林明刚
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：青岛大学医学院附属医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Bcl-2shRNA稳定转染联合γ射线对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响
- 目的:观察Bcl-2shRNA稳定转染联合γ线照射对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响.方法:构建针对Bcl-2基因的干扰质粒PGPH 1/GFP/Neo,经脂质体介导转染SGC-7901细胞,G418筛选稳定表达的细胞...
- 沈方臻王宁宁林明刚
- 稳定转染靶向bcl-2的shRNA对胃癌SGC-7901细胞株增殖影响
- 2010年
- 目的探讨稳定转染靶向bcl-2的小发夹RNA(shRNA)对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响。方法构建针对bcl-2的shRNA质粒表达载体,转入SGC-7901细胞,筛选稳定转染的细胞克隆继续压力培养。RT-PCR方法检测稳定转染后SGC-7901细胞bcl-2 mRNA的表达以及对细胞增殖和凋亡的影响。结果稳定转染shRNA后,SGC-7901细胞的bcl-2 mRNA表达明显下降;细胞增殖能力及凋亡率无明显变化。结论稳定转染shRNA能长效抑制SGC-7901细胞bcl-2 mRNA的表达,为后续基因治疗研究提供了实验依据。
- 林明刚沈方臻肖文静牟坤
- 关键词：基因,BCL-2小发夹RNA转染
- 稳定转染靶向bcl-2的shRNA对胃癌SGC-7901细胞株5-FU/DDP敏感性的影响
- 目的：探讨稳定转染靶向bc1-2的小发夹RNA对胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡及化疗敏感性的影响。
方法：构建针对bc1-2的小发夹RNA质粒表达载体，转入SGC-7901细胞，筛选稳定转染的细胞克隆继续压力...
- 林明刚
- 关键词：化学疗法
- 文献传递
- 靶向bcl-2基因短发卡RNA干扰真核质粒表达稳定株筛选和建立被引量：3
- 2010年
- 目的构建针对bcl-2基因的短发卡RNA(shRNA)干扰真核质粒表达载体,转染到bcl-2基因高表达的胃癌细胞株SGC-7901中,并筛选出稳定低表达bcl-2基因的细胞株。方法针对bcl-2基因的mRNA序列设计、合成4对寡核苷酸序列,插入质粒载体pGPH1/GFP/Neo中,经脂质体介导转染SGC-7901细胞。RT-PCR检测bcl-2基因在mRNA水平的变化,MTT法检测bcl-2基因沉默后胃癌SGC-7901细胞的增殖情况。基因沉默效果最好的一组,经G418筛选以得到稳定表达株。结果与对照组相比,转染成功后的细胞bcl-2基因在mRNA水平均显著下降,细胞增殖速度明显降低(t=2.41,P<0.05);并筛选出稳定表达shRNA2质粒的阳性克隆。结论本研究成功利用针对bcl-2基因的shRNA质粒载体筛选出稳定低表达bcl-2基因的SGC-7901细胞,为胃癌的基因治疗研究奠定了基础。
- 沈方臻林明刚肖文静王宁宁
- 关键词：基因BCL-2RNA干扰质粒
- Bcl-2shRNA稳定转染联合γ射线对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响
- 2011年
- 目的观察Bcl-2shRNA稳定转染联合γ线照射对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响。方法构建针对Bcl-2基因的干扰质粒pGPH1/GFP/Neo,经脂质体介导转染SGC-7901细胞,G418筛选稳定表达的细胞株,γ线照射后形成4组细胞,分别命名为SGC-7901(A组)、照射/SGC-7901(B组)、Bcl-2shRNA/SGC-7901(C组)、照射/Bcl-2shRNA/SGC-7901(D组)。CCK-8检测细胞增殖,AO/PE观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western-blot测定Bcl-2蛋白表达量的改变。结果 Bcl-2shRNA、照射均可抑制Bcl-2蛋白表达,且二者有协同作用,差异有统计学意义(P<0.05);D组细胞生长慢于B组、C组细胞,B、C、D组细胞增殖抑制率分别为(27.00±5.27)%、(30.10±6.49)%、(98.40±11.35)%。A、B、C、D组细胞凋亡率分别为(3.80±0.22)%、(20.80±4.15)%、(23.20±4.34)%、(92.90±25.90)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Bcl-2基因siRNA干扰联合γ线照射可协同抑制SGC-7901细胞中Bcl-2的表达,诱导细胞凋亡。
- 王宁宁沈方臻林明刚于丽姚如永
- 关键词：B细胞淋巴瘤/白血病-2细胞凋亡
- 稳定转染Bcl-2 shRNA对胃癌细胞SGC-7901化疗敏感性的影响被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨稳定转染靶向Bcl-2基因的短发夹RNA(shRNA)对胃癌细胞株SGC-7901化疗敏感性的影响。方法:筛选出稳定转染Bcl-2 shRNA质粒的胃癌SGC-7901细胞株,将其与不同浓度的氟尿嘧啶(5-FU)或顺铂(DDP)作用,未转染的细胞作为对照。RT-PCR法检测稳定转染前后SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA的表达水平,MTT法检测5-FU或DDP的IC50,流式细胞仪分析细胞的凋亡率。结果:稳定转染shRNA的胃癌SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA的表达明显下降;shRNA联合5-FU的IC50为(14.36±1.63)mg/L,对照组为(35.62±1.95)mg/L,t=2.57,P<0.05;shRNA联合DDP的半数抑制浓度(IC50)为(2.53±0.46)mg/L,对照组为(6.89±0.52)mg/L,t=2.52,P<0.05;流式细胞术检测显示,shRNA联合化疗明显提高SGC-7901细胞的凋亡率,t=2.60,P<0.05。结论:稳定转染Bcl-2 shRNA的胃癌SGC-7901细胞株,其Bcl-2 mRNA的表达能够在较长时间内受到抑制,并提高对化疗药物5-FU及DDP的敏感性。
- 沈方臻朱静娟林明刚肖文静王宁宁
- 关键词：转染基因,BCL-2药物耐受性
- 人Bcl-2基因短发夹样RNA真核表达载体的构建和鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建人Bcl-2基因序列特异性的短发夹样RNA(Short Hairpin RNA,shRNA)质粒载体。方法根据Bcl-2基因序列及shRNA设计原则,化学合成4段编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGPH1/GFP/Neo中H1启动子的下游,重组构建RNAi质粒,同时设立阴性对照,并对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定。结果限制性内切酶PstI和BamHI酶切显示设计合成的shRNA编码序列被成功插入pGPH1/GFP/Neo质粒中,测序结果证实插入片断与设计序列完全一致。结论针对人Bcl-2的shRNA真核表达载体成功构建及鉴定为进一步研究Bcl-2功能奠定了良好的基础。
- 肖文静沈方臻林明刚
- 关键词：短发夹RNASHRNA质粒载体RNAI
