杨文理
- 作品数：27 被引量：48H指数：5
- 供职机构：泸州医学院基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省教育厅自然科学科研项目四川省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人VIGILIN的shRNA真核表达质粒的构建及其对肝癌细胞周期影响的初探被引量：2
- 2008年
- 目的构建靶向人高密度脂蛋白结合蛋白(VIGILIN)的shRNA真核表达载体,并初步探索VIGILIN与人肝癌细胞系HepG2细胞周期是否有关联。方法构建人VIGILIN的shRNA重组质粒,并将重组质粒pSIREN-VIG转染HepG2细胞,采用RT-PCR和Western-blot检测HepG2细胞VIGILIN mRNA和蛋白的表达,并用流式细胞术检测细胞周期是否有所改变。结果1HepG2细胞转染pSIREN-VIG后,VIGILIN的表达被特异、有效地抑制。转染48h后,VIGILIN的表达从mRNA和蛋白的水平都有明显的减少;2VIGILIN表达抑制后,G2/M期细胞所占比例增加:相对于三个对照组(未转染组2.4%,脂质体转染组4.9%和转染pSIREN-GFP组6.5%),实验组(转染pSIREN-VIG组)G2/M期细胞增加到9.4%。结论我们成功的构建了能特异、有效的抑制人VIGILIN表达的shRNA表达质粒,人VIGILIN能够影响到细胞周期的正常运行,导致G2/M期阻滞。
- 谢晓砚魏玲杨文理葛亚俊覃扬
- 关键词：RNA干扰细胞周期
- 人VIGILINN端融合蛋白的表达及亚细胞定位被引量：2
- 2009年
- 目的原核表达人VIGILINN端基因,制备抗人VIGILIN的多克隆抗体,对人VIGILIN作亚细胞定位。方法用PCR扩增人VIGILIN基因N端,克隆到表达载体pGEX-4T-2中,并在大肠杆菌中以IPTG诱导表达。产物经Glutathion Sepharose 4B纯化后免疫新西兰白兔制备抗人VIGILINN端融合蛋白抗体,采用ELISA和Western blot鉴定抗体的效价及特异性。通过细胞免疫荧光染色,观察VIGILIN在细胞中的分布。结果在28℃1、mmol/L IPTG诱导3 h的最优条件下成功表达GST-VIGILIN N端融合蛋白,抗体ELISA滴度为1∶16000,Western blot证实抗体特异性较高,VIGILIN在细胞质和核中均有分布,核中的分布集中在核膜内侧和靠近DAPI染色显著的区域。结论成功表达人VIGILIN N端融合蛋白和制备兔抗人VIGILIN抗体,并应用于亚细胞定位,为研究人VIGILIN的性质和功能奠定基础。
- 魏玲张朝良蒋磊杨文理谢晓砚覃扬
- 关键词：原核表达多克隆抗体亚细胞定位
- 构建小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组分析鉴定的方法模型被引量：1
- 2008年
- 背景：磷酸化蛋白质组的分析鉴定是目前蛋白质组学技术研究的主要目标之一，然而以质谱为核心的鉴定技术尚不完善。目的：建立一种简便易行、适于在一般实验室普及的分析鉴定磷酸化蛋白质组的方法并应用于小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组的模型。设计、时间及地点：观察对比实验，于2003-07／2004-06在泸州医学院生物化学教研室及医学分子生物学实验室完成。材料：封闭群乳昆明小鼠100只，年龄1-3d，体质量3-6g，雌雄各半；^32P-NaH2PO4由中国北京原子能研究所提供。方法：将长势相当的体外培养的乳小鼠肝细胞随机分成两组。一组作同位素^32P标记后液氮终止反应，裂解细胞，收集蛋白并定量，双向电泳分离蛋白，干胶及放射自显影，建立小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组的放射自显影图谱，初步确定6种靶标磷酸化蛋白EPs15等；另一组直接裂解细胞，收集蛋白并定量，双向电泳分离蛋白后半干式电转移至PVDF膜，根据靶标蛋白EPs15等的理论等电点和分子量剪下6张小膜。主要观察指标：采用持久性化学发光检测技术确证初步鉴定的6种靶标蛋白EPs15等。结果：①小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组的放射自显影图谱显示约100个蛋白质斑点，经PDQuest 2D软件结合蛋白质数据库初步鉴定出已知的6种磷酸化蛋白EPs15等。②6种靶标蛋白的免疫印迹-化学发光图谱上均只出现了1个特异蛋白质斑点，与放射自显影图谱上的斑点基本匹配。结论：实验建立的同位素标记结合免疫印迹-化学发光的方法分析鉴定磷酸化蛋白质组简单、实用、灵敏、高效。
- 姚富丽刘友平尹康杨文理李洪
- 关键词：同位素标记双向电泳免疫印迹化学发光磷酸化蛋白质组
- 基因芯片在肝癌研究中的应用进展被引量：1
- 2005年
- 杨文理段承刚宋杰
- 关键词：基因芯片肝癌基因表达恶性肿瘤
- 解剖学教学中培养学生学习兴趣被引量：2
- 2008年
- 李本全杨文理
- 关键词：解剖学教学人体形态结构人体器官人体解剖学
- 人vigilin基因全长编码区的分段克隆及鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的为了探讨全长VIGILIN、VIGILIN的N端、VIGILIN的C端以及不同KH组合的功能,采取5分段扩增的策略克隆全长vigilin基因。方法根据vigilin基因全长编码区内的限制性核酸内切酶位点,将vigilin基因全长编码区分为5段。从意外死亡健康成人肝组织中提取总RNA,RT-PCR分段扩增目的基因,克隆至pUC118载体,测序,并亚克隆至pUC118载体,对接头部位测序。结果获得8个大小不同的人vigilin基因编码区片段和全长编码区。重组全长vigilin质粒pC118/vigilin(12+345)经测序,与GenBank上登陆的人vigilin cDNA(NM:005336)序列完全一致。结论用分段克隆的方法成功获得了人vigilin基因的全长编码区。
- 杨文理武静谢晓砚魏玲覃扬
- 关键词：克隆
- 用重叠延伸PCR技术纠正人工合成乙型肝炎病毒核心抗原基因中的突变
- 2010年
- 目的:利用重叠延伸PCR技术纠正人工合成乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因中的突变碱基。方法:针对构建的重组质粒PGEM-7Z/HBcAg中的两处突变设计三对引物,PCR定点突变后对重新构建的PGEM-7Z/HBcAg进行菌落PCR和酶切鉴定,初步筛选的阳性克隆进一步通过序列分析进行确证。结果:经PCR定点突变后,测序证明HBcAg基因序列与设计完全一致。结论:用该方法成功纠正了人工合成的乙肝病毒核心抗原基因中两个碱基的缺失,获得了预期的目的基因。
- 王丽杨文理龚舒梅志强何涛
- 关键词：乙肝病毒核心抗原重叠延伸PCR定点突变
- 中药成分CDP对乳腺癌细胞P16,E-CADHERIN去甲基化作用的研究被引量：6
- 2009年
- 目的探讨中药成分CDP对乳腺癌细胞系T47D和MDA-MB-435的抑癌基因P16和E-CADHERIN启动子区CpG岛的去甲基化作用。方法培养人乳腺癌细胞系T47D和MDA-MB-435,分别用不同剂量、同一剂量不同时间的CDP和5-azacytidine(5-aza-C)处理细胞;用甲基化特异性PCR(MSP)和半定量RT-PCR,检测细胞中P16和E-CADHERIN基因的甲基化改变和RNA表达恢复情况。结果①在25、50、75和100μmol/L剂量的CDP持续作用6d后,T47D细胞P16基因启动子区CpG岛甲基化特异性条带减弱,在100μmol/L剂量时消失,在4个剂量CDP作用下,非甲基化特异性条带均重新出现;在75和100μmol/L浓度作用下时,T47D细胞中出现P16基因重新表达;②在50μmol/LCDP作用144h后,T47DP16基因启动子区CpG岛甲基化特异性条带仍存在;非甲基化特异性条带24h出现并持续到144h;在药物作用144h时,P16出现表达。③在MDA-MB-435细胞中,用不同剂量CDP处理或同一剂量CDP处理不同时间后,均未观察到E-CADHERIN非甲基化条带的出现,RT-PCR也未检测到E-CADHERIN基因的表达。结论在T47D细胞中,中药成分CDP可以剂量、时间依赖的形式逆转高甲基化的P16基因,而对MDA-MB-435细胞中高甲基化的E-CADHERIN基因无效,提示CDP药物存在靶分子反应多样性。
- 柴新娟栾菊杨文理张迎春葛亚俊覃扬
- 关键词：P16E-CADHERIN去甲基化T47D
- 急性缺血再灌注肾损伤过程中Mg^(2+)及K^+协同胰岛素的对抗效应
- 2007年
- 目的:在肾移植术后可能发生急性缺血再灌注性肾损伤。作者前期实验表明在肾缺血再灌注期间注射胰岛素可减轻缺血再灌注肾损伤,在此基础上,在胰岛素溶液中加入天冬氨酸钾镁,观察Mg2+,K+协同胰岛素对家兔急性肾缺血再灌注损伤的影响,并分析其可能机制。方法:实验于2002-02/04在泸州医学院生理实验室完成,动物实验方法符合动物伦理学要求。①实验材料及方法:选用健康成年日本大耳白兔27只,按随机数字表法分为3组(n=9),即缺血再灌注组、缺血再灌注胰岛素处理组及对照组,前两组采用钳夹肾动脉法建立急性肾缺血再灌注肾损伤模型,缺血再灌注胰岛素处理组再灌注的同时给予胰岛素溶液,含胰岛素3U/kg,葡萄糖1.5g/kg,K+4mg/kg,Mg2+1.7mg/kg。②实验评估:分别观察3组动物缺血再灌注2h,48h后,血清尿素氮、血糖、血清及肾组织中丙二醛含量以及肾组织超微结构变化。结果:23只动物进入结果分析。①肾缺血再灌注48h后,缺血再灌注组血清尿素氮含量显著高于对照组(P<0.01),缺血再灌注胰岛素处理组与对照组差异无显著性意义(P>0.05)。②缺血再灌注组血清及肾组织中丙二醛含量显著高于对照组(P<0.05),缺血再灌注胰岛素处理组丙二醛含量显著低于缺血再灌注组(P<0.05)。③缺血再灌注2h后,3组动物血糖均较术前增高,但以缺血再灌注组增高更为显著,与对照组比较差异具有显著性意义(P<0.05),缺血再灌注胰岛素处理组与对照组差异无显著性意义(P>0.05)。④对照组肾组织超微结构正常,缺血再灌注组肾组织呈变性和坏死改变,缺血再灌注胰岛素处理组肾组织轻度变性。结论:Mg2+,K+可协同胰岛素减轻家兔急性缺血再灌注性肾损伤,其作用途径可能和降低血糖、抗自由基损伤、改善能量代谢、减轻钙超载、防止低血钾等因素有关。
- 杨文理何涛曾凡才姚富丽陈川
- 关键词：再灌注损伤胰岛素肾移植
- 肝癌患者E-cadherin基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究被引量：3
- 2011年
- 目的探讨抑癌基因E-cadherin基因启动子区CpG岛甲基化与人原发性肝癌(简称肝癌)发生、发展的关系,及其在肝癌早期诊断中的意义。方法用巢式甲基化特异性PCR对34例肝癌患者的癌组织、距离癌灶边缘>3 cm的远癌组织及10例未发生肝癌的肝硬变患者的肝硬变组织中E-cadherin基因启动子区CpG岛的甲基化状态进行检测。结果 E-cadherin基因启动子区CpG岛甲基化阳性率,在34例肝癌组织中为61.76%(21/34),明显高于远癌组织中的29.41%(10/34),P<0.05;在10例无肝癌的肝硬变组织中为50.00%(5/10),与肝癌组织和远癌组织比较差异均无统计学意义(P>0.05);在4例正常肝组织中均为甲基化阴性。联合检测癌组织E-cadherin基因CpG岛甲基化与血清甲胎蛋白两种分子标志物,肝癌的检出率可达82.35%。结论抑癌基因E-cadherin启动子区CpG岛甲基化可能在肝癌的发生、发展中起到重要作用,并且可能是早期事件,其在肝癌的临床诊断及治疗中的意义值得进一步深入研究。
- 黄文庆杨文理柴新娟陈克霏魏玲李波覃扬
- 关键词：肝癌E-CADHERIN基因CPG岛DNA甲基化
