张付贤
- 作品数：13 被引量：76H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅科技发展计划项目吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 布鲁菌BP26基因的克隆、表达及纯化被引量：1
- 2007年
- 目的克隆布鲁氏菌BP26基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化BP26蛋白。方法提取布鲁氏菌基因组DNA,用PCR扩增出BP26基因,并克隆到pMD18-T载体上,测序正确后,再亚克隆至pET-28a(+)载体上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经组氨酸结合树脂柱纯化,并对纯化后的表达产物进行Western blot鉴定。结果重组质粒pETBP26经Nde I与Sal I酶切后,可见大小分别为5400和700bp的片段,与理论值相符。转化大肠杆菌BL21(DE3)后,37℃诱导4h,经SDS-PAGE分析,高效表达出带有His-tag标签的融合蛋白BP26,纯化后的蛋白纯度达96%,经Western blot分析,目的蛋白具有抗原特异性。结论已成功克隆了BP26基因,且表达并纯化了布鲁氏菌BP26蛋白。
- 闫广谋王兴龙张辉刘锴庞盼娇王学理高健勇李晓燕张付贤王俊霞
- 关键词：布鲁菌基因克隆原核表达纯化
- 布鲁氏菌分子标记、毒力基因缺失株YZ-2生物学特性及免疫原性研究被引量：4
- 2010年
- 试验旨在考查布鲁氏菌分子标记、毒力基因缺失疫苗株YZ-2的生物学特性和免疫原性。对YZ-2菌落形态、生化特性、变异检查试验、毒力、遗传稳定性等生物学特性,以及免疫小鼠后体液免疫和细胞免疫水平进行试验,并与其亲本株S19进行比较。结果显示,YZ-2的形态及生化特性同亲本株S19相一致,但变异检查试验结果显示YZ-2由亲本株的光滑型变为粗糙型;毒力试验证实YZ-2的毒力与亲本株S19显著减弱,且YZ-2遗传稳定性良好。免疫原性试验证实,布鲁氏菌YZ-2在整体上具有与亲本株相似的免疫原性。结果表明,布鲁氏菌分子标记、毒力基因缺失疫苗株YZ-2的安全性较S19进一步提高,稳定性好,且具有与亲本株相近的免疫原性,有很好的应用前景。
- 张付贤李晓艳杨艳玲张辉郎需龙唐婕王兴龙
- 关键词：布鲁氏菌免疫原性
- 靶向口蹄疫病毒IRES区RNA干扰位点的选择及shRNA表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2010年
- 以口蹄疫病毒WFL株为试验株,对口蹄疫病毒的IRES序列进行了保守性分析和RNA二级结构预测,推测高度保守的FMDV复制原点区域位于容易被siRNA结合的IRESRNA二级结构的环区,因此,在该区选择确定了2个siRNA干扰靶位,设计并合成能表达其小发夹结构shRNA的表达模板,克隆到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口蹄疫病毒IRES区的siRNA真核表达系统,为进一步研究针对该区的RNA干扰对口蹄疫病毒的抑制作用打下了基础。
- 崔丽瑾王兴龙任林柱李晓艳郎需龙张付贤王英超
- 关键词：口蹄疫病毒SIRNA
- 猪链球菌2型的研究进展被引量：1
- 2009年
- 猪链球菌2型(SS2)是一种人兽共患的传染病病原菌。在我国和其他养猪业发达的国家,SS2已多次流行,给各国的养猪业带来极大的经济损失,并且危及人类健康。本文对SS2的流行病学特点、培养鉴定方法、毒力因子及其致病机制的研究进展作一综述。
- 王英超党源张付贤王兴龙
- 关键词：猪链球菌2型毒力因子致病机制
- 免疫胶体金技术影响因素分析被引量：29
- 2009年
- 免疫胶体金技术以其快速、准确、简捷的特点,受到国内外科研工作者及基层工作人员的普遍关注。笔者从耗材的选择、胶体金的制备及标记、膜包被条件、缓冲液和产品保存及验证等方面分析免疫胶体金技术的影响因素,为制备胶体金检测产品提供理论依据和技术参考。
- 张付贤王兴龙
- 关键词：免疫胶体金技术影响因素
- 布鲁菌鉴别诊断方法的研究进展被引量：3
- 2008年
- 布鲁菌是严重危害人畜健康的病原菌之一,其鉴别诊断方法受到国内外的普遍关注。本文从布鲁菌感染与具有共同抗原的菌属细菌感染的鉴别以及人工免疫与自然感染的鉴别两方面作一综述。
- 张付贤王英超王兴龙
- 关键词：布鲁菌抗原
- 野生动物布鲁氏菌病被引量：20
- 2010年
- 崔丽瑾王兴龙王英超张付贤唐婕杨艳玲郭振华
- 关键词：布鲁氏菌病野生动物人兽共患病畜牧业发展寄生菌两栖类
- 单增李斯特菌ActA的表达与免疫原性研究被引量：1
- 2008年
- 目的:研究单增李斯特菌ActA原核表达产物的免疫原性。方法:构建原核表达载体pGEX-3X/ActA,IPTG诱导表达并进行SDS-PAGE与Western blot分析,GST亲合层析纯化蛋白,免疫小鼠,检测小鼠体内特异性抗体水平,脾淋巴细胞增值活性及T淋巴细胞亚群,评价表达蛋白的免疫原性。结果:在大肠杆菌中表达了融合蛋白并获得了纯度较高的ActA;免疫小鼠在免疫后7周效价达到高峰,以后逐渐下降;免疫组的脾淋巴细胞增殖活性显著高于对照组(P<0.05);免疫组CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+比对照组分别增加了17.14%、18.03%、32.67%,CD8+细胞降低了12.38%。结论:ActA诱导了特异性体液免疫和细胞免疫。
- 张辉王兴龙李晓艳张爱玲张付贤崔丽瑾卜昭阳
- 关键词：单增李斯特菌ACTA免疫原性
- 四环素及β-内酰胺耐药性基因芯片的制作及优化
- 2010年
- 目的优化四环素及-内酰胺耐药性基因芯片制作和杂交条件。方法设置多组实验,逐一改变影响寡核苷酸在玻片表面固定及芯片杂交效率的实验条件,从中优化出芯片实验的最佳条件。结果得出的最佳条件是:探针以30pmol/μL的终浓度溶于50%二甲基亚砜中,在温度为20℃、湿度70%的条件下点制在基片上;荧光探针纯化后使用2×杂交液在42℃湿盒中杂交5h。结论优化出了耐药基因芯片制作和杂交的最佳条件,总结出芯片制作优化的方法。
- 路浩王兴龙李晓艳郎需龙王瑞红张付贤闫广谋李研东
- 关键词：基因芯片
- 鉴别布鲁菌病自然感染动物与疫苗免疫动物胶体金检测试纸条的研制被引量：11
- 2009年
- 用金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)标记胶体金技术制作金标垫,以亲和层析法纯化的BP26蛋白作为检测抗原(T线),研制胶体金快速检测试纸条。用建立的试纸条检测小鼠布鲁菌感染血清,可成功鉴别牛布鲁菌S19感染和BP26缺失疫苗株YZ-2免疫的小鼠。试纸条检测与布鲁菌属同源性较近的几株细菌的阳性血清,结果无交叉反应;试纸条敏感性高于虎红平板凝集试验检测方法,近似于ELISA方法;准确性同于ELISA法,且更为简便快捷。该试纸条具有鉴别布鲁菌病自然感染和疫苗免疫的应用前景。
- 张付贤李晓艳闫广谋唐婕杨延玲路浩郎需龙王兴龙
- 关键词：布鲁菌病胶体金试纸条
