王敬文
- 作品数：21 被引量：106H指数：6
- 供职机构：复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金上海市科技兴农重点攻关项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 水稻Osfad8编码序列及其应用
- 本发明属分子生物学、基因工程技术领域，具体提供了一种在水稻中表达的ω－3脂肪酸脱氢酶(fad8)的编码序列及其在提高植物18碳三烯酸(α－亚麻酸)含量的应用。本发明涉及包含上述基因的重组表达载体。还涉及所说的表达载体转化...
- 明凤王敬文沈大稜
- 文献传递
- 蚊龄对斯氏按蚊感染伯氏疟原虫能力的影响被引量：2
- 2016年
- 目的 研究不同日龄斯氏按蚊（Anopheles stephensi）传播伯氏疟原虫（Plasmodium berghei）能力的变化以及可能机制。 方法 选取4日龄和25日龄雌性斯氏按蚊，用原虫血疟为4%～8%的伯氏疟原虫感染BALB/c小鼠饲喂蚊虫，感染后8 d解剖蚊虫肠道，镜检计数蚊虫肠道中疟原虫卵囊数，比较4日龄和25日龄蚊虫对疟原虫易感性的变化。选取感染前4日龄和25日龄雌性斯氏按蚊，采用LB平板培养法检测其体内可培养共生菌的量，用实时定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）方法检测其体内的共生菌总量。选取感染前4日龄和25日龄雌性斯氏按蚊，采用qPCR检测其体内天蚕抗菌肽1（cecropin，CEC1）、CEC3、防御素（defensin，DEF；gambicin，GAM）、攻击素（attacin，ATT）以及一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase，NOS）、双氧化酶（dual oxidase，DUOX）和含硫酯蛋白1（thioester protein 1，TEP1）等主要免疫效应因子的表达水平。 结果 感染伯氏疟原虫后8 d，4日龄斯氏按蚊中肠道疟原虫卵囊中位数是139，25日龄按蚊卵囊数中位数是3，4日龄按蚊伯氏疟原虫的感染密度是25日龄的46倍（P〈0.01）。qPCR结果显示，25日龄蚊虫体内共生菌总量为4日龄蚊虫的1.5倍，差异有统计学意义（P〈0.05 ）；LB平板培养法结果显示，25日龄肠道可培养共生菌平均为28 889个菌落形成单位（colony forming units，cfu），是4日龄（3 200 cfu）的9倍，差异有统计学意义（P〈0.01）。25日龄斯氏按蚊体内NOS基因表达量是4日龄的2.4倍（P〈0.01），抗菌肽ATT、DEF、CEC3、CEC1的表达量分别为4日龄的27%、48%、14%、61%，差异均有统计学意义（P〈0.05）；4日龄与25日龄斯氏按蚊体内GAM、DUOX、TEP1的表达量均未发生显著变化。 结论 随斯氏按蚊日龄增加，斯氏按蚊抗菌肽水平发生显著下调，体内共生菌增多，NOS表达量上调，按蚊抵抗疟原虫的能�
- 宋秀梅王敬文
- 关键词：年龄免疫反应共生菌伯氏疟原虫
- 斯氏按蚊肽聚糖识别蛋白S2调节共生菌稳态的功能分析
- 2023年
- 目的研究斯氏按蚊肽聚糖识别蛋白S2(PGRP‑S2)的功能及其对按蚊体内共生菌稳态的影响。方法将羽化后2~4日龄雌性斯氏按蚊分为对照组(喂食10%蔗糖溶液)、感染血组(叮咬原虫血症为4%~8%的伯氏疟原虫ANKA感染小鼠)和健康血组(叮咬健康小鼠),每组60只,饱血24 h后分离中肠和其余组织,用Trizol法提取RNA,实时荧光定量PCR(RT‑qPCR)检测pgrp⁃s2基因的相对转录水平。将羽化后0~1日龄雌性斯氏按蚊分为对照组(喂食10%蔗糖溶液)与抗生素处理组(喂食含有青霉素、链霉素和庆大霉素的10%蔗糖溶液),每组30只,喂养5 d后分离中肠和其余组织,RT‑qPCR检测pgrp⁃s2基因的相对转录水平。将雌性斯氏按蚊分为pgrp⁃s2敲低组和绿色荧光蛋白基因(gfp)对照组,每组60只,分别注射pgrp⁃s2的双链RNA(dsRNA)和gfp基因dsRNA(69 nl/只),2 d后每组取蚊虫提取RNA,RT‑qPCR检测pgrp⁃s2的相对转录水平,提取DNA并使用16S rRNA特异性引物PCR检测蚊虫体内共生菌总量。分别取30只pgrp⁃s2敲低组和gfp对照组按蚊,用107个/ml摩氏摩根氏菌液浸湿棉球喂养5 d后,提取RNA,RT‑qPCR检测获得共生菌16S rRNA相对总量和摩氏摩根氏菌的相对数量;提取pgrp⁃s2敲低组和gfp对照组按蚊中肠组织RNA,转录组测序后进行聚类分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能注释和富集分析。使用SMART网站预测分析PGRP‑S2氨基酸序列后利用CLC Main Workbench软件进行比对。克隆按蚊pgrp⁃s2基因,利用昆虫杆状病毒表达系统(pFastbacⅠ)在SF9细胞中表达PGRP‑S2重组蛋白,Western blotting检测蛋白表达情况。取10、20、40μg/ml纯化后的PGRP‑S2重组蛋白溶液(以蛋白缓冲液为对照)分别与40μg赖氨酸(Lys)型肽聚糖和二氨基庚氨酸(DAP)型肽聚糖孵育,每间隔12 h测定相对吸光度(A540值)以判定肽聚糖的降解情况,验证PGRP‑S2的酰胺酶活性。结果RT‑qPCR结果显示,吸血后24 h,感染血组�
- 王之谦王敬文宋秀梅
- 关键词：斯氏按蚊共生菌真核表达
- 检测锥虫属原虫的特异性引物及检测方法和应用
- 本发明公开一组检测锥虫属原虫的特异性引物，其序列为：上游引物为：5’‑CCTGATGAAAGGTGCAATG(SEQ ID NO:1)或其互补序列；下游引物为：5’‑CGTTTTCGCCTTCTTGTGGA(SEQ ID...
- 胡薇殷明波刘骁洪清华王韵丞张瑞祥李健李鸿雁陈木新蔡玉春徐斌刘秀凤陈家旭王敬文
- 文献传递
- 一种适于杉科植物遗传多样性分析的RAPD体系的建立初探被引量：4
- 2002年
- 以墨西哥落羽杉、中国柳杉及日本柳杉为代表样品,摸索出一套适于杉科植物遗传分析的RAPD方法,通过大量的引物筛选和扩大所用引物数量,将能从理论上筛选出特定的引物对,用于杉科植物的真假杂种鉴定、亲本确认以及分类学的研究。
- 陈云鹏潘士华张建军竺唯杰纽慧娟曲志才王敬文沈大棱叶增基
- 关键词：杉科植物RAPD分析
- 利用RAPD检测技术推测杂交落羽杉群落间的亲缘关系被引量：10
- 2002年
- 采用随机引物扩增多态性DNA(RAPD)技术,对8个可能是杂交墨西哥落羽杉片林样本、其杂交母本———墨西哥落羽杉和杂交父本的同类———柳杉,共计12个样本进行了亲缘关系鉴定和遗传多样性分析.从31个引物筛选出17个随机引物,共扩增出164条带.其中,多态带有162条,占全部条带的98.8%.检测结果表明:在编号为8,11,12的3个柳杉样本中,11号与原杂交父本亲缘关系最近;1,4,9号是杂交墨杉群落的可能性最大;5号可能是未杂交的墨杉纯林;其他群落的样本是否为杂交墨杉尚不能通过本试验得出明确结论.
- 陈云鹏潘士华张建军竺唯杰纽慧娟曲志才王敬文沈大棱叶增基
- 关键词：群落亲缘关系RAPD聚类分析
- 蝴蝶兰不同花色品种遗传多样性的RAPD分析被引量：46
- 2003年
- 利用筛选到的 2 5个特异引物对蝴蝶兰不同花色品种作RAPD分析 ,确定了 12个品种间的遗传距离 ;并根据Neighbor joining遗传距离矩阵构建系统聚类文件 ,将该 12个品种分为两个家族 :第一家族中包含基色为白色的花色品种 ,花蕊颜色略有不同 ;第二家族为具有条纹的花色品种。品种间遗传距离最大为 0 .783 2 ,最小为 0 .10 3 4。
- 明凤董玉光娄玉霞王敬文梁斌叶鸣明沈大棱
- 关键词：花色品种RAPD分析
- 蝴蝶兰分子育种平台的建立以及花质相关基因的功能研究
- 明凤韩颖颖郭滨王敬文
- 该项目属于基础生物学领域的植物遗传工程方向。素有"兰花皇后"美誉的蝴蝶兰，在观赏方面和国际花卉市场上占有重要地位。蝴蝶兰栽培及无性繁殖研究占据主导地位，但对其花质遗传特征和基因表达调控在国内外领域中的研究却很薄弱，并且花...
- 关键词：
- 铝诱导普通野生稻(Oryza rufipogon L.)光合系统相关基因表达被引量：6
- 2002年
- 采用抑制差减杂交技术对正常与铝毒处理的普通野生稻植株进行表达基因差异性分析.通过对差异表达基因的PCR选择性研究、阳性表达基因的测序、Northern杂交的进一步分析,得出3个cDNAs在铝毒处理的叶片中高效表达,其中2个与光合系统代谢相关,1个与花的发育有关.研究结果为更好地理解植物在铝毒胁迫下叶片相关基因表达提供思路,同时也为在野生稻这个丰富基因库中筛选出耐铝毒的重要基因,以便改良亲源较近的水稻适应日益酸化的土壤具有一定的意义.
- 明凤梁斌娄玉霞王敬文叶鸣明沈大棱
- 关键词：普通野生稻抑制差减杂交铝毒
- 检测锥虫属原虫的特异性引物及检测方法和应用
- 本发明公开一组检测锥虫属原虫的特异性引物，其序列为：上游引物为：5’‑CCTGATGAAAGGTGCAATG(SEQ ID NO:1)或其互补序列；下游引物为：5’‑CGTTTTCGCCTTCTTGTGGA(SEQ ID...
- 胡薇殷明波刘骁洪清华王韵丞张瑞祥李健李鸿雁陈木新蔡玉春徐斌刘秀凤陈家旭王敬文
