目的克隆细胞外基质金属蛋白酶组织抑制因子4(tissue inhibitor-4 of metalloproteinases,TIMP-4)基因,构建包装携带TIMP-4基因的重组腺病毒载体(Ad/T4),为基因治疗血管再狭窄的实验研究打下基础。方法以人心脏cDNA文库为模板,应用PCR克隆TIMP-4基因,经DNA测序确定克隆结果。构建具有强启动子CMV,携带TIMP-4和报告基因GFP的穿梭质粒pAdTrack-T4,利用AdEassy系统,在大肠杆菌BJ5183经同源重组产生重组腺病毒质粒pAd/T4。脂质体介导转染293细胞,包装重组腺病毒载体(Ad/T4)。结果克隆出含TIMP-4全部编码序列的cDNA片断,并通过亚克隆和同源重组等将其重组入腺病毒,构建包装了重组腺病毒载体Ad/T4。结论Ad/T4中含有TIMP-4和GFP的完整表达盒,可用于基因治疗的实验。
