叶朝阳
- 作品数：18 被引量：24H指数：2
- 供职机构：华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学一般工业技术化学工程更多>>
- 具有梯度孔结构特征的聚己内酯多孔支架的3D打印制备及表征被引量：2
- 2018年
- 软骨组织工程生物支架材料的内部结构(如孔结构)对于细胞行为有着重要影响。3D打印技术可以实现对支架结构的精确控制。聚己内酯(poly(ε-caprolactone),PCL)是广泛应用的组织工程支架材料,具有良好的生物相容性,支持多种细胞的黏附、增殖和基质分泌。3D打印制备的PCL多孔支架包含相邻三部分,每部分由六层纤维堆积,相邻两层的纤维夹角分别为30、45和60°,而同层中纤维间距为分别为450、400和300μm;力学性能测试梯度支架的杨氏模量在47 MPa左右,与天然软骨组织20 MPa相匹配;微断层扫描和扫描电镜观察支架表面和内部形貌的结构特征,Image J软件对支架特征参数进行量化分析。支架表面和内部形貌规整,呈现孔结构梯度分布,具有良好的孔连通性和57%左右的孔隙率,孔径梯度大小为342~747μm。经细胞接种培养后,应用扫描电镜、CCK8检测和死活染色方法分析支架材料对细胞生长及活性的影响。梯度支架能够很好地支持细胞生长和活性。研究通过对支架材料的设计和制备为软骨组织工程研究奠定了基础。
- 张豪杰邢天龙周燕谭文松叶朝阳
- 关键词：3D打印聚己内酯孔结构软骨组织工程
- 基于层层自组装修饰聚己内酯多孔薄膜应用于细胞培养
- 目的:单一因素对细胞行为影响的研究与体内细胞所处的微环境存在一定的差距[1].本文拟通过制备表面具有多孔结构的薄膜材料,并结合多种生物活性大分子的修饰来模拟体内细胞微环境,从而为探讨拓扑结构和生物活性分子协同作用下的细胞...
- 刘艳丽叶朝阳周燕谭文松
- 关键词：层层自组装细胞培养
- 体外传代培养兔关节软骨细胞的去分化现象被引量：14
- 2013年
- 背景:兔是软骨组织工程研究中应用非常广泛的实验动物模型,关节软骨细胞的去分化现象已经被广泛认可。目的:观察体外传代培养过程中兔关节软骨细胞的去分化现象。方法:将从新西兰大白兔膝关节分离获取的原代软骨细胞进行传代培养至第7代,对细胞生长、形态、基质分泌以及基因表达等方面分别采用细胞计数,显微镜观察,F机动蛋白染色、番红O染色,糖胺聚糖定量测定以及半定量聚合链式反应进行鉴定和比较。结果与结论:光学显微镜下,兔关节软骨细胞在体外传代培养过程中细胞形态由小且圆形或多角形,逐步转变大且为成纤维细胞样的梭形形态,对F机动蛋白的染色进一步佐证了这样的形态变化。细胞计数结果表明,细胞增殖能力随代次增加显著下降,特别是第3代以后的软骨细胞基本无明显增殖;经过番红O染色以及定量测定糖胺聚糖的含量,发现软骨特性胞外基质分泌量从第2代细胞开始就呈现显著的降低。半定量聚合链式反应检测结果表明,随着传代次数的增加,特别是第3代以后,软骨相关特征分子(包括Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖、软骨寡聚基质蛋白和SOX9等)基因表达水平下调;而与去分化相关的特征分子Ⅰ型胶原和多能蛋白聚糖基因表达水平上调,同时,细胞表面分子CD90基因表达上调,而CD14基因表达未见明显变化。结果证实,兔软骨细胞在体外传代过程中可出现快速地去分化现象,呈现出特征基因表达水平的变化,第3代以内的软骨细胞适合应用于软骨组织再生修复。
- 徐磊叶朝阳周燕谭文松
- 关键词：关节软骨损伤软骨组织工程软骨细胞传代培养去分化
- 丁酸钠对羊膜间充质干细胞增殖和成骨分化的影响
- 将人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)置于添加了一系列浓度丁酸钠(SB)的生长培养基和成骨诱导培养基中培养,通过MTT方法测定细胞增殖,采用流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡,由茜素红染色观察钙结节形成,并定量测定Ca离子,...
- 李磊叶朝阳周燕谭文松
- 关键词：丁酸钠羊膜间充质干细胞成骨分化诱导培养基细胞周期
- 文献传递
- 三维预血管化微组织中成纤维细胞促进内皮细胞出芽及迁移的研究
- 2022年
- 目的 构建三维预血管化微组织,探索三维共培养体系中人成纤维细胞(human fibroblasts,HFs)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)出芽和迁移的促进作用。方法 取HUVECs和HFs培养传代至3~5代进行实验。在二维共培养体系中,将HFs行PKH26染色且固定细胞密度后,与HUVECs以不同比例(1∶4、1∶1、4∶1)以及不同接种方式(两种细胞间隔48 h顺序接种、直接混合接种)共培养,荧光显微镜下观察血管网络形成情况。构建三维共培养体系,通过慢病毒转染分别用绿色和红色荧光蛋白标记HUVECs和HFs,将标记细胞接种于多孔微载体上,采用转瓶动态培养,分别制备HF微组织、HUVEC微组织、HF-EC微组织和HF&EC微组织;低渗结晶紫染色法观测微组织中细胞生长情况。将各微组织包埋于纤维蛋白凝胶中,激光共聚焦显微镜下观察HF微组织和HUVEC微组织中细胞生长贴附情况,4种微组织出芽情况以及HF-EC微组织、HF&EC微组织芽体细胞组成、出芽数量及芽体长度。制备HFs条件培养基,观察其对HUVEC微组织出芽的影响,以正常培养基培养作为对照。结果 二维共培养时HFs预培养有助于血管网状结构形成与稳定,且当两种细胞比例为1∶1时效果最佳。三维共培养时各微组织上细胞生长良好,HUVEC微组织无出芽,HF微组织、HF-EC微组织、HF&EC微组织均能出芽,具备良好血管化能力。HF-EC微组织芽体长度及出芽数目均优于HF&EC微组织(P<0.05)。共培养微组织中HF微组织先于HUVEC微组织出芽,两者出芽轨迹一致,芽体由HFs和HUVECs组成。在HFs条件培养基中,HUVEC微组织也能出芽。结论 在转瓶中按1∶1比例顺序接种HFs和HUVECs可制备HF-HUVEC预血管化微组织,且在三维共培养中HFs能够引导和促进HUVECs出芽及迁移。
- 唐珺谈金女叶朝阳周燕谭文松
- 脱细胞基质修饰电纺纤维材料的制备及应用
- 徐家柱叶朝阳周燕谭文松
- 关键词：脱细胞基质成软骨分化间充质干细胞
- 胆管癌细胞体外三维培养模型建立与二维培养体系中生长代谢的比较被引量：1
- 2011年
- 背景:二维细胞培养是目前体外研究恶性肿瘤和检测抗肿瘤药物的常用方法,但存在局限性。目的:建立胆管癌细胞体外三维培养模型,比较在二维和三维培养体系中胆管癌细胞生长及代谢的差异。方法:将胆管癌细胞株QBC939培养于二维培养体系及Cytodex-3或Cytopore-2的三维培养体系中,观察细胞形态和数量,测定培养上清液中葡萄糖、乳酸浓度,计算细胞生长代谢动力学参数。结果与结论:与二维和Cytodex-3三维培养体系相比,由Cytopore-2构成的三维培养体系中细胞在微载体上贴壁率较高,分布均匀,所达到的细胞密度最高,且细胞的葡萄糖比消耗速率和乳酸比生成速率明显低于二维和Cytodex-3三维培养系统(P<0.05)。结果证实,采用Cytodex-3或Cytopore-2微载体培养体系均可建立胆管癌细胞的三维培养模型,且Cytopore-2三维培养体系优于二维和Cytodex-3三维培养体系。
- 李磊周伟佳王健东叶朝阳周燕谭文松
- 关键词：胆管癌细胞微载体乳酸
- 间充质干细胞对软骨细胞形态和增殖的调控
- 近年来,在软骨组织工程中为构建具有更好结构和功能的组织,间充质干细胞(MSCs)和关节软骨细胞(ACs)共培养的研究备受瞩目,但是,这两种细胞之间的相互作用机制仍然不清楚。我们前期研究发现,在非接触式共培养中,MSCs能...
- 徐磊吴玉喜叶朝阳周燕谭文松
- 关键词：软骨再生间充质干细胞软骨细胞共培养
- Plackett-Burman与响应面法相结合优化化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基被引量：4
- 2014年
- 目的采用Plackett-Burman与响应面法相结合优化化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基。方法在自主研发的含蛋白无血清培养基的基础上,通过Plackett-Burman试验和响应面试验设计考察23组营养物质对MDCK细胞生长的影响,以细胞比生长速率、维持时间及最大活细胞密度作为响应值进行筛选和定量优化。以最优化的因子浓度配制化学成分明确的无血清无蛋白培养基,分别于细胞培养板和搅拌瓶中培养MDCK细胞,考察细胞比生长速率、维持时间和最大活细胞密度3个响应值的大小。结果通过Plackett-Burman试验筛选出4种对MDCK细胞生长具有显著性促进作用的因子:半胱氨酸、苏氨酸、亮氨酸和葡萄糖,苏氨酸和亮氨酸有助于提高细胞比生长速率,半胱氨酸和葡萄糖有利于提高最大活细胞密度;该化学成分明确的无血清无蛋白培养基能很好地支持MDCK细胞悬浮生长,单细胞悬浮培养MDCK细胞时,细胞比生长速率可达0.058/h,最大活细胞密度可达32.65×105个/ml,分别比基础培养基提高了2.15和3.09倍。结论采用Plackett-Burman与响应面法相结合优化了化学成分明确的MDCK细胞无血清无蛋白培养基,为采用MDCK细胞大规模工业化生产流感疫苗奠定了基础。
- 黄锭黎文明赵亮范里叶朝阳刘旭平谭文松罗剑陈则
- 关键词：MDCK细胞
- 适于肝样细胞体外培养的替代血清组合物及其使用方法
- 本发明适于肝样细胞体外培养的替代血清组合物，含有 4种维生素、2种氨基酸、2种细胞因子、3种蛋白、3种金属离子、4种激素、2种脂肪酸、4种抗氧化剂和其他物质；所述替代血清组合物的使用方法为：⑴配制含适于肝样细胞体外培养的...
- 周燕梁冰玉杨晨曦李盼盼叶朝阳谭文松
