赖延东
- 作品数：23 被引量：38H指数：4
- 供职机构：广州医学院公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- RNA干扰诱导DNA修复基因hMGMT表达沉寂的研究被引量：2
- 2006年
- 背景与目的构建能特异诱导人DNA修复基因hMGMT表达沉寂的RNA干扰载体。材料与方法通过两步法聚合酶链反应(Polymerasing chain reaction,PCR)扩增hMGMT特异RNA干扰表达盒,连入质粒载体构建RNA干扰质粒pU6-MGMTi,与pGEFP-C1共转染人支气管上皮16HBE(Human bronchial epithelial)细胞,G418筛选后,采用RT-PCR和Western Blot分别检测mRNA和蛋白水平的表达抑制情况。结果成功构建hMGMT特异RNA干扰质粒pU6-MGMTi,转染16HBE细胞的mRNA和蛋白表达受到显著的抑制。结论应用RNA干扰表达盒以及共转染技术,构建MGMT基因表达沉寂的细胞株,为进一步阐明MGMT基因的功能创造条件。
- 赖延东吕嘉春李秀英宾晓农吴建军
- 关键词：RNA干扰
- 应用定量竞争RT-PCR筛选芳香烃受体基因RNA干扰片段被引量：1
- 2006年
- 目的筛选对人气管上皮细胞株16HBE芳香烃受体基因mRNA表达有效抑制的特异RNAi片段。方法自行制备内参照为竞争模板,应用定量竞争RTPCR方法,分别检测转染有4个不同芳香烃受体基因RNA干扰位点的16HBE细胞芳香烃受体mRNA的表达,评价不同片段的RNA干扰效果。结果转染4种芳香烃受体基因RNA干扰片段的16HBE细胞的每40ng总RNA芳香烃受体基因mRNA平均表达量分别为5.65fg、14.78fg、3.14fg和0.68fg,mRNA表达平均抑制率分别为61.6%、-0.5%、78.6%和95.4%。结论应用定量竞争RTPCR准确地定量基因的mRNA表达水平,筛查出芳香烃受体基因RNA干扰有效序列,为进一步研究芳香烃受体基因的功能创造了条件。
- 赖延东李秀英宾晓农吕嘉春
- 关键词：芳香烃受体RNA干扰
- 恙虫病东方体Karp株Sta56基因的克隆及序列比较的研究被引量：1
- 2003年
- 目的扩增恙虫病东方体Karp株主要表膜抗原Sta56的开放读码框(ORF)全长,并进行序列比较研究。方法小鼠接种传代和体外细胞扩增分离恙虫病东方体Karp株,用PCR方法扩增恙虫病东方体Karp株Sta56基因,并采用TA克隆技术构建测序载体,对测序结果进行同源性分析比较。结果 扩增出Sta56的ORF全长,并TA克隆到测序载体pMD18-T vector,测序结果与Karp标准株的同源性为99.4％。结论 Sta56全长ORF克隆扩增成功,为进一步构建表达载体,进行Sta56蛋白表达研究提供基础。
- 赖延东郑小英黄炯烈詹希美
- 关键词：恙虫病东方体克隆
- 预防医学专业毒理学实验教学过程中的实践改革与探索被引量：4
- 2012年
- 目的通过一系列毒理学实验教学实践与改革措施,以提高毒理学的教学质量与教学效果。方法从毒理学实验教学过程中的常见问题及薄弱环节入手,采用预防医学专业本科生与毒理学实验教师互动的综合实验教学模式,并对毒理学实验教学实践改革的效果进行评价与改进。结果学生学习毒理学的兴趣得以提高,培养了学生的科学创新思维,提高了学生的实验动手能力、观察与独立思考能力、搜集、处理实验数据及撰写实验报告的能力。结论综合式毒理学实验教学模式得到了学生的肯定,教学质量也得到了相应的提高,获得了一定的教学效果。
- 魏莲陈永忠王敏赖延东杨巧媛林丽白王立辉雷毅雄
- 关键词：毒理学实验教学
- 人PFP、GrB共表达诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨人穿孔素(PFP)、颗粒酶B(GrB)共表达是否可以诱导人的喉癌细胞系Hep-2的凋亡及其作用的机理。方法利用脂质体2000将PFP、GrB共表达载体pVAX1-PIG(即pVAX1-PFP-IRES-GrB)转染人喉癌Hep-2细胞,采用荧光染料Hoechst33342法、流式细胞仪(FCM)检测、透射电镜观察Hep-2细胞的凋亡情况。以激光共聚焦显微镜检测重组载体转染后的Hep-2细胞内[Ca2+]i浓度的变化,并探讨其作用机理。结果pVAX1-PIG转染组的Hep-2细胞大量凋亡且其凋亡率显著高于对照组(P<0.05),透射电镜研究显示单个Hep-2细胞内亦出现凋亡的特征。Hep-2细胞内[Ca2+]i的浓度发生了变化,且由FI值增大可知细胞胞浆内[Ca2+]i的浓度升高。结论PFP、GrB共表达能够诱导人Hep-2细胞的凋亡,且凋亡的发生与细胞胞浆内[Ca2+]i的浓度升高有关。
- 李秀英夏良平赖延东
- 关键词：凋亡透射电镜流式细胞仪分析
- 互联网在预防医学教育中的应用
- 2005年
- 互联网的迅猛发展和教育产业的信息化建设的要求,促使广大教育工作者研究互联网资源与教育教学的相互结合。本文从教学准备与实践的具体情况出发,结合《预防医学》课程教育的实际,介绍一些具体的观点与做法。
- 赖延东吕嘉春雷毅雄陈家堃
- 关键词：互联网教学准备
- 化学致癌物诱导人胚肾上皮细胞转化模型的构建被引量：2
- 2010年
- 目的探讨DNA修复缺陷和癌基因高表达人胚肾上皮细胞转化模型在化学致癌物筛查中的应用价值。方法利用siRNA技术构建DNA损伤修复基因缺陷人胚肾上皮细胞(human embryonic kidney epithelial cell,HEK),采用微核实验检测DNA修复基因缺陷和H-rasV12癌基因高表达对DNA损伤修复功能的影响,并测定已知致癌物[硫酸镍(NiSO4)、N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)]和促癌剂佛波酯(TPA)诱导上述细胞的转化活性,比较两种类型的HEK细胞模型筛查化学致癌物的应用价值。结果应用慢病毒介导的siRNA干扰技术成功构建了HEK-shERCC1、HEK-shERCC2、HEK-shATM和HEK-shMLH1等DNA损伤修复基因缺陷细胞株。与对照细胞HEK-shGFP相比,各DNA修复缺陷HEK细胞的生长速度、细胞形态和琼脂糖克隆的克隆形成率均没有差异,但HEK-sh ERCC2和HEK-shATM细胞对MMC(mitomycin C,MMC)所致遗传损伤的修复能力显著降低,1.0μg/ml MMC处理后,HEK-shERCC2和HEK-shATM细胞的微核率比对照细胞HEK-shGFP分别增加了34‰和30‰(P<0.05)。2μmol/L MNNG、400μmol/L NiSO4和800ng/ml TPA诱导HEKR细胞转化的时间分别是8周、8周和11周,但在染毒后20周均未能诱导各DNA损伤修复缺陷HEK细胞发生转化。结论癌基因高表达转化模型用于化学物质致癌活性的筛查,其灵敏性高于DNA修复基因缺陷细胞转化模型。
- 唐石伏王庆庞雅琴赖延东肖勇梅张波李道传陈丽萍杨萍陈雯
- 关键词：DNA损伤修复基因硫酸镍佛波酯细胞转化
- 带免疫佐剂CEA基因疫苗的构建及其稳定同步表达的研究被引量：6
- 2004年
- 背景与目的:基因疫苗是目前肿瘤免疫基因治疗研究的热点。目前癌胚抗原阳性肿瘤的治疗效果不佳,本研究拟利用质粒pVAX1构建带有免疫佐剂白细胞介素2同步表达的癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)基因疫苗,探讨一种新的肿瘤生物治疗方法。方法:利用RT-PCR从患者肿瘤组织中钓取CEA目的基因cDNA;运用分子克隆技术,通过内部核糖体进入位点(IRES),将CEAcDNA和hIL-2cDNA连接于质粒pVAX1中,采用化学发光免疫法和ELISA双抗体夹心法分别检测CEA抗原和hIL-2因子的表达;同时用蛋白质分析软件分析和预测目的抗原的特性。结果:测序结果证实本实验所构建的重组质粒插入DNA序列无错配,质粒上所接入的CEAcDNA与GenBank公布的M29540和M17303的序列99.8%同源,经蛋白质分析软件预测,其抗原性、跨膜结构片段、信号肽位点和二、三级结构特征与同源癌胚抗原基本一致。hIL-2cDNA与母本序列100%同源。检测结果说明该重组质粒在体外CHO细胞株中可同步表达CEA和hIL-2分子。结论:从肿瘤组织中成功地获取了CEAcDNA,所构建的pVCEA2重组质粒能在体外细胞中同步表达CEA和IL-2蛋白分子,这为进一步体内实验研究基因治疗CEA阳性肿瘤提供了新的可能途径。
- 黄爱强赖延东李秀英顾锦法陶莎蔡卫斌谢金卫罗超权
- 关键词：免疫佐剂疫苗基因表达
- 快速筛选芳香烃受体基因特异RNA干扰序列的初步研究被引量：1
- 2005年
- 目的筛选能诱导人芳香烃受体(AhR)基因表达沉默的特异RNA干扰片段。方法根据RNA干扰设计的原则,选择4个片段,用聚合酶链反应(PCR)方法,以含有人U6启动子的质粒为模板,分别扩增正义和反义小干扰RNA(siRNA)表达盒,纯化后直接转染人支气管上皮细胞(16HBE),抽提细胞总RNA,定量竞争逆转录PCR(RT-PCR)检测目的基因的mRNA表达差异,确定RNA干扰的效率。结果含AhR的干扰序列a493、a671、a1337和a1885的siRNA表达盒对AhR的mRNA表达抑制率分别为61.6%、-0.5%、78.6%和95.4%。结论运用PCR扩增siRNA表达盒从多个候选序列中快速筛选出芳香烃受体有效的干扰序列,为进一步的基因功能研究创造了条件。
- 赖延东李秀英宾晓农吕嘉春
- 关键词：芳香烃受体PCR
- PFP、GrB的共表达杀伤人喉癌Hep-2细胞的体外研究被引量：4
- 2008年
- 为探讨穿孔素(PFP)、颗粒酶B(GrB)共表达对人喉癌(Hep-2)细胞生长的抑制及其诱导该细胞的凋亡作用,采用RT-PCR的方法从人的喉癌组织浸润淋巴细胞中扩增全长PFP、GrB的cDNA片段,构建共表达重组体pVAX1-PIG,并将其转染入人的Hep-2细胞株中。收集转染后的Hep-2细胞,采用软琼脂集落形成实验、MTT法、原位末端标记法(TUNEL)、流式细胞仪(FCM)检测分析各组人Hep-2细胞的生长抑制及其凋亡情况。结果显示pVAX1-PIG转染组的集落形成数目比空白对照组与pVAX1转染组明显减少(P<0.05),MTT检测结果显示对照组细胞生长速度比pVAX1-PIG转染组要快。TUNEL染色、FCM法检测均显示pVAX1-PIG转染组的Hep-2细胞大量凋亡且其凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。因此,PFP、GrB的共表达能够抑制人Hep-2细胞的生长并且可以诱导该细胞的凋亡。
- 李秀英夏良平赖延东
- 关键词：穿孔素颗粒酶B
