成岩
- 作品数：22 被引量：62H指数：5
- 供职机构：内蒙古民族大学医学院更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金博士科研启动基金吉林省科技厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白B细胞线性抗原表位的预测与鉴定被引量：10
- 2015年
- 目的预测猪布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白B细胞线性抗原表位,并鉴定其抗原性。方法以布鲁氏菌S2株为对象,采用NCBI提供的BLAST程序分析其L7/L12蛋白与原核模式生物大肠埃希菌L7/L12蛋白的同源性;使用IEDB网络服务器初步预测B细胞线性表位;在大肠埃希菌L7/L12蛋白空间结构的基础上,使用SWISS-MODEL服务器构建猪布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白空间结构模型,参考空间结构特点筛选符合形成表位的区域,同时分析区域内易形成表位的3种氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、半胱氨酸)所在位置,综合分析以上结果获得所预测表位;以预测表位序列为基础,人工合成表位多肽-匙孔血蓝蛋白复合抗原并包被酶标板,分别以rL7/L12多克隆抗体及小鼠布鲁氏菌免疫血清为一抗,采用间接ELISA方法验证所预测表位的抗原活性。结果 L7/L12含有潜在的B细胞线性抗原表位,所预测表位区位于N末端第51-66aa,60-75aa,87-102aa;ELISA检测合成的表位多肽蛋白复合物抗原性,60-75aa表位能够与rL7/L12多克隆抗体及布鲁氏菌免疫鼠血清抗体结合。结论筛选的猪布鲁氏菌L7/L12蛋白B细胞线性表位位于N末端第60-75aa区域,具有与特异性血清结合的能力,为布鲁氏菌的感染诊断与疫苗研发奠定了基础。
- 成岩白靓董丽刚韩梅王敏张冬丽霍万学
- 关键词：布鲁氏菌表位生物信息学
- 布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2014年
- 目的用大肠埃希菌表达布鲁氏菌S2株L7/L12蛋白,制备其多克隆抗体。方法设计引物,以S2弱毒株DNA基因组为模板扩增目的基因片段L7/L12,构建pET28a-L7/L12质粒并转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,SDS-PAGE检测表达蛋白的可溶性及其分子质量;金属亲和层析法纯化目的蛋白,BCA法对纯化蛋白定量。将rL7/L12蛋白与弗氏完全佐剂混合(终浓度为0.5mg/ml),每次1ml分两次间隔21d免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。免疫结束后12d,颈静脉采血,分离血清,采用间接ELISA法检测血清抗体效价。以免疫血清1∶200倍稀释作为一抗,采用Western blot分析其与r-L7/L12、布鲁氏菌S2株全菌体蛋白及大肠埃希菌DH5α全菌体蛋白结合的特异性。结果经测序与酶切鉴定,成功构建表达载体pET28a-L7/L12,SDS-PAGA分析表达产物部分为可溶性,分子质量单位约为14ku;SDS-PAGE分析亲和纯化蛋白为单一条带,蛋白质含量为0.8mg/ml。间接ELISA检测免疫血清抗体效价为1∶12 800,该抗体能够与r-L7/L12、布鲁氏菌S2株全菌体蛋白结合,而不与大肠埃希菌DH5α菌体蛋白结合。结论成功克隆L7/L12基因并表达出目的蛋白,制备的抗布鲁氏菌S2株r-L7/L12多克隆抗体能特异识别该表达蛋白。
- 成岩白靓董丽刚韩梅王敏张冬丽霍万学
- 关键词：布鲁氏菌基因克隆多克隆抗体
- 重组海葵毒素AP-b毕赤酵母表达体系的建立及其鉴定被引量：1
- 2011年
- 按照毕氏酵母的偏爱密码子,设计并合成了海葵毒素AP-b的基因序列,将合成基因序列通过一系列操作导入毕氏酵母表达载体pPICZα中,以电穿孔方法转化毕氏酵母菌株X33,通过PCR法鉴定,筛选出能够表达重组海葵毒素的酵母菌株.结果表明,构建出海葵毒素AP-B毕赤酵母真核表达体系,并鉴定出4株含有海葵毒素基因的毕赤酵母工程菌.
- 成岩白靓颜炜群张新民汤文莉孙晓宇姚闯
- 关键词：毕赤酵母基因表达
- 一种新型移液管架
- 本实用新型涉及一种新型移液管架，目前在分子生物学、微生物学、医学等学科的实验中，常会涉及活菌实验，要求每种试剂都配备单独的移液管，且在实验过程中，要保证不同试剂瓶和移液管之间设置隔离，以避免相互污染。本实用新型包括底座、...
- 成岩
- 文献传递
- 自主复制序列结合因子1结合位点拷贝数对基因沉默的影响
- 2011年
- 目的研究自主复制序列结合因子1(Autonomously replicating sequence-Binding Factor,Abf1)的拷贝数对基因沉默的影响。方法用右侧带有报告基因URA3的不同拷贝数的abf1p结合位点,以及不带任何结合位点的序列替代酵母基因组HML区域的HML-I沉默子后,在HML-E存在和不存在这两种情况下,比较URA3基因表达量的差异。结果在HML-E沉默子存在的条件下,在缺失尿嘧啶合成缺陷型培养板(-ura)上,所有的菌体生长状态相差不多,但是在5-氟乳清酸(5-Fluoroorotic Acid,FOA)平板上,随拷贝数的增加,菌株生长状态越好。但是在HML-E不存在的条件下,无论是-ura还是FOA平板上酵母都无法存活。结论 Abf1p结合位点独自无法对插入的外源基因进行沉默,它形成基因沉默需要沉默子的帮助,并且随着拷贝数增加基因沉默的能力增强。
- 张新民于群毕鑫刘楠王浩天成岩颜炜群
- 关键词：基因沉默酿酒酵母
- H7N7亚型禽流感病毒血凝素B细胞和Th细胞表位预测及初步鉴定被引量：5
- 2010年
- 预测H7N7亚型禽流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)B细胞和Th细胞(THelpCell,辅助T细胞,在免疫调节中起促进作用的T细胞亚群。)相关抗原表位,并对所获表位的抗原性进行初步鉴定。根据禽流感流行趋势,从GeneBank下载H7N7禽流感病毒HA氨基酸序列,使用生物信息学方法,对所下载序列进行预测与分析,获得H7N7亚型禽流感病毒血凝素B细胞和Th细胞相关抗原表位。通过H7亚型禽流感病毒阳性血清,初步验证所选表位抗原性。获得了5个H7N7亚型禽流感病毒候选B细胞和Th细胞表位,经过间接ELISA方法分析,其中HA165～178,HA180～193,HA241～255表序列相对保守,与流行的H7N7亚型禽流感病毒HA相应区域具有较好的一致性,同时具有与H7型禽流感病毒阳性血清抗体结合能力,预示了其成为功能表位的可能。所筛选的表位具有成为H7N7亚型禽流感病毒HAB细胞和Th细胞相关抗原表位的可能,为H7N7亚型禽流感表位疫苗的研究奠定基础。
- 白靓金宁一成岩石毅鲁会军南文龙田明尧赵翠青张金双关铭
- 关键词：禽流感病毒血凝素抗原表位
- 双亚型(H5/H7)流感病毒血凝素基因真核表达质粒的构建及其在BHK细胞中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建双亚型(H5/H7)流感病毒血凝素真核表达载体,并在幼仓鼠(BHK)细胞中进行表达。方法通过PCR方法分别改造流感病毒H5亚型血凝素(HA)和H7亚型HA基因片段,在融合片段间引入具有柔性功能的(G4S)3linker和具有自裂解功能的口蹄疫蛋白2A linker。将融合后的基因片段H5HA-H7HA克隆至真核表达载体pVAX1。选用BHK真核表达细胞系,用脂质体转染法将纯化后的表达质粒在细胞进行表达,转染后48h,用间接免疫荧光法(IFA)检测目的基因的表达情况。结果表达双亚型(H5/H7)流感病毒血凝素基因的重组真核表达质粒pVAX1-H5HA-H7HA经酶切和测序证明构建正确。转染重组质粒的BHK细胞可检测到目的蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pVAX1-H5HA-H7HA,并在BHK真核细胞中正确表达,为H5、H7双亚型核酸疫苗的研究奠定了基础。
- 白靓金宁一成岩石毅王芳鲁会军南文龙关铭
- 关键词：流感病毒血凝素真核表达BHK细胞
- 留学生医学免疫学教学体会与思考被引量：4
- 2016年
- 当前留学生教育已经成为我国高等教育的重要组成部分。医学免疫学是留学生课程体系中非常重要的基础课之一,对后续临床课程的学习具有深远的意义。文章通过作者在留学生医学免疫学课程中的教学实践并加以总结,分析留学生医学免疫学教学中存在的问题及解决对策,为提高留学生教学质量奠定基础。
- 成岩
- 关键词：留学生医学免疫学教学
- 提高青年教师生物化学实验课教学效果的初探被引量：2
- 2012年
- 生物化学实验教学是生命科学专业领域中最重要的实验教学内容之一。本文目的是根据自身的教学体会,初步探讨如何提高青年教师生物化学实验课教学效果。结合青年教师自身特点,从多方面改进生物化学实验课教学方法,扎实推进教学效果,为生物化学实验课的教学改革奠定基础。
- 白靓成岩高鸿蒙魏永春曹瑞珍
- 关键词：生物化学实验教学青年教师
- 双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗的构建及其免疫原性检测被引量：1
- 2010年
- 目的:构建双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗,并检测其免疫原性。方法:构建共表达流感病毒H5亚型血凝素(HA)和H7亚型HA的DNA疫苗,采用间接免疫荧光法(IFA)检测目的蛋白在幼仓鼠肾细胞(BHKcell)中的表达。分为pVAX1-H5-H7、pVAX1-H5、pVAX1-H7和pVAX1空质粒对照组4组(每组15只)进行小鼠免疫实验,并应用ELISA法检测小鼠血清抗体,流式细胞术检测小鼠脾T淋巴细胞亚群数量。结果:所构建的双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗在BHK细胞中的表达产物可激发荧光抗体产生绿色免疫荧光,且对照pVAX1空载体转染BHK细胞无免疫荧光产生。使用双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗免疫小鼠后,小鼠产生了针对H5和H7抗原的血清特异性抗体,流式细胞术检测免疫组小鼠脾T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+的数量显著高于对照组(P<0.05)。结论:成功构建的双亚型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗可以诱导小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答。
- 白靓金宁一成岩石毅鲁会军田明尧南文龙赵翠青张金双关铭
- 关键词：流感病毒A型体液免疫细胞免疫
