为宿主生产重组蝎毒素蛋白的方法，主要包括以下步骤：以蝎cDNA为模板、以含有BglII酶切位点的5′－ACGTAGATCTATGGATGGATATATAAG－3′为正向引物、以含有BglII酶切位...; 相兴伟于少芳吴小锋; 文献传递