张广宇
- 作品数：105 被引量：455H指数：12
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生机械工程更多>>
- 结核分支杆菌分泌蛋白Mtb81在大肠杆菌中的高效表达被引量：4
- 2005年
- 目的通过结核分支杆菌Mtb81基因在大肠杆菌中的表达 ,获得大量纯化的重组Mtb81蛋白。方法应用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)技术扩增结核分支杆菌H37RvMtb81DNA序列 ;将目的基因与pGEM T连接 ,转入E .coli DH5a大量繁殖后 ,提取质粒DNA ,酶切鉴定、测序 ;构建pET2 4b Mtb81重组质粒 ,然后转化入表达宿主大肠杆菌BL2 1(DE3) ;诱导转化菌株 ,通过SDS PAGE电泳鉴定Mtb81表达水平 ,采用His.band纯化Mtb81蛋白。结果pGEM T/Mtb81内插入序列测序表明与报道的序列相同 ;pET2 4b Mtb81在大肠杆菌BL2 1(DE3)细胞内以包涵体形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 30 %左右 ,相对分子质量约 88ku ;纯化后的Mtb81样品经SDS PAGE和光密度扫描分析表明其纯度为 95 %左右 ,从培养菌中可获得 2 0 0mg/L左右纯化的蛋白。结论pET2 4b Mtb81大肠杆菌工程菌株能高效表达Mtb81蛋白 ,大量纯化的Mtb81为进一步的研究。
- 李香兰吴雪琼张广宇李娟张灵霞梁建琴
- 关键词：大肠杆菌基因表达聚合酶链反应
- 肺癌K－ras基因突变的检测及临床应用被引量：8
- 1995年
- 为探讨基因检测在肺癌中的应用价值，应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测１０２例肺癌患者手术标本中Ｋ－ｒａｓ基因第１２密码子突变的状况。并将肺腺癌按临床病理特征分组进行对比分析。结果显示，肺癌中总突变率为２４％，腺癌中为４９％，鳞癌为１５％，而小细胞癌中无一例突变。吸烟是促发Ｋ－ｒａｓ基因突变的重要因素（Ｐ＜０．０５），肺腺癌突变组淋巴结转移早、部位远，其一年复发率达８５％，明显高于未突变组（Ｐ＜０．０１）。Ｋ－ｒａｓ基因突变的检测具有重要的临床意义和应用价值。
- 张广宇孙以瑜王孟山朱春贤
- 关键词：肺肿瘤K-RAS基因基因突变聚合酶链反应
- 超声引导下胸腔穿刺抽液并注入尿激酶治疗结核性包裹性胸腔积液被引量：16
- 2009年
- 目的探讨尿激酶对结核性包裹性胸腔积液的治疗作用。方法结核性包裹性胸膜炎197例,分成治疗组(125例)及对照组(72例),对照组为足量联合抗结核及胸腔B超引导抽液治疗,治疗组除此之外,还加用胸腔内尿激酶10万单位+生理理水20ml注入治疗1～2次。结果经过2月的治疗,治疗组胸腔抽液量2615±321ml,对照组1908±336ml(P<0.01);胸液吸收时间治疗组26.3±2.1d,对照组37.2±5.2d(P<0.01);胸膜厚度治疗组2.2±0.11mm,对照组4.2±0.28mm(P<0.01)。结论胸腔内注入尿激酶能促进胸水引流、减轻胸膜肥厚,减少胸膜粘连,疗效肯定,值得推广。
- 林明贵黎晓林张广宇张韬李燕峰刘倩颖张红艳
- 关键词：包裹性胸腔积液结核尿激酶
- 我对新结核病分类的看法被引量：1
- 2007年
- 新的结核病分类标准出台有其积极的意义，但它是一个过渡性标准，仍需进一步完善。我认为新分类法具有如下特点。
- 张广宇
- 化疗对肺结核病患者抗体水平的影响及相关因素探讨被引量：1
- 2009年
- 目的调查结核病患者化学药物治疗(化疗)后体液免疫反应特征,并探讨其影响因素。方法109例接受化疗的结核病患者,采用SPA-ABC ELISA每周检测其血清抗PPD和抗38KDa蛋白抗体滴度,至12周。结果结核病患者化疗后体液免疫反应可分为3种模式,模式1、模式2和模式3患者痰涂片阳性率分别为76.5%、92.6%和0%,其耐多药病例比率分别为11.8%、63.0%和0%。结论化疗后结核病患者体液免疫反应存在3种模式,但不同抗原的抗体应答模式特征不尽相同。病灶结核菌数量及其耐药性可能是导致化疗后不同体液免疫反应模式的重要因素。
- 王金河李兴彬董梅梁建琴张广宇陈志冯士生
- 关键词：肺结核化疗体液免疫应答抗体PPD
- 氩等离子体凝固和冷冻序贯治疗支气管结核被引量：8
- 2011年
- 目的探讨经支气管镜行氩等离子体凝固和冷冻序贯治疗支气管结核的临床疗效和安全性。方法将经痰或支气管肺泡灌洗液抗酸染色涂片、培养,影像学和支气管镜检查及病理结果确诊36例支气管结核患者纳入观察范围,常规抗结核化疗基础上,在支气管镜下行氩等离子体凝固和冷冻序贯治疗,并追踪观察治疗结果。以患者治疗后的主要症状、体征缓解情况,胸部X线或CT扫描,支气管镜复查观察病灶大小、气道黏膜、管腔通畅情况为疗效判断依据,评价治疗结果,同时观察不良反应及并发症。结果 36例支气管结核患者行氩等离子体凝固序贯冷冻治疗,平均治疗(4±2)次/例,完全有效24例(66.7%),部分有效10例(27.8%),轻度有效2例(5.6%)。所有病例未见严重不良反应及并发症。结论氩等离子体凝固和冷冻序贯治疗支气管结核不但可以快速使气道恢复通畅,缓解病人临床症状,还可有效地控制肉芽增生,使治疗后的局部组织创面光滑。氩等离子体凝固和冷冻序贯治疗支气管结核是一种无明显并发症和不良反应,安全有效的方法。
- 陈志张广宇梁建琴王金河唐静王玲玲
- 关键词：氩冷冻疗法
- CFP10/ESAT6融合蛋白-ELISPOT方法的建立及其在结核分枝杆菌感染诊断中的应用价值被引量：16
- 2010年
- 目的建立应用酶联免疫斑点试验（Enzyme Linked-Immunospot Assay,ELISPOT）检测结核分枝杆菌感染的方法 ,评价CFP10/ESAT6融合蛋白抗原在检测结核分枝杆菌感染中的应用价值。方法通过比较不同的实验条件确定ELIS-POT检测结核分枝杆菌感染方法的最佳细胞浓度、孵育时间、蛋白抗原浓度等,建立ELISPOT方法。以PPD皮肤试验作对照。结果 ELISPOT方法的最佳实验条件为：每孔细胞浓度2×105,CFP10/ESAT6融合蛋白抗原浓度20~40μg/mL,细胞孵育时间20h。应用PPD皮试检测30例健康体检者、38例非结核疾病患者和40例结核病患者的阳性率分别为40.0%、0%、72.5%,而ELISPOT检测的阳性率分别为20.0%、10.5%、92.5%。应用ELISPOT检测40例结核病痰菌阳性组和阴性组的灵敏度分别为94.4%、90.9%。结论应用CFP10/ESAT6融合蛋白作为抗原建立的ELISPOT方法可初步应用于诊断结核分枝杆菌感染、辅助结核病诊断。
- 李峤珂吴雪琼阳幼荣梁艳张俊仙李楠叶丽萍梁建琴王安生张广宇张涛王兰
- 关键词：结核病Γ-干扰素
- 结核病免疫学研究进展被引量：7
- 2011年
- 机体的免疫系统是复杂精细的动态平衡系统，结核病的感染、发生、发展及转归与机体免疫系统变化密切相关，细胞免疫是主要的保护性免疫。其免疫调节作用是通过亚群细胞实现的，其中CD4＋和CD8＋T细胞在抵抗结核分枝杆菌感染中有重要作用。但免疫细胞间的相互作用不是孤立的，多种细胞因子参与其中，细胞因子的释放直接影响免疫应答的结果。有效的宿主保护性免疫治疗在结核病的防治中具有极其重要、不可替代的作用。
- 杨楠张广宇
- 关键词：结核病免疫免疫治疗
- 耐多药结核分支杆菌突变基因检测
- 2001年
- 目的研究耐多药结核分支杆菌耐药分子机制 ,建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过 16SrRNA聚合酶链反应 单链构象多态性 (polymerasechainreaction singlestrandconformationpolymorphism ,PCR SSCP)方法对 30株耐多药分离株和 2 0株药物敏感株进行初步分子菌种鉴定 ;通过PCR SSCP分析 30株耐多药结核病临床分离株的rpoB、katG、rpsL基因。 结果经 16SrRNAPCR SSCP菌种鉴定 ,所分析菌株均为结核分支杆菌 ;30株耐多药分离株经SSCP分析 ,5 6 .7%存在rpoB基因突变 ,43 .3 %有katG基因突变 ,91.3 %有rpsL基因突变。 结论rpoB、rpsL、katG基因突变分别是结核分支杆菌耐利福平、链霉素、异烟肼的分子机制 ,耐多药结核病是药物靶基因突变所致。通过PCR SSCP可简便。
- 梁建琴李洪敏张广宇吴雪琼王淑华张俊仙
- 关键词：耐多药结核分支杆菌突变基因聚合酶链反应
- 分枝杆菌菌种鉴定DNA微阵列的初步研究与应用被引量：4
- 2004年
- 目的制备快速鉴定分枝杆菌菌种的DNA微阵列。方法根据19种分枝杆菌标准株的16SRNA序列设计寡核苷酸探针,制备DNA微阵列,通过反向杂交技术鉴定19种分枝杆菌标准株、9种非分枝杆菌标准株和31株分枝杆菌临床分离株带荧光标记的PCR产物。结果该DNA微阵列与9种非分枝杆菌标准株不杂交,具有分枝杆菌特异性;可将19种分枝杆菌标准株鉴定到群或种,具有较高的分枝杆菌种特异性。应用PCR-SSCP分枝杆菌初步菌种鉴定方法对31株分枝杆菌临床分离株进行初步的鉴定,9株为结核分枝杆菌复合群和22株为非结核分枝杆菌。应用DNA微阵列进一步进行菌种鉴定,9株与探针a杂交阳性,为结核分枝杆菌复合群;2株与探针c杂交阳性,为胞内分枝杆菌;8株与探针d杂交阳性,为堪萨斯分枝杆菌或瘰疬分枝杆菌或猿猴分枝杆菌或胃分枝杆菌;1株与探针k杂交阳性,为戈登分枝杆菌;2株与探针p杂交阳性,为龟分枝杆菌脓肿亚种;2株与探针r杂交阳性,为偶然分枝杆菌;1株与探针s杂交阳性,为草分枝杆菌;2株与探针a和p杂交阳性,为结核分枝杆菌和龟分枝杆菌脓肿亚种复合感染株;1株与探针a和r杂交阳性,为结核分枝杆菌和偶然分枝杆菌复合感染株;3株与该芯片杂交阴性。2株临床分离株经基因测序也证实DNA微阵列鉴定的特异性。结论该DNA微阵列有可能简便、快速。
- 吴雪琼张俊仙张琼庞劲松梁建琴张亮李洪敏陆阳雷红张广宇
- 关键词：DNA微阵列菌种鉴定分枝杆菌聚合酶链反应
