翟田甜
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院生物资源基因工程重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗CD133纳米抗体的分离与鉴定被引量：2
- 2016年
- [目的]获得骆驼来源的与人CD133抗原特异性结合的纳米抗体。[方法]从3峰新疆双峰驼外周血中分离淋巴细胞,采用巢式PCR扩增获得cDNA并构建VHH天然噬菌体展示文库。包被CD133-606于ELISA板,对天然文库进行3轮亲和筛选,菌落PCR和基因测序确定能结合CD133的候选克隆。挑选重复序列VHH克隆构建到pET28a并转BL21用IPTG诱导表达。IMAC方法纯化重组VHH抗体蛋白,Western Blot和ELISA检测与CD133的抗原结合性。[结果]从109淋巴细胞中构建了库容为1.4×109cfu的噬菌体展示文库,Western Blot及ELISA结果显示重复4次核苷酸序列的VHH-13的纳米抗体能与CD133-606有较好的结合活性。[结论]通过对VHH天然展示文库的亲和筛选及鉴定,成功获得了能与人重组CD133胞外区特异结合的纳米抗体。
- 李玲霞翟田甜马晓玲冯亚宁李江伟
- 关键词：CD133ELISA
- 抗卵泡刺激素受体纳米抗体的制备及鉴定被引量：6
- 2013年
- 目的获得抗卵泡刺激素受体(FSHR)的纳米抗体。方法使用原核表达的重组蛋白His-FSHR234对新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库进行亲和筛选,将筛选获得的重链抗体的可变区(vhh)基因亚克隆至pET30a表达载体,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达VHH重组蛋白,镍离子亲和层析柱纯化获得纳米抗体。ELISA检测纳米抗体的抗原结合活性。结果 His-FSHR234筛选富集后,随机挑选40个克隆进行鉴定,其中28个为阳性克隆,挑选4个vhh基因进行克隆,PCR和酶切鉴定目的基因大小与预计相符。SDS-PAGE显示,VHH FSHR-06、VHH FSHR-25、VHH FSHR-30、VHH FSHR-50分别在相对分子质量(M r)31 000、26 000、25 000、26 000有目的条带。ELISA检测显示,4个纳米抗体对His-FSHR234重组蛋白均具有结合活性,其中VHH FSHR-06的抗原结合活性最高。结论从新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库中筛选获得了1个具有较高抗原结合活性的抗FSHR的纳米抗体。
- 夏雪琴木亚沙尔·买买提拉洪翟田甜李江伟
- 关键词：卵泡刺激素受体双峰驼
- 抗CD133纳米抗体的制备 及细胞毒性肽的活性分析
- 目前倾向于认为肿瘤干细胞是恶性肿瘤难治和对化疗耐药的根源之一。因此,对肿瘤干细胞表面标志分子的鉴定和功能研究,以及开发基于这些分子的靶向药物成为提高肿瘤治疗效果的手段之一。CD133是一个五次跨膜糖蛋白,在多种恶性肿瘤细...
- 翟田甜
- 关键词：噬菌体展示技术CD133抗肿瘤作用
- 抗CD133胞外区骆驼多克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的:制备高效价、高特异性的抗CD133胞外区新疆双峰驼来源的多克隆抗体,为制备高亲和力的抗CD133纳米抗体做准备。方法:将CD133胞外区基因序列构建到原核表达载体pET28a中,诱导表达及纯化CD133蛋白,免疫新疆双峰驼及新西兰兔。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)和Western blot检测多克隆抗体的效价及与CD133特异性结合活性。结果:ELISA测定抗-CD133骆驼源抗体的效价可达到百万以上,通过Western blot检测多克隆抗体可特异性结合CD133蛋白。结论:重组人CD133蛋白可以在骆驼体内激发高滴度抗体反应,为今后构建骆驼免疫单域抗体噬菌体展示文库奠定基础。
- 翟田甜马晓玲木亚沙尔.买买提拉洪李玲霞李江伟
- 关键词：CD133多克隆抗体肿瘤干细胞
