闫洪涛
- 作品数：8 被引量：17H指数：3
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- 灌注式培养复方壳多糖组织工程皮肤的营养条件
- 2015年
- 目的探索灌注培养条件下不同营养浓度对复方壳多糖组织工程皮肤形态结构及细胞凋亡的影响,为进一步优化灌注营养条件提供依据。方法常规构建组织工程皮肤后,将复方壳多糖组织工程皮肤分别置于浓度为40%和80%的培养基中进行灌注式培养,分别于第5天及第10天取材进行HE染色观察细胞形态,利用TUNEL染色检测细胞凋亡情况。结果复方壳多糖组织工程皮肤呈典型双层结构,表真皮界限清晰,表皮细胞各层次界限不清楚,且均可见明显的角化过度;真皮区成纤维细胞成梭形,排列有序。40%的培养基培养第5天时真皮和表皮中凋亡细胞数显著高于同时间80%培养基的凋亡细胞数(P<0.05)。80%的培养基培养第10天表皮中凋亡细胞数显著高于培养第5天的凋亡细胞数(P<0.05)。结论灌注式培养可用于组织工程皮肤的培养,80%培养基浓度较40%培养基浓度培养效果更佳。
- 王端温旭红邱伟明杨桂红闫洪涛唐辉伍津津
- 关键词：营养浓度凋亡
- 准静态平面均匀流场条件下游离皮片体外培养效果评价
- 2019年
- 目的观察并评价准静态平面均匀流场不同灌注频次对游离人皮肤标本的培养效果。方法将4 mm游离包皮皮片置于准静态平面均匀流场中,按随机数字表法分为2组:实验组采用高频次灌注,对照组采用低频次灌注;培养12 d后进行PAS染色、VG染色观察基底膜、细胞形态及真皮胶原纤维的变化情况;采用HE染色,TUNEL法观察2组皮片中细胞数目及细胞凋亡的变化情况;利用溶解氧测量仪模拟测量培养基中溶解氧的含量。结果肉眼观察见对照组皮片呈坏死特征性变化;PAS、VG染色结果显示对照组表真皮严重分离,基底膜结构消失,胶原纤维堆积;实验组染色细胞数为(249.35±13.00),显著高于对照组[(37.50±9.18),P<0.001];实验组细胞凋亡率为(9.91±3.89)%,显著低于对照组[(59.73±8.04)%,P<0.001];高频次灌注溶解氧水平高于低频次灌注。结论准静态平面均匀流场条件下,高频次灌注对人皮肤游离标本的体外培养作用更佳。
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- 关键词：体外培养组织形态学
- 大鼠肝部分切除术后mTOR信号通路对肝再生的作用被引量：5
- 2007年
- 目的:探讨mTOR信号通路对大鼠肝部分切除术后肝细胞蛋白质合成功能及肝细胞大小的影响。方法:采用Sprague-Dawley雄性大鼠70％肝切除模型和肝细胞分离与培养方法,在术后不同的时相点分离残肝的肝细胞,进行培养。实验分组:分离的残肝肝细胞分两组:对照组(Control组、C组)、雷帕霉素组(Rapamycin组、R组)。采用Western blot方法检测磷酸化mTOR蛋白在不同时相点的变化;采用3H-亮氨酸(3H-Leucine)掺入法测定肝细胞蛋白质合成;扫描电镜(AMRAY 1000B,US)获取肝细胞图像,病理图像分析系统(北航CM2000B)测定细胞面积。结果:1)C组中,磷酸化mTOR蛋白的含量由0h开始升高,6h达到高峰,以后即降低,而R组明显较C组含量降低;2)在术后的各时相点,C组的肝细胞的蛋白质合成率较R组显著升高(P<0．05),而且随时间点的延长,蛋白质合成率呈上升趋势;3)在2h和6h时相点C组肝细胞面积较R组显著增大(P<0．05)。但是,在C组肝细胞24h时相点面积较2h和6h减小(P<0．05)。结论:体外实验证实,肝部分切除术后mTOR信号通路即活化,促进肝细胞的蛋白质合成和细胞生长。因此,我们推测mTOR信号通路在肝再生过程中发挥重要作用。
- 闫洪涛陈平朱瑾还勇为何中林陈胤蒋利
- 关键词：肝部分切除术肝再生蛋白质合成
- ^(125)I支架抑制犬胆管损伤后胆管平滑肌细胞增殖的作用被引量：4
- 2007年
- 目的探讨125I支架抑制犬胆管损伤后胆管平滑肌细胞增殖,预防胆管再狭窄的可行性。方法实验犬12只(体质量15~18kg),随机分为普通支架组和125I支架组各6只。用切断吻合法,造成胆总管损伤。术后30d胆道狭窄形成后,分组将普通支架及125I支架从胆总管末端开口处释放到胆总管内。置入支架后60d分别行病理形态学检测,用免疫组织化学方法测定P53蛋白、增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen)及平滑肌肌动蛋白(smoothmuscleac-tin),并测定外周血和支架周围放射性。结果支架置入后60d,与普通支架组比较,125I支架组胆管最大内膜厚度显著减少(P<0.05),两组胆管狭窄面积百分比分别为(53.72±13.89)%和(17.34±9.28)%,差异有显著性(P<0.05),125I支架组胆管腔周长及胆管腔面积均较普通支架组明显增加(P<0.05),125I支架组胆管平滑肌增殖细胞核抗原(PCNA)及平滑肌肌动蛋白(SMA)表达较弱,而P53蛋白表达增高,后者平滑肌PCNA及SMA表达增高,而P53蛋白表达较弱。结论125I支架照射可抑制平滑肌细胞增殖,预防胆管再狭窄。
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- 关键词：胆道平滑肌细胞I
- 辐射诱导对犬胆管平滑肌细胞凋亡中BCL-2活性的影响
- 2007年
- 目的:探讨γ射线对BCL-2基因在犬胆管壁增殖平滑肌细胞凋亡中的活性影响。方法:实验犬24只(15～18kg),随机分为普通支架组和^(125)I支架组各12只。用切断吻合法,造成胆总管损伤。术后30天胆道狭窄形成后,分组将普通支架及125I支架从胆总管末端开口处释放到胆总管内。置入支架后60d分别行病理形态学检测,用免疫组织化学方法进行凋亡细胞,BCL-2蛋白基因检测,并用计算机图像检测系统检侧两组胆管腔面积。结果:^(125)I支架组犬胆管组织中BCL-2基因表达较普通支架组减弱,且BCL-2基因低表达组犬胆管出现明显增殖平滑肌细胞凋亡,而且犬肝外胆管无明显狭窄;而普通支架BCL-2基因高表达,且犬胆管未出现增殖平滑肌细胞明显凋亡,而且犬肝外胆管有明显狭窄。结论:^(125)I放射性支架通过抑制BCL-2基因,促进犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡,可以抑制犬肝外胆管狭窄。
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- 关键词：Γ射线细胞凋亡BCL-2基因
- CDC6靶向RNA干扰质粒载体的构建及生物活性鉴定
- 2007年
- 目的:构建小鼠CDC6基因的RNAi真核表达载体PGCsilencer TM u6/Neo/GFP/RNAi,观察其转染小鼠肝细胞前后CDC6的表达变化。方法:根据GenBank中CDC6的序列,设计特异性siRNA序列,将模板序列克隆至PGCsilencer U6/Neo/GFP质粒中,通过测序鉴定后,用脂质体将重组子转染至正常小鼠肝细胞中,用RT-PCR检测CDC6的mRNA的表达及用Western blot方法检测CDC6蛋白水平的表达,并比较转染前后其表达水平的变化。结果:经测序,模板序列与设计序列完全正确,经过RT-PCR及Western blot方法检测,转染干扰质粒后,小鼠肝细胞中CDC6表达在mRNA及蛋白水平都有明显的下降。结论:成功构建了CDC6基因的RNAi真核表达载体并转染至小鼠肝细胞中,为下一步探讨CDC6在肝再生的作用奠定了基础。
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- 关键词：CDC6RNA干扰质粒
- 三维培养条件下流体剪切力对人真皮成纤维细胞成骨分化的影响被引量：2
- 2016年
- 目的通过准静态平面流场灌注系统,探讨不同流体剪切力对三维培养条件下人真皮成纤维细胞增殖和成骨分化的影响。方法将人真皮成纤维细胞按2×105/m L密度接种于胶原水凝胶支架中,同时设置低流速处理组(low flow velocity treatment group,LFV组)和高流速处理组(high flow velocity treatment group,HFV组)与三维静态培养的对照组(control group)进行比较。第3、6天和9天对各实验组进行HE染色并计数细胞;全程每隔3天测1次培养基中葡萄糖的消耗量;第21天行茜素红染色观察各组诱导矿化情况,同时采用FQ-PCR定量测定ALP和BMP-2基因的表达。结果 3组细胞均增殖明显,第6、9天LFV组细胞增殖最多,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);实验周期内各组培养基的葡萄糖含量均呈下降趋势,但组间比较差异无统计学意义;第21天茜素红染色3组均呈阳性,矿化结节面积大小统计显示HFV组最大,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);ALP和BMP-2基因表达量分别为LFV组:(1.780±0.233)/(2.788±0.241);HFV组:(2.262±0.306)/(4.576±0.253);对照组:(1.147±0.215)/(0.354±0.063),组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论流体剪切力能促进人真皮成纤维细胞的增殖和成骨分化,且流体剪切力较小时有利于细胞增殖,而较大时会在一定程度抑制细胞增殖。
- 张维谭燃景唐辉邱伟明杨桂红温旭红闫洪涛杨亚东伍津津
- 关键词：人真皮成纤维细胞灌注培养流体剪切力成骨分化
- 胆汁刺激与良性胆管狭窄形成机制的试验研究被引量：6
- 2008年
- 目的观察巨噬细胞（M西）及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1）在胆道愈合过程中的表达和分布，探讨胆汁刺激作用与胆管壁慢性炎症的关系，及其在良性胆管狭窄形成过程中的作用及意义。方法实验犬48只（15～18kg），随机分为胆汁刺激组和非胆汁刺激组各24只。胆汁刺激组用切断吻合法，造成胆总管损伤，非胆汁刺激组用切断吻合法，造成胆总管损伤后，同时在吻合胆管上部结扎胆总管，并行胆囊空肠架桥内引流。各组术后再分为1周小组、3用小组、3个月小组、6个月小组。采用免疫组织化学法对MΦ、TGF-β1及平滑肌肌动蛋白（smooth muscle actin）在各组中的表达和分布进行研究。结果MΦ、TGF-β1及平滑肌肌动蛋白（SMA）在胆汁刺激组和非胆汁刺激组表达各期比较差异有统计学意义（P〈0．05），同组内各小组间表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论胆汁刺激作用引起的管壁慢性炎症反应持续存在是造成损伤胆管上皮愈合后M中仍大量聚集，持续合成、分泌TGF-β1、MDGF等生长因子，导致成纤维细胞增殖旺盛，胶原过度合成，管腔瘢痕性狭窄的重要因素。
- 何中林陈平闫洪涛还勇为
- 关键词：胆管伤口愈合巨噬细胞
