刘培欣
- 作品数：80 被引量：402H指数：11
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划黑龙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生交通运输工程更多>>
- 鸽源新城疫病毒的分离与鉴定被引量：2
- 2002年
- 熊永忠王秀荣曹殿军刘培欣张勇
- 关键词：新城疫病毒
- 我国部分地区NDV的分子流行病学研究被引量：12
- 2000年
- 新城疫（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ，ＮＤ）是由新城疫病毒（ＮＤＶ）引起的禽类的一种以呼吸道、消化道粘膜出血为典型症状的急性传染病，其病原——ＮＤＶ是副粘病毒科、副粘病毒亚科、腮腺炎病毒属的成员，为有囊膜的负链ＲＮＡ病毒。ＮＤＶ基因组为单股不分节ＲＮＡ，编码六种病毒结构蛋白，其中融合蛋白（Ｆ）和血凝素－神经氨酸酶蛋白（ＨＮ）构成囊膜外表面的纤突，是ＮＤＶ的功能性糖蛋白，在致病和免疫应答过程中起重要作用［１］。由于ＮＤＶ只有一种血清型，对ＮＤＶ不同毒株的差异性分析只能采用毒力、蚀斑形成能力测定等功能性试验来进行，但分型要么太细，无规律可循；要么过于粗放，无流行病学意义，使得ＮＤＶ流行病学研究一直难以突破。 近年来，随着分子生物学技术的广泛应用，使得人们在分子水平上对病毒遗传变异机制的研究取得了长足进展，发现病毒的遗传变异与疾病的流行有着密不可分的联系，并形成了病毒分子流行病学这样一门崭新学科，也为ＮＤ的流行病学研究提供了一种先进技术。已有研究表明，ＮＤＶＦ基因的遗传变异与ＮＤＶ的变异和流行密切相关，是ＮＤＶ分子流行病学研究的首选基因。
- 曹殿军郭鑫梁荣闫丽辉刘培欣闵平陈杰
- 关键词：新城疫病毒F基因系统发育进化树分子流行病学
- 新城疫病毒F_(48)E_9株和La Sota株F基因在Bac-to-Bac昆虫杆状病毒系统中的表达被引量：3
- 2006年
- 将新城疫病毒(F48E9株和La Sota株)F基因插入至杆状病毒转移载体pFastBacTMHT A中,分别构建重组质粒pFastBacHT-F48F,pFastBacHT-LaF,然后转化E.coliDH5α,以LB/AMP±平板筛选阳性重组子并测序。测序正确后转化至E.coliDH10Bac感受态细胞中,经抗性培养和蓝白斑筛选,筛选出白色菌落后,提取重组Bacmids(分别命名为rBacmid-F48F和rBacmid-LaF),经PCR鉴定正确后,将阳性重组Bacmids转染Sf9昆虫细胞。在昆虫细胞内,重组Bacmid经复制,表达,装配,形成重组杆状病毒,经SDS-PAGE和Western-blot分析,证实NDV F48E9株和La Sota株的F蛋白均获得正确表达,所表达的重组F蛋白分子量约56 kD,证明在昆虫细胞内表达并部分糖基化,具有良好的免疫原性,为表达F基因并建立适合国内应用的ELISA诊断方法奠定了基础。
- 袁萍闫丽辉冉多良刘培欣闻晓波曹殿军
- 关键词：新城疫病毒F基因重组杆状病毒
- SPF鸡胚与非免疫鸡胚繁殖鸡新城疫病毒La Sota株的比较试验(大摘要)
- 前言:新城疫疫苗主要的生产材料是鸡胚,鸡胚有SPF胚、非免疫鸡胚、普通鸡胚之分。SPF鸡饲养条件严格,价格昂贵,商品化种蛋供不应求,用SPF鸡胚生产疫苗成本高,但质量也最好;用普通鸡胚生产疫苗成本较低,但疫苗质量却比不上...
- 张晓东刘怀然刘培欣刘胜旺孔宪刚
- 文献传递
- 犬脾细胞白介素-18(IL-18)基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2003年
- 为了研究白细胞介素_1 8(IL_1 8)的活性和功能 ,将犬脾细胞经ConA诱导 ,用TRIzol裂解 ,提取总RNA ,通过反转录聚合酶链反应 (RT_PCR)扩增出犬IL_1 8的cDNA ,然后连接到pMD1 8_T载体上 ,转化DH5α感受态细胞 ,获得阳性重组质粒。核苷酸序列结果表明 ,我们得到了长 686bp的基因 ,含有一个 5 82bp的开放阅读框架 ,编码 1 93个氨基酸。与已知犬序列同源性可高达 99.6% ,与已知猪序列的同源性为 89.8% ,所克隆基因为今后进一步研究IL_1 8基因的功能奠定了基础。
- 曹殿军于立辉闫丽辉刘培欣孙建宏杨玉英赵玉军杨国勇
- 关键词：克隆测序
- 新城疫病毒F48E9感染CEF细胞特异性表达基因的筛选鉴定
- 2005年
- 分别以NDVF48E9和LaSota株感染鸡胚成纤维细胞,于感染后8h提取NDV感染CEF细胞总RNA,通过mR NA差异显示技术筛选病毒感染诱导表达的特异性基因。主要方法是先以锚定引物经反转录后,然后以9～10bp随机引物为上游引物,以锚定引物Oligod(T)18为下游引物,进行PCR扩增,PCR产物采用8%的尿素变性PAGE胶电泳进行分离鉴定。对于特征性差异带进行第二次PCR扩增,克隆后测定其核苷酸序列。结果我们发现数个差异条带,选取差异带在500bp以内的条带,经测序后显示经NDVF48E9感染后,有一条差异条带特异性表达的基因所编码的蛋白与Receptor(TNFRSF)_interactingserine_threoninekinase2有47%同源,是一个新基因,其蛋白功能不明确,有可能和细胞的凋亡有关。
- 杨新艳刘培欣曹殿军闫丽辉孙建宏单文鲁
- 关键词：DDRT-PCR新城疫病毒鸡胚成纤维细胞基因表达
- NDV La Sota株、V4株F蛋白表位的预测被引量：8
- 2005年
- 为进一步研究 2 种疫苗的表位,以深入探讨NDV La Sota株、V4疫苗免疫差异的根本所在。应用亲水性、可及性、抗原性、可塑性和二级结构预测等 5 种参数分别对新城疫病毒 La Sota株和 V4 株 F蛋白的 B细胞抗原表位进行了综合预测,预测到二者的 B细胞抗原表位分别有 19 个,这些表位中含有已经确定的 5 个中和表位, A1: 72aa, A2:78aa, A3: 79aa, A4: 157 aa、161 aa、170 aa、171 aa,A5:343 aa。比较发现,二者有 9 个预测的B细胞表位氨基酸序列存在差异。
- 孙建宏曹殿军刘培欣闫丽辉
- 关键词：B细胞表位F蛋白NDV抗原性
- 新城疫国内标准强毒株F48E9株全长基因组克隆与分析
- 参考国外已发表的NDV La Sota基因组的核苷酸序列及F48E9株基因片段序列分别设计了8对引物(F1、F2、F3、F4、F5、F6、3'、5')和两条反转录引物(3'RT、5'RT),用于扩增NDV F48E9株N...
- 闫丽辉曹殿军刘培欣孙建宏
- 关键词：同源性比较
- 文献传递
- 新城疫病毒V4株NP和P基因及其间隔区序列的克隆与分析被引量：2
- 2006年
- 采用RT-PCR技术克隆了新城疫病毒(NDV)V4株长约4 200 bp的核苷酸序列,并进行了序列测定与分析。结果表明,该序列中包含有NDV V4株NP基因编码区、NP和P基因间隔区以及P基因的全部核苷酸序列。NDV V4株NP和P基因与其他8个NDV毒株相应部分进行同源性比较,与Quuesland V4株的同源性最高。NDV V4株NP和P基因间隔区序列与其他13株NDV毒株相应部分的比较结果表明,F48E9等强毒株较La sota等弱毒、无毒毒株和试验用V4株在这个区域多了6个碱基,这6个碱基插入的位置在La sota等弱毒、无毒毒株全基因组序列的1647-1648 nt处;参比的14株NDV在这个区域的同源性为63．9％-100％,弱毒株之间的同源性较高,弱毒株与强毒株之间及强毒株之间的同源性差异较大。
- 刘芳宁闫丽辉曹殿军刘培欣杨增岐
- 关键词：新城疫病毒NP基因P基因克隆
- 鹅源新城疫病毒分子特征的研究进展
- 2008年
- 路学华葛鑫刘怀然闫丽辉刘培欣孔宪刚冯新畅
- 关键词：鹅源新城疫病毒分子特征副黏病毒VIRUS烈性传染病腮腺炎病毒
