杨琼 作品数:13 被引量:31 H指数:4 供职机构: 江苏省农业科学院 更多>> 发文基金: 江苏省农业科技自主创新基金 国家自然科学基金 江苏省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 自动化与计算机技术 更多>>
水稻二化螟和三化螟基因组ddRADseq文库的构建 被引量:2 2016年 本文介绍了构建水稻二化螟和三化螟"双酶切限制性酶切位点关联DNA测序"(Double digest restrictionsite associated DNA sequencing,ddRADseq)文库的方法。利用安捷伦2100生物分析仪对4种单酶切及2种双酶切的酶切产物片段大小及分布范围进行分析,筛选出Mlu C I和Nla III两种限制性内切酶组合对螟虫基因组DNA进行酶切。酶切后的DNA片段两端连接上特定的P1、P2接头后,用Pippin Prep回收大小为285-435 bp的DNA片段。通过PCR扩增进行文库的富集并引入index序列。构建好的ddRADseq文库用琼脂糖凝胶电泳和生物分析仪进行质量检测。本方法所构建的文库DNA片段长度、分布和摩尔浓度能够达到Illumina平台测序的技术要求。本研究证实了利用Mlu C I和Nla III组合酶切构建水稻螟虫基因组ddRADseq文库的可行性,为在水稻螟虫中利用ddRADseq技术开展生物地理学、种群遗传学和系统发育重建等方面的研究奠定基础。 杨琼 孙娜 郑敏 罗除成 罗光华 方继朝关键词:水稻螟虫 二化螟鞘磷脂合酶相关基因CsSMSr的克隆、真核表达及表达谱分析 2013年 鞘磷脂合酶(SMS)基因家族在鞘脂质代谢中起着关键作用,可以通过调节神经酰胺和甘油二酯的平衡调控细胞的生存和凋亡。本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆得到1个二化螟鞘磷脂合酶相关基因的全长cDNA,命名为CsSMSr(Genbank登录号:JQ664739)。CsSMSr开放阅读框1587bp,可编码528个氨基酸;序列分析表明,CsSMSr基因编码的蛋白N端具有保守的SAM结构域,含6个跨膜区域,并且有4个SMS家族特有的保守区域D1~D4,保守区D3和D4上有活性中心包括3个氨基酸残基(催化三联体):His302,His345,Asp349。CsSMSr在粉纹夜蛾Tn细胞内成功表达,Western blot检测表达产物分子量约60kDa。应用实时荧光定量PCR方法分析该基因在二化螟不同发育阶段和不同组织的表达,结果表明,CsSMSr随着二化螟的生长发育表达水平逐渐升高,在成虫时期达到最大;CsSMSr的表达具有组织特异性,二化螟雌成虫和雄幼虫生殖器官中的CsSMSr表达量都显著高于其他器官,在二化螟雄成虫精巢中表达量也较高,但与中肠和马氏管差异不大。CsSMSr的表达有时间特异性和组织特异性,推测该基因在二化螟的发育和生殖中有重要作用。本研究成功克隆并表达了二化螟鞘磷脂合酶相关基因,为进一步对该基因进行功能鉴定奠定了基础。 张艳茹 郑作林 周瀛 杨琼 巩中军 程家安 祝增荣关键词:二化螟 真核表达 实时荧光定量PCR 油菜、棉花硼磷营养相互作用机理研究 杨琼两种甜菜夜蛾致病菌的分离、鉴定及杀虫成分初步分析 被引量:8 2012年 从室内饲养的甜菜夜蛾患病死亡虫体中分离、纯化出5个细菌菌株,进行毒力测试,筛选出对甜菜夜蛾具有较高致病力的菌株B30和B32。通过革兰氏染色、常规形态学观察及16S rDNA序列分析,将B30和B32分别鉴定为黏质沙雷氏菌Serratia marcescens和类芽孢杆菌Paenibacillus cookii。杀虫活性成分分析显示,2个菌株培养液的菌体沉淀破碎液对甜菜夜蛾的致病力高于上清液;上清液和菌体破碎液经蛋白酶K处理后致病力均显著降低。由此推断,两种致病菌的杀虫活性成分主要是胞内蛋白质。 杨琼 周宇 韩光杰 方继朝关键词:甜菜夜蛾 RDNA 黏质沙雷氏菌 类芽孢杆菌 杀虫成分 抑制PCR富集法分离三化螟基因组微卫星分子标记 被引量:1 2013年 采用抑制PCR的方法构建三化螟的微卫星文库,并分离微卫星分子标记。挑取的201个阳性克隆测序结果表明,187个克隆含有微卫星序列,抑制PCR筛选微卫星序列的准确率达到93.03%。对该187个微卫星序列进行比对,得到18个不同的微卫星序列,并成功提交至GenBank。对这18个序列设计了30对特异性引物,检测德阳种群48个体,共得到5个三化螟微卫星分子标记。 周宇 杨琼 韩光杰 方继朝关键词:三化螟 微卫星 富集文库 分枝杆菌的DNA拓扑异构酶Ⅰ与3-甲基腺嘌呤DNA糖苷水解酶以及核糖激酶相互作用研究 DNA拓扑异构酶是一类广泛存在的核酸代谢酶,它在维持DNA的超螺旋状态方面发挥重要作用。许多抗癌药物都是通过拓扑异构酶干扰DNA复制、重组和基因表达从而发挥疗效的。因此,拓扑异构酶已经成为一种重要的潜在药物靶标。本课题是... 杨琼关键词:DNA拓扑异构酶 文献传递 寄主植物对田间稻水象甲一代成虫取食斑数量与长度关系的影响 被引量:5 2007年 在2004年和2005年两年的田间实验中,研究分析了每丛植物上稻水象甲一代成虫的取食斑数量与长度间的线性回归关系。每丛稗草上的稻水象甲取食斑总量显著高于水稻、异型莎草和李氏禾上的;两种寄主植物的两种移栽期的组合、4种不同寄主植物各2次观察得到的共16组每丛植物上的稻水象甲取食斑数量和总长度间的直线回归方程均显著;植物种类对回归系数有显著影响,以稗草上的最大。这些回归方程对稗草和水稻的不同移栽期总体而言是稳健的,但对不同观察期则不稳健。本试验建立的取食斑数量与总长度的直线回归法可用于稻水象甲控制阈值的确定、稻水象甲入侵早期的取食量及成虫密度初步推断、抗稻水象甲的水稻种质资源评估以及应用一些象甲控制外来入侵植物时的寄主专一性测定。 蔡雪涛 郑永敏 商晗武 杨琼 唐启义 郑雪浩 程家安 祝增荣关键词:稻水象甲 稗草 硼对油菜磷吸收动力学影响的研究 被引量:2 1996年 液培六周的油菜苗在缺硼(0μg/g)和高硼(0.5μg/g)时磷的吸收值Imax明显降低,且影响程度为:高硼>缺硼。3种硼水平(0、0.5、5μg/g)对油菜的Km值均无影响,说明H3BO3与H2PO-4和HPO4=不存在竞争性抑制。 杨琼 刘武定 皮美美关键词:油菜 硼 磷 动力学参数 不同硼浓度对棉花磷的吸收和分配的影响(简报) 被引量:2 1995年 在缺硼和高硼条件下,棉花的Imax明显降低,Pi的吸收受抑,高硼大于缺习,碑由权向地上部的运输也有受抑的趋势。0、5.4、108mmol/L的硼对棉花吸收的Pi的Km值均无影响,说明H3BO3与H2PO-4和HPO-4不存在竞争性抑制. 杨琼 刘武定 皮美美关键词:棉花 硼 磷 硼磷互作对油菜生长发育及ATP酶活性的影响 被引量:7 1993年 在土培条件下,研究不同水平硼磷配合对油菜发育及ATP酶活性的影响。结果表明:适量施硼促进油菜苗期生长,在严重缺硼时,施磷能提高生物学产量,促使抽薹开花,但不结实。磷能减轻高量硼的中毒症状。以硼0.8ppm和磷100ppm配合的效果最佳。单施硼增强ATPase的活性,单施磷降低ATPase的活性。 杨琼 刘武定 皮美美关键词:油菜 发育 腺苷三磷酸酶 硼