刘启彬
- 作品数：7 被引量：25H指数：2
- 供职机构：上海海洋大学水产与生命学院水产种质资源发掘与利用省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家农业科技成果转化资金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 中华绒螯蟹△9脂肪酸去饱和酶基因的原核表达研究
- △9去饱和酶(△9 fatty acid desaturase,FAD9)是一种存在于内质网膜上的结合蛋白,其在脂肪酸代谢及细胞膜流动性的调节中发挥着重要作用.实验根据本实验室已克隆得到的中华绒螯蟹FAD9基因的cDNA...
- 姚琴琴杨志刚郭子好王瑶刘启彬施秋燕成永旭
- 关键词：中华绒螯蟹原核表达重组蛋白
- 中华绒螯蟹EcR基因全长cDNA克隆及表达分析被引量：9
- 2014年
- 为了研究蜕皮激素受体（EcR）在中华绒螯蟹蜕皮和性腺发育过程中的作用,本实验采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）以及cDNA末端快速扩增（RACE）技术,克隆了中华绒螯蟹EcR基因全长cDNA序列。运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法,分析该基因在不同组织、蜕皮过程及卵巢发育阶段的表达特征,并研究了甲基法尼酯（MF）对卵巢中EcR的调控作用。结果显示,中华绒螯蟹EcR cDNA全长2 156 bp,编码422个氨基酸,其序列与招潮蟹相似性最高,为89%。荧光定量PCR结果显示,EcR在Y器官中表达量最高;在卵巢和肌肉中少量表达;在肝胰腺、鳃、心脏、胃、肠、胸神经节和脑神经节中微量表达。在中华绒螯蟹不同蜕皮时期中,Y器官中EcR表达量在D期和E期的表达量最高;肝胰腺中EcR表达量从AB期到D期有上升的趋势,到E期有所降低;肌肉中EcR表达量在AB期最高;鳃中EcR表达量在D期最高。在中华绒螯蟹卵巢发育过程中,EcR在卵巢发育Ⅰ-Ⅳ期的表达量有上升趋势,到Ⅴ期表达量降低;体外注射实验中,MF1（注射1μg）组的EcR表达量与对照组和生理盐水组无显著差异,而MF2（注射2μg）组的EcR表达量显著上升;离体培养实验中,MF1组（10^-8mol/L）和MF2组（10^-7mol/L）显著高于对照组和生理盐水组。研究表明,EcR基因在中华绒螯蟹蜕皮和卵巢发育过程有重要作用,MF可以调控EcR基因在卵巢中的表达。
- 王瑶杨志刚沈城姚琴琴曾奇韬刘启彬成永旭
- 关键词：中华绒螯蟹基因克隆蜕皮卵巢发育
- 中华绒螯蟹几丁质酶基因HXchit全长cDNA克隆及其在蜕皮过程中的表达分析被引量：2
- 2015年
- 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术,依据锯缘青蟹(Scylla serrata)几丁质酶基因的保守区设计引物,克隆了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)几丁质酶基因(HXchit)全长,并通过荧光定量PCR(q RT-PCR)技术研究了HXchit在中华绒螯蟹的同一蜕皮阶段不同组织、不同蜕皮阶段主要几个组织的表达情况。结果显示,HXchit基因c DNA全长2 042 bp(Gen Bank accession no.KJ513466),包括5′非编码区(5′UTR)35 bp,3′非编码区(3′UTR)537 bp,开放阅读框(ORF)1 470 bp,编码490个氨基酸,预测分子量和理论等电点分别为53.44 k D和4.41。经BLASTN和BLASTX分析,HXchit基因的氨基酸序列与锯缘青蟹几丁质酶的氨基酸序列同源性最高,相似性为75%;经聚类分析,HXchit氨基酸序列与锯缘青蟹几丁质酶聚为一支。q RT-PCR结果显示,HXchit在所检测的组织中均有表达,各组织的表达量依次为肝胰腺>表皮>肌肉>胃>鳃>胸神经节>肠>心脏>脑神经节。对不同蜕皮周期的中华绒螯蟹分析显示,肝胰腺中HXchit表达水平在D期最高,并与E期、AB期及C期呈显著性差异(P<0.05);表皮中HXchit在E期、AB期、C期和D期的表达水平呈逐渐升高的趋势,D期表达量达到最高且与E期、AB期、C期呈显著性差异(P<0.05);肌肉中HXchit表达量在C期最高,但各蜕皮时期的表达量之间差异不显著(P>0.05)。结果表明HXchit是一种在中华绒螯蟹肝胰腺中大量表达的酸性几丁质酶,推测其在蜕皮周期中对几丁质类食物的消化或内源性几丁质的降解起到了重要作用,本研究旨在为进一步探索几丁质酶的准确生理功能和调控机制奠定分子基础。
- 姚琴琴杨志刚王瑶郭子好刘启彬施秋燕成永旭
- 关键词：中华绒螯蟹几丁质酶蜕皮
- 中华绒螯蟹Δ9脂肪酸去饱和酶基因克隆与原核表达被引量：2
- 2015年
- 根据中华绒螯蟹FAD9基因cDNA序列(Accession Number:JQ693685)设计引物,扩增得到中华绒螯蟹FAD9基因的开放阅读框(ORF),用原核表达载体p Cold-TF DNA成功构建重组表达载体p Cold-fad9,将p Cold-fad9转入大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S,在异丙-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下进行表达。SDS-PAGE分析表明,诱导后出现的特异性蛋白条带,大小与预期理论值(95.10 k D)相符。当IPTG浓度为0.3 mmol/L时,在15℃条件下诱导20 h,重组蛋白的表达量最高。目的蛋白主要存在于上清溶液中,为可溶性表达。利用镍离子亲和层析柱对重组蛋白进行了纯化,用Western-blotting方法验证了该重组蛋白可以与anti-His抗体特异性结合。研究结果为中华绒螯蟹FAD9重组蛋白的大量纯化及活性检测奠定基础,也为今后进一步开展脂肪酸去饱和酶功能的研究提供参考。
- 姚琴琴杨志刚郭子好成永旭王瑶施秋燕刘启彬何杰杨筱珍
- 关键词：中华绒螯蟹克隆原核表达
- 中华绒螯蟹幼蟹阶段生长和存活的初步研究
- 在实验室半循环水单养系统下研究了中华绒螯蟹幼蟹阶段(M-C10)的蜕壳生长、蜕壳间隔和存活等生长参数，实验共进行180天。实验结束后幼蟹的总成活率为38％，从大眼幼体开始总成活率呈递减趋势。幼蟹早期阶段(M-C3)蜕壳间...
- 刘启彬
- 关键词：中华绒螯蟹饵料组成
- 文献传递
- 中华绒螯蟹△9和△6脂肪酸去饱和酶基因真核表达系统的构建
- △6和△9脂肪酸去饱和酶是多不饱和脂肪酸合成途径的关键酶之一,都可催化脂肪酸链上特定位置形成双键。在已克隆到中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的△6-脂肪酸去饱和酶(Fatty acyl-CoA △6 d...
- 杨青杨志刚魏帮鸿施秋燕刘启彬成永旭
- 关键词：真核表达毕赤酵母
- 养殖密度和饵料组成对河蟹仔蟹生长和存活的影响被引量：10
- 2015年
- 在实验室循环水养殖条件下,分别研究了养殖密度和饵料组成对中华绒螯蟹仔蟹阶段(仔Ⅰ—仔Ⅲ)生长、存活的影响。养殖密度实验设置D1(75只/m^2)、D2(150只/m^2)、D3(300只/m^2)和D4(450只/m^2)4个密度组。结果表明:D2组仔蟹体重最高,并在仔Ⅰ和仔Ⅱ阶段显著高于D3和D4组(P<0.05),成活率随密度增加呈先增加后下降趋势,不同仔蟹阶段成活率以D1和D2组最高,D3组次之,D4组最低,且差异显著(P<0.05)。另外,仔Ⅰ阶段D2和D3密度组HUFA和n-3PUFA含量显著高于D3和D4密度组(P<0.05)。饵料组成实验中结果表明:混合投喂组仔蟹体重在所有投喂组中最高,并在仔Ⅰ和仔Ⅲ阶段显著高于配合饲料组和生物饵料组(P<0.05)。存活率以配合饲料组最高,混合饲料组次之,生物饵料组最低,且仔Ⅱ阶段和仔Ⅲ生物饵料组成活率显著低于其余两组(P<0.05)。此外,仔Ⅰ和仔Ⅱ阶段生物饵料组总脂含量显著低于其余两组,生物饵料组HUFA、n-3PUFA和n-6PUFA普遍低于其余两组,并在不同仔蟹阶段达到显著水平(P<0.05)。实验结果表明养殖密度、饵料组成对中华绒螯蟹仔蟹阶段的生长、存活有显著影响,研究结果为中华绒螯蟹仔蟹培育技术的改进提供了一定的理论基础。
- 杨志刚刘启彬姚琴琴杨青王健懿成永旭杨筱珍葛永春
- 关键词：中华绒螯蟹仔蟹存活
