莽克强
- 作品数：75 被引量：1,355H指数：23
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中国科学院院长基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆及其mRNA在水稻中的组成型表达被引量：4
- 1996年
- 从40年代发现豆科植物中存在蛋白酶蛋白抑制剂以来,在动物、植物和微生物体内已发现普遍存在着多种类型的蛋白酶抑制剂(PI)。人们往往是为了研究某种蛋白酶的作用机制或出于某种应用目的去分离和研究PI的,对PI的真正生理功能尚不十分清楚。一般认为除防止体内不必要的蛋白降解作用、调节蛋白代谢及调节各种蛋白酶的生理活性外,很多植物的PI还具有抑制某些病源微生物及某些昆虫体内蛋白酶的作用,从而对植物有防卫功能。Hilder等和Johnson等已分别将属于丝氨酸蛋白酶抑制剂的豇豆蛋白酶抑制剂及马铃薯PⅠⅠ和PⅠⅡ基因转入烟草,结果转基因烟草对烟芽夜蛾(He-
- 鄂超苏田颖川王群莽克强
- 关键词：水稻半胱氨酸蛋白酶基因克隆MRNA
- 番茄多聚半乳糖醛酸酶cDNA的克隆及其对番茄中PG表达的反义抑制被引量：39
- 1994年
- 通过PCR扩增获得了包含多聚半乳糖醛酸酶(PG)全部阅读框架的1.5kb cDNA,经限制酶酶谱和部分序列分析鉴定无误后,将其以反方向插入含两个增强子的35S启动子和Nos3＇端之间,构建成表达PG反义RNA的双元载体,经农杆菌途径转化番茄品种“丽春”,获得了60株抗卡那霉素再生植株,经PCR检测,证明有2/3的再生植株有外源PG基因导入,成熟果实的PG粗提液的SDS-PAGE分析表明:若干株系中PG蛋白量较对照有不同程度的下降。PG活性亦同步下降,其中一个株系3~#,PG酶活下降了93％。这些结果表明外源PG基因的反方向导入有效地抑制了内源PG基因的表达。
- 鞠戎田颖川沈全光刘存德莽克强
- 关键词：转基因番茄
- 大豆花叶病毒外壳蛋白基因的克隆和其在大肠杆菌中的表达被引量：13
- 1993年
- 通过多聚酶连锁反应(PCR),我们合成了包括病毒外壳蛋白基因在内的病毒基因组3′端区域,并完成了其全部序列分析,比较SMV(北京分离物)和SMV-N株的序列发现:外壳蛋白基因的核苷酸序列同源性达93.4%,其氨基酸序列同源性高达98.5%,就基因组3′端非编码序列而言,其同源性达88.8%。Western blot分析结果表明所克隆的cDNA片段在大肠杆菌JM107中能表达正常的病毒外壳蛋白。
- 刘俊君彭学贤李荔莽克强
- 关键词：植物病毒大豆花叶病毒外壳蛋白基因基因表达
- 芜菁花叶病毒外壳蛋白基因的克隆及其植物表达载体的构建被引量：14
- 1992年
- 从感病的萝卜叶片中得到芜菁花叶病毒(TuMV)的分离物,以oligo(dT)为引物,合成了其基因组RNA的互补DNA,并克隆到载体λ-ZAPⅡ中。通过单链cDNA探针杂交和DNA末端序列分析找出含有poly-A尾巴的阳性克隆。我们对一个含有1429个碱基插入片断的克隆进行了序列分析,根据芜菁花叶病毒外壳蛋白分子量的大小和马铃薯Y病毒组蛋白质加工位点氨基酸序列的保守性,确定了外壳蛋白基因的5′末端。利用PCR方法对其5′末端进行改造,加进起始密码ATG和两个限制性内切酶位点。通过基因重组操作,将该基因插入到双元载体pBI121的衍生物pBIN437中,得到芜菁花叶病毒外壳蛋白基因的植物表达载体。
- 孔令洁方荣祥陈正华莽克强
- 关键词：芜菁花叶病毒外壳蛋白基因马铃薯
- 转雪花莲外源凝集素基因烟草对桃蚜的抑制作用被引量：68
- 1998年
- 将编码雪花莲外源凝集素成熟蛋白的ｃＤＮＡＧＮＡ１２和其前体蛋白ｃＤＮＡＧＮＡ３４插入到二元载体ｐＢｉｎ４３８的双倍增强子ＣａＭＶ３５Ｓ启动子或二元载体ｐＢｃｏｐ１的ＣｏＹＭＶ启动子下游，分别构建成植物表达载体ｐＢＧｎａ１２、ｐＢＧｎａ３４、ｐＢＣＧｎａ１２和ｐＢＣＧｎａ３４。土壤农杆菌介导的转化再生植株的ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，ＧＮＡ基因已整合到烟草ＤＮＡ中。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现ｐＢＧｎａ３４和ｐＢＣＧｎａ３４的转基因植株能有效地表达外源ＧＮＡ，表达量约占可溶性总蛋白的００８％～０１５％，并且前体蛋白基因编码的蛋白在植物体内进行了正确的加工；而ｐＢＧｎａ１２和ｐＢＣＧｎａ１２的植株几乎检测不到外源ＧＮＡ的表达。有效表达外源ＧＮＡ的ｐＢＧｎａ３４和ｐＢＣＧｎａ３４的转基因植株具有较强的抗蚜活性，平均能够抑制桃蚜（Ｍｙｚｕｓｐｅｒｓｉｃａｅ）４５％～６０％蚜口密度，有的高达９０％以上。在转基因烟草中含双倍增强子的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子与韧皮部特异表达的ＣｏＹＭＶ启动子介导ＧＮＡ基因表达具有相似的强度，但它们的抗蚜活性存在差异。
- 周岩田颖川吴标莽克强
- 关键词：凝集素转基因烟草蚜虫烟草抗虫性
- 抓住机遇迎头赶上被引量：8
- 1999年
- 四年前，中国生物工程学会曾组织过一次生物工程学术和产业开发研讨会，纯属短期行为，目的仅在于尽所能在学术与产业之间搭过桥，加速产业化进程。而这次有关人类后基因组与中国基因工程产业化的研讨则带有长久战略性目标的探讨。关于后基因组的问题去年９月在张家界学会...
- 莽克强
- 关键词：后基因组学生物工程新药开发
- 水稻黄矮病毒的纯化和病毒蛋白质及RNA组分的分析被引量：6
- 1992年
- 从人工接种水稻黄矮病毒(Rice yellow stunt virus,RYSV)的水稻茎杆中提取到部分纯化的RYSV制品。分析了RYSV的蛋白质组分,表明它的结构蛋白含有L(170k)、G(84k)、N(60k)、M1(31k)、M2(29.5k)和一个分子量为42k的蛋白,并测定了G蛋白氨基末端的部分氨基酸序列。经测定,RYSV RNA的分子量约为12kb。
- 方荣祥庞震许丙寅莽克强高东明李爱民秦文胜陈声祥
- 关键词：病毒RNA
- 苋菜凝集素基因的克隆及在转基因烟草中抗蚜性研究被引量：62
- 2001年
- 通过PCR从苋属植物千穗谷 (Amaranthushypochondriacus)的总DNA中扩增出苋菜凝集素 (AHA)的核基因片段。序列分析结果表明该基因为 2 45 3bp ,含有一 15 38bp的内含子和两个分别为 2 12bp和 70 3bp的外显子。采取反向PCR的方法获得仅含该基因的编码区克隆。以此为基础与二元表达载体 pBin438构建含内含子与不含内含子AHA基因的植物表达载体 pBAHAg和pBAHAc并通过土壤农杆菌介导转化了烟草。转化再生植株的PCR和Southernblot分析表明 ,AHA基因已整合到烟草的染色体中 ,有单拷贝和多拷贝的整合。用与AHA蛋白高度同源的ACA蛋白的抗血清进行了免疫斑点 (Immunodotblot)检测 ,结果初步表明转基因烟草有AHA蛋白的表达。虫试结果表明转pBAHAg和 pBAHAc烟草对蚜虫的平均抑制率分别达 5 7 2 %和 48 8% ,有的高达 90 %以上。
- 周永刚田颖川莽克强
- 关键词：转基因烟草抗蚜性凝集素基因
- 大豆花叶病毒NIb基因的cDNA克隆和序列分析被引量：12
- 1994年
- 以大豆花叶病毒北京分离株(SMV-BJ)RNA为模板,随机六聚核苷酸为引物,合成cDNA。根据SMV-BJ外壳蛋白基因序列和国外已报道的SMV,WMV-Ⅱ的有关序列,设计寡聚核苷酸引物。通过聚合酶连锁反应,得到了SMV NIb基因的全长cDNA克隆,并测定了其全序列。所测SMV NIb基因序列与WMV-Ⅱ(USA)株系比较,其核苷酸同源性达80.3％,由核苷酸序列所推导出的氨基酸序列同源性达到91.3％。综合SMV-BJ基因组3′端非编码区、外壳蛋白基因和NIb基因的资料,我们认为:WMV-Ⅱ可能是SMV的一个西瓜株系。实验中发现一些含NIb基因的重组克隆在3′端区域有大的序列变异,并讨论了这种变异的原因。在完成基因拚接、改造的基础上,构建了SMV-BJ NIb基因的高等植物表达载体。
- 刘俊君彭学贤莽克强
- 关键词：大豆花叶病毒CDNA无性系
- 利用PCR技术克隆家蚕丝素基因启动子片段被引量：1
- 1992年
- 家蚕丝素(fibroin)是由一条约370kD的重链和一条约25kD的轻链,通过二硫键连接而成。为其编码的两个基因在后丝腺内等量、同步表达。它们5′端上游的转录调控区同源性很强,说明重链与轻链受同—机制调控。
- 王为民方荣祥孟智启莽克强
- 关键词：基因启动子片段PCR
