杨帆
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 供职机构：山东农业大学食品科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学理学更多>>
- 用于MALDI-TOF MS分析的毛细管层析柱制备方法研究
- 2014年
- 研究了一种用于MALDI-TOF MS分析中样品预处理毛细管亲和层析柱的制备方法。首先采用硫酸和双氧水氧化法将羟基引入到石英毛细管内表面,进一步使用氨基丙基三乙氧基硅烷(APTES)对毛细管进行修饰以将氨基偶联到毛细管内表面;采用1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)将魔芋葡甘聚糖(KGM)进行活化,将活化后的KGM与毛细管上的氨基进行了偶联,在此基础上将模型蛋白(胰蛋白酶)偶联到毛细管内KGM,成功制备出毛细管亲和层析柱,考察了KGM和环氧基含量对模型蛋白偶联量及其样品预处理效果的影响。结果表明,KGM分子量是影响毛细管层析柱上蛋白偶联量的关键因素,以胰蛋白酶抑制剂为目标物结合MALDI-TOF MS对亲和层析柱的分离效果进行了评价,证明了偶联胰蛋白酶的毛细管层析柱可有效实现胰蛋白酶抑制剂的分离和浓缩。基于表面处理和KGM衍生的毛细管亲和层析柱制备技术具有可行性,并可用于MALDI-TOF MS分析的样品预处理。
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- 关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱毛细管魔芋葡甘聚糖氨基硅烷
- 基于生物质谱的胶原蛋白定量检测方法被引量：6
- 2015年
- 本研究旨在建立一种基于特征多肽的胶原定量检测方法,通过序列比对的方法筛选胶原蛋白特征多肽,利用胰蛋白酶将牛Ⅰ型胶原蛋白标准品进行酶解,采用液质联用技术(HPLC-MS)对特征多肽进行检测,建立特征多肽丰度与胶原蛋白浓度对应关系并用于实际样品分析。结果表明,牛Ⅰ型胶原蛋白中检测出6种特征多肽,其中多肽GEAGPSGPAGPTGAR由于其丰度高且二级质谱稳定适合作为定量检测的特征多肽,多肽信号强度与蛋白浓度(0.1-3.0 mg/m L)呈良好线性关系。将所建方法用于实际样品分析,牛跟腱胶原蛋白含量为90.2%,胶原海绵中胶原蛋白含量为93.4%,检测结果与基于氨基酸组成分析的结果一致。该研究表明基于HPLC-MS的特征多肽分析方法进行胶原蛋白定量检测具有可行性,该方法在含胶原蛋白医疗器械等生物制品质量控制方面具有应用前景。
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- 关键词：胶原蛋白
- 基于点击化学的琼脂糖微球上溶菌酶定点偶联方法研究被引量：1
- 2016年
- 以溶菌酶为模型,研究了一种基于点击化学的琼脂糖微球上蛋白质定点偶联方法。首先将琼脂糖微球使用1,4-丁二醇二缩水甘油醚活化后与对氨基苯乙炔反应,将炔基引入琼脂糖微球。其次合成了叠氮基癸酸,通过EDC/NHS法将叠氮基癸酸偶联到溶菌酶表面,将不同修饰位点的溶菌酶进行色谱分离后,通过点击化学使溶菌酶分子上叠氮基与琼脂糖微球表面上的炔基进行反应。XPS分析结果表明偶联对氨基苯乙炔后的琼脂糖微球表面出现N元素,证明炔基成功偶联在微球表面。采用合成的叠氮基癸酸对溶菌酶进行修饰,质谱分析结果表明叠氮基主要出现3个位点,Lys^1、Lys^(33)和Lys^(96)。将偶联位点为Lys^(96)的溶菌酶进行了分离,通过点击化学反应将溶菌酶偶联在琼脂糖微球表面,质谱分析结果表明偶联的溶菌酶其酶解产物中未检测出多肽Gln^(74)-Lys^(96),证明溶菌酶通过Lys^(96)偶联在琼脂糖微球表面。该研究为偶联位点均一、可控的蛋白质偶联方法提供了参考。
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- 关键词：溶菌酶点击化学
