罗彬
- 作品数：12 被引量：68H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院特产研究所更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鉴别诊断犬细小病毒疫苗毒和野毒株PCR-RFLP方法的建立
- 引言/目的:犬细小病毒病（Canine Parvovirus disease）是由犬细小病毒（Canine Parvovirus）引起的一种急性、高度致死性传染病,以出血性肠炎或非化脓性心肌炎为主要特征,具有感染率高、发...
- 易立程世鹏王建科罗彬杨莘
- 关键词：犬细小病毒病弱毒疫苗血凝试验
- 文献传递
- MEV、ADV和CAV三种病毒多重PCR检测方法的建立被引量：5
- 2009年
- 建立一种同时检测貂肠炎病毒(MEV)、貂阿留申病毒(ADV)和犬腺病毒(CAV)的多重PCR诊断方法。引用已有的CAV引物,并根据GenBank发表的MEV、ADV序列保守区域设计特异性引物进行PCR扩增,可同时得到扩增长度为795(MEV)、451(ADV)、1 019 bp(CAV)3条特异性片段,对猪细小病毒(PPV),犬瘟热病毒(CDV)进行PCR检测结果为阴性。各种模板、引物之间相互不构成干扰。敏感性试验证明,可以检测到模板中MEV101.5TCID50和CAV100.5TCID50的病毒含量,对ADV检测的敏感性更高。
- 罗彬易立王建科程世鹏
- 关键词：貂肠炎病毒犬腺病毒
- 犬细小病毒VP2蛋白的表达及间接ELISA方法的建立被引量：5
- 2010年
- 以犬细小病毒(Canine parvovirus virus,CPV)VP2基因的原核表达产物为抗原建立检测CPV抗体的间接ELISA方法。在分析CPV VP2基因稀有密码子(大肠杆菌系统)的基础上,克隆去除5′和3′端的稀有密码子的VP2基因,构建了VP2蛋白原核表达载体pET28a-VP2和pET32a-VP2,利用HIS标签对融合表达产物进行纯化。经SDS-PAGE和Western-blot检测证实该基因获得表达,并存在低相对分子质量产物,其中纯化后的pET28a-VP2具有良好的免疫学活性。以pET28a-VP2蛋白为基础,建立检测VP2抗体的i VP2-ELISA方法:抗原包被质量浓度为17.8 mg/L,血清最佳稀释度为1∶20,阳性判定标准初步定为:待测样品D值>0.367,且待测样品D值/阴性样品D值>2.0。采用i VP2-ELISA对20份背景清晰的犬血清样品进行检测,结果显示,i VP2-ELISA与HI试验的阴阳性符合率一致,但不呈现正比关系。本试验为犬场CPV抗体水平检测和进行CPV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。
- 易立程世鹏王建科柴秀丽罗彬张海玲吴威闫喜军
- 关键词：犬细小病毒原核表达VP2蛋白间接ELISA
- 武汉地区犬瘟热病毒H基因的遗传特征及限制性片段长度多态性分析
- 2010年
- 根据NCBI上登录的犬瘟热病毒序列,设计了1对检测引物,对武汉临床宠物犬的口、鼻、肛门棉拭子样品进行了检测。随机取其中的6份阳性病料,对其血凝素蛋白编码基因进行扩增并测序。序列分析显示,病毒分为野毒和疫苗毒两簇,野毒的分型和地理位置关系密切。预测蛋白序列分析显示,此次分离的毒株与疫苗毒潜在的N连接糖基化位点有很大差异,可能是病毒抗原性变化的原因之一。根据序列分析结果进行了限制性片段长度多态性分析,并初步建立了野毒和疫苗毒的鉴别诊断方法。
- 罗彬王建科易立杨莘程世鹏
- 关键词：犬瘟热病毒限制性片段长度多态性
- 水貂病毒性肠炎巢式PCR,PCR-RFLP联合诊断方法的建立被引量：5
- 2008年
- 根据水貂肠炎细小病毒的VP2基因序列设计4条特异性引物,建立了检测水貂肠炎细小病毒的巢式PCR方法。采用一次扩增的敏感性来检测5个TCID50/mL的细小病毒MEVB株,二次扩增的敏感性来检测0.05个TCID50/mL的细小病毒MEVB株。同时,利用该方法第一轮PCR产物酶切,能够区分犬细小病毒与水貂肠炎细小病毒,具有重要的实用价值和应用的前景。
- 易立闫喜军罗彬王建科赵传芳吴威程世鹏
- 关键词：水貂肠炎细小病毒巢式PCRPCR-RFLP
- 水貂肠炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2011年
- 以抗水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)单克隆抗体为捕获抗体、兔抗MEV多克隆抗体为检测抗体,建立了MEV双抗体夹心ELISA检测方法。该方法用于MEV抗原的检测。经过试验,单克隆抗体的最适稀释度为1∶20,兔抗MEV多克隆抗体的最适稀释度为1∶3 200。用该ELISA方法分别检测MEV、水貂阿留申病病毒、犬瘟热病毒样品。结果表明,ELISA方法具有良好的特异性。用该ELISA和PCR同时检测158份临床样品,其中ELISA检测40份为阳性,PCR检测44份为阳性,该ELISA的特异性和敏感性分别为95.6%和79.5%,这2种方法的符合率为91.1%。该方法的建立为MEV的检测及水貂病毒性肠炎的流行病学调查提供了工具。
- 王建科程世鹏易立杨莘罗彬许红丽闫喜军武华
- 关键词：水貂肠炎病毒酶联免疫吸附试验单克隆抗体
- 犬瘟热病毒野毒株与疫苗株联合RT-PCR鉴别方法的建立被引量：3
- 2009年
- 为了建立快速、有效的鉴别犬瘟热病毒(CDV)野毒株与疫苗株的诊断方法,根据CDV野毒株与疫苗株N基因的保守区域以及H基因的多变区域设计特异性引物,建立了区分CDV野毒株与疫苗株的联合RT-PCR方法。结果表明,针对N基因的RT-PCR方法能同时检测CDV野毒株与疫苗株;而针对H基因的RT-PCR方法只能检测CDV野毒株,不能检测CDV疫苗株。根据2次RT-PCR反应结果,能够很好地区分CDV野毒株与疫苗株。同时,经过病毒电镜观察和H基因扩增片段的克隆测序结果的比对,进一步确认了该方法的特异性。表明,该方法具有快速、特异、实用等优点,可作为CDV鉴别诊断的有效手段。
- 易立程世鹏闫喜军王建科罗彬赵建军张海玲吴威
- 关键词：犬瘟热病毒反转录聚合酶链式反应野毒株疫苗株
- 胶体金免疫层析技术在动物病毒性传染病诊断中的应用被引量：9
- 2011年
- 自胶体金标记技术问世以来,已在妊娠检测、传染病、毒品、食品安全和兽医等领域得到了广泛的应用。就兽医领域而言,已应用在动物寄生虫、细菌、病毒以及兽药残留检测等方面。论文总结了胶体金免疫层析技术的基本原理和常见的检测抗原、抗体的方法,对胶体金免疫层析技术在动物病毒抗原和抗体检测中的应用进行了详细的介绍,并对该技术在动物病毒性疾病上的应用前景进行了展望。
- 王建科易立罗彬杨莘程世鹏
- 关键词：胶体金免疫层析动物病毒抗原抗体
- 犬细小病毒VP2基因的遗传变异分析被引量：14
- 2009年
- 为了分析中国部分省市犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）流行毒株的分子生物学特征,了解其遗传演化规律,查明中国目前CPV流行毒株现状,本项研究通过对2006-2008年武汉、南京和北京的宠物犬疑似犬细小病毒粪便样品进行检测,并对犬细小病毒PCR阳性产物进行RFLP分析,未发现宠物犬感染猫细小病毒的现象。从PCR检测犬细小病毒阳性标本15份以及广泛使用的犬细小病毒疫苗2株中克隆犬细小病毒VP2基因并进行序列分析,结果显示：检测到的15株犬细小病毒均属于CPV-2a亚型;与GenBank中的其他CPV-2a亚型相比,其中14株犬细小病毒存在独特的Ile324变异,并且国内主要使用的两个犬细小病毒疫苗株均属于CPV-2型,但是与CPV-2型原型毒株CPV-b相比,VP2蛋白氨基酸序列已经发生改变。通过构建基于犬细小病毒VP2蛋白氨基酸序列的系统发生树,发现在我国主要城市的宠物犬中流行的犬细小病毒CPV-2a亚型毒株单独构成一簇,并且与2008年的韩国分离株K001关系紧密,而与早期其他地区的犬细小病毒CPV-2a亚型流行株距离较远。这提示犬细小病毒流行株的变异具有某种时间和空间相关性。本研究对犬细小病毒流行株的主要衣壳蛋白VP2的编码蛋白进行遗传变异分析，为更好地预防和控制犬细小病毒提供基础。
- 易立程世鹏闫喜军王建科罗彬
- 关键词：犬细小病毒VP2基因
- 水貂阿留申病毒结构蛋白与非结构蛋白在疾病诊断与疫苗研发中的应用被引量：8
- 2011年
- 水貂阿留申病是由水貂阿留申病毒引起的一种持续感染性疾病,危害毛皮动物养殖业的发展。水貂阿留申病毒的致病特点、免疫机制等与其他细小病毒不同,存在自身的复杂性。目前,众多研究者寻求新的疫苗来预防水貂阿留申病的发生,但没有取得理想的效果。疾病诊断及疫苗研发对防控水貂阿留申病具有积极的意义。水貂阿留申病毒结构蛋白在病毒感染、机体免疫过程中发挥关键作用,而非结构蛋白在病毒转录与复制过程中有着重要作用,疾病的诊断和疫苗的研发均在二者的基础上展开。应用水貂阿留申病毒结构蛋白与非结构蛋白建立新的水貂阿留申病毒诊断方法,研发新型基因工程疫苗,对控制水貂阿留申病的发生与传播,具有重要的意义。
- 杨莘易立王建科罗彬程世鹏
- 关键词：水貂阿留申病毒结构蛋白非结构蛋白疫苗研发
