蒋明
- 作品数：11 被引量：6H指数：2
- 供职机构：同济大学苏州研究院生物医药研究中心更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金苏州市科技发展计划苏州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- Tat-MANF融合蛋白的制备及生物活性研究被引量：1
- 2014年
- 目的:构建用于表达具有Tat序列的新型神经营养因子MANF(mesencephalic astrocytederived neurotrophic factor)融合蛋白(Tat-MANF)的重组质粒;利用原核细胞表达系统表达该重组蛋白,并检测其生物学活性。方法:以MANF cDNA为模板,利用PCR技术在上下游分别添加TAT序列和His标签及合适的限制性酶切位点,构建TAT-MANF融合基因。插入表达载体Pet22b+后,转化大肠杆菌BL21进行表达和纯化,用SDS-PAGE及Western印迹鉴定表达的重组蛋白。为了验证Tat-MANF的生物学活性,用30μmol/L浓度的6-羟多巴胺(6-OHDA)对神经母胶质瘤细胞(SH-SY5Y)进行毒性诱导,同时加入2μg/ml的TAT-MANF及对照MANF蛋白,24h后用流式细胞仪检测细胞的凋亡率。用脑微血管内皮细胞(B-endo3)体外模拟血脑屏障,与FITC标记的TatMANF共孵育4h,荧光显微镜下观察。结果:成功构建TAT-MANF融合基因,表达产物与目的蛋白大小相符,能与MANF抗体发生结合反应。重组蛋白可减少由6-OHDA导致的SH-SY5Y细胞凋亡,Tat-MANF-FITC与B-end3细胞共孵育4h后,可见细胞内明显荧光。结论:获得的重组蛋白Tat-MANF具有神经细胞保护作用及跨膜功能,为进一步开展帕金森症的体内治疗研究奠定了物质基础。
- 李晨顾华郭佳孙慧黄经纬蒋明靳令经房健民
- 关键词：帕金森症跨膜蛋白融合蛋白
- 壳聚糖类天然产物库的构建方法及其筛选方法
- 本发明涉及一种壳聚糖“类天然产物库”的构建方法及其筛选方法。本发明采用壳聚糖或者壳聚糖衍生物进行多样导向合成，利用酰化反应和亚胺化反应，对壳聚糖链中的-OH和-NH<Sub>2</Sub>进行差异化修饰，并通过模块化的操...
- 蒋明顾华
- 文献传递
- 一体化气升环流悬浮填料分散污水生物处理装置
- 本发明属于环境工程污水处理技术领域，具体涉及一种一体化气升环流悬浮填料分散污水生物处理装置。该装置将缺氧生物调节池、悬浮填料生物反应池、二沉池、贮泥池等四个功能单元集成一体。圆形竖流式二沉池置于反应器中部，其他三个功能单...
- 张亚雷周雪飞苏鸿洋陈潇蒋明
- 一种污水处理厂A<Sup>2</Sup>/O工艺的优化设计方法
- 本发明属于环境保护技术领域，具体涉及一种污水处理厂A<Sup>2</Sup>/O工艺的优化设计方法。根据当前污水厂A<Sup>2</Sup>/O工艺所采用的传统设计方法存在着基建费用和运行费用偏高等缺点，本发明以活性污泥...
- 周雪飞张亚雷胡茂冬蒋明苏鸿洋
- 人C-Met胞外区慢病毒穿梭载体构建及在293T细胞中的表达被引量：3
- 2015年
- 本研究构建含人肝细胞生长因子受体(C-Met)胞外区基因的慢病毒表达载体,并将其转染293T细胞,真核表达并纯化获得人C-Met胞外段蛋白。采用RT-PCR扩增人C-Met胞外区(ED)基因,构建慢病毒表达载体p RRL-CMV-ED,磷酸钙法转染293T细胞,RT-PCR及Western blot法检测ED基因在293T细胞中mRNA的转录和蛋白表达。PCR扩增及测序结果表明成功构建了p RRL-CMV-ED慢病毒表达载体,PCR扩增的目的基因大小为2 700bp左右;转染p RRL-CMV-ED的293T细胞上清经镍柱亲和纯化,SDS-PAGE分析纯化产物在105kD处有明显蛋白条带;Western及ELISA结果显示,纯化蛋白为C-Met胞外区蛋白且能与肝细胞生长因子(HGF)特异性结合。本研究结果可能为制备C-Met单克隆抗体以及筛选阻断HGF/C-Met信号通路的中和抗体奠定基础。
- 郭佳尹衍新蒋明于丽华蒋韵李贵情房健民
- 关键词：慢病毒表达载体
- 非小细胞肺癌外泌体的研究进展被引量：1
- 2017年
- 外泌体是具有脂质双层膜结构的纳米囊泡,含有大量生物活性物质。非小细胞肺癌(NSCLC)的外泌体,通过与肿瘤微环境中的其他细胞相互作用,具有调节肿瘤病理进程、血管生成、转移和免疫逃逸等生物学功能。NSCLC外泌体中的特异性蛋白质和微RNA(miRNA)存在差异性表达,可作为诊断和预后的生物标志物,具有较大的潜在临床应用价值。目前,NSCLC外泌体中对肺癌发生、发展起关键作用的成分仍待明确,外泌体的应用标准化等问题是临床应用亟待解决的问题。
- 于丽华章程刘敏亚蒋明房健民
- 关键词：非小细胞肺癌外泌体生物标志物微RNAS
- 一体化气升环流悬浮填料分散污水生物处理装置
- 本发明属于环境工程污水处理技术领域，具体涉及一种一体化气升环流悬浮填料分散污水生物处理装置。该装置将缺氧生物调节池、悬浮填料生物反应池、二沉池、贮泥池等四个功能单元集成一体。圆形竖流式二沉池置于反应器中部，其他三个功能单...
- 张亚雷周雪飞苏鸿洋陈潇蒋明
- 文献传递
- 抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测
- 2016年
- 目的用抗人间质上皮转化因子(c-Met)阻断型嵌合抗体ch3E1D7表达质粒构建单价抗体慢病毒穿梭质粒,利用慢病毒表达系统实现其在HEK293T细胞中快速表达,并对纯化后抗体的亲和力及中和活性进行检测。方法设计抗c-Met的单价抗体,命名为mono3E1D7,利用基因工程技术构建单价抗体三条链的慢病毒表达载体,磷酸钙法转染HEK293T细胞,表达的单价抗体经蛋白A琼脂糖4B亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测抗体完整性,ELISA检测单价抗体在体外阻断c-Met与其配体HGF结合的生物学活性。结果感染单价抗体慢病毒的HEK293T细胞上清纯化后,SDS-PAGE分析可见55 ku的重链、25 ku的轻链以及30 ku的杵状结构链(Knob)三条带。且纯化后的单价抗体能与c-Met抗原结合,同时还具有阻断c-Met与HGF结合的中和活性。结论成功获得抗人c-Met阻断型单价抗体。
- 郭佳蒋明靳令经尹衍新孙慧于丽华毛玉婷房健民
- 关键词：C-MET嵌合抗体慢病毒表达
- 抗人肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒载体的构建和应用被引量：3
- 2014年
- 目的构建可表达抗人肝细胞生长因子受体(HGFR)单链抗体(scFv)的慢病毒表达载体,将其感染HEK293细胞,检测该抗体的表达及与抗原结合活性。方法采用反转录PCR(RT-PCR)从分泌小鼠抗人HGFR抗体的杂交瘤细胞株(8E8)中扩增VH和VL基因,用重叠延伸PCR法将VH和VL进行拼接,得到含有信号肽SP-VH-linker-VL的单链抗体基因(HGFR-scFv),将其插入克隆载体pCR-Blunt中。用内切酶将HGFR-scFv基因从pCR-Blunt上切下,插入慢病毒载体pRRL-CMV中,经相应酶切和测序鉴定,正确构建慢病毒表达载体pRRL HGFR-scFv。磷酸钙法转染HEK293T细胞,48 h后通过荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,将获得病毒颗粒进一步感染HEK293细胞,RT-PCR和ELISA检测scFv的表达情况。结果抗人HGFRscFv的慢病毒表达载体构建成功,病毒颗粒感染HEK293细胞后,得到了可以稳定表达抗人HGFR-scFv的细胞系;ELISA结果表明,scFv能与人HGFR特异性结合。结论成功克隆了小鼠抗人HGFR抗体的scFv基因,并构建其慢病毒表达系统。
- 陈永华郭佳尹衍新蒋明朱红胜张国栋李冰宇
- 关键词：肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒表达载体
- 一种过滤体为片状滤材的过滤装置
- 本发明属于水处理技术领域，具体涉及一种过滤体为片状滤材的过滤装置。由片状滤料组件、吸泥管、吸泥泵、小车、小车导轨、隔板、出水堰和壳体组成，壳体下方分别设有进水口、出水口和放空口，片状滤料组件竖立安装于壳体内，片状过滤组件...
- 张亚雷赵建夫陈翼孙周雪飞蒋明黄永宽匡志平
- 文献传递
