刘思远
- 作品数：9 被引量：10H指数：2
- 供职机构：河北师范大学更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪肺炎支原体168弱毒菌株P65-DnaKc融合蛋白的表达及免疫原性被引量：4
- 2015年
- 研究猪肺炎支原体168(Mycoplasma hyopneumoniae 168,Mhp168)弱毒株融合蛋白P65-DnaKc免疫原性。根据GenBank中Mhp168弱毒株p65和dnaKc基因的开放阅读框设计特异性引物,进行PCR扩增,构建原核表达载体pET-28α-P65,pET-28α-DnaKc以及pET-28α-P65-DnaKc,经原核表达并纯化获得的蛋白与佐剂以体积比1∶1乳化后免疫小鼠,通过酶联免疫吸附反应(ELISA)测定小鼠血清的抗体效价。选取抗体效价较高的小鼠进行攻毒试验,记录分析试验结果。经间接ELISA试验证明单蛋白P65、DnaKc以及融合蛋白P65-DnaKc均具有良好的免疫原性,血清效价分别为:1∶12 800、1∶51 200和1∶204 800,融合蛋白的血清抗体效价明显高于单蛋白;攻毒试验证明,P65-DnaKc重组蛋白疫苗的保护率可达90%。融合蛋白P65-DnaKc具有良好的优于P65和DnaKc单蛋白的免疫原性。
- 刘思远刘东关婉怡鞠建松赵宝华
- 关键词：猪肺炎支原体P65基因
- 我国猪主要细菌病的危害及防治研究进展被引量：2
- 2014年
- 我国是世界养猪大国,大部分地区都有家猪的分布,但猪的细菌病一直是影响养猪业发展的一大障碍。猪细菌病大多为慢性病且不易根治,容易反复发作,对其进行防治需要耗费大量的人力、物力和财力。此外,由于缺乏对于细菌病危害的足够认识,以及目前市场上有效的治疗药物较少,造成了我国猪场细菌病泛滥。因此,猪细菌病的发生机制及其防控技术成为近年来研究的焦点。对我国猪场主要发生的细菌病的种类、危害、诊断方法及防治措施进行了综述,以期为猪细菌病的综合防控提供理论基础。
- 刘思远刘文青赵宝华
- 关键词：细菌病
- 猪肺炎支原体168弱毒株P65基因的原核表达及鉴定被引量：2
- 2015年
- 研究猪肺炎支原体168(Mycoplasma hyopneumoniae 168,Mhp168)弱毒株重组蛋白p65的免疫原性。根据GenBank中Mhp168弱毒株P65基因的开放阅读框设计特异性引物,进行PCR扩增,构建原核表达载体pET-28a-P65,经原核表达并纯化获得的重组蛋白与佐剂以体积比1∶1乳化后免疫注射小鼠,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定小鼠血清的抗体效价;选取抗体效价较高的小鼠进行攻毒试验。经间接ELISA证明,重组蛋白p65具有良好的免疫原性,血清效价为1∶12 800。攻毒试验证明,p65重组蛋白疫苗的保护率可达80%,证明重组蛋白p65具有良好的免疫原性。
- 刘思远王琳杨琳娜高玉乔赵宝华
- 关键词：猪肺炎支原体P65基因酶联免疫吸附测定
- 猪肺炎支原体168弱毒株p46和p65基因的融合、表达及其融合蛋白免疫原性分析
- 本实验主要进行猪肺炎支原体168(Mycoplasma hyopneumoniae 168,Mhp168)弱毒株p46和p65基因的融合、表达及其融合蛋白免疫原性分析。根据GenBank中的Mhp168弱毒株p46基因(...
- 刘思远赵宝华
- 关键词：猪肺炎支原体融合蛋白SDS-PAGE
- 抗产气荚膜梭菌ε毒素Phage-ScFv库的构建、筛选与鉴定
- 2015年
- 利用本实验室已诱导并纯化后的重组毒素蛋白制成类毒素免疫BALB/c小鼠,提取小鼠脾脏mRNA。通过RT-PCR和SOE-PCR获得由抗体重链可变区(VH)-Linker-轻链可变区(VL)构成的750bp左右单链抗体(ScFv)基因片段。随后利用噬菌体展示技术成功构建了抗产气荚膜梭菌ε毒素噬菌体单链抗体(Phage-ScFv)库。并通过"吸附-洗脱-扩增",5轮高效的淘洗筛选系统,最终筛选出特异性强的噬菌体抗体。最后,对强阳性的单链抗体侵染E.coli HB2151进行表达,SDS-PAGE结果显示其相对分子质量为30 000左右,与预期结果一致,并且能以分泌形式表达。本试验为抗产气荚膜梭菌ε毒素中毒治疗及其分子致病机制的研究奠定了基础。
- 王琳张聪敏刘思远杜乐妍赵宝华
- 关键词：D型产气荚膜梭菌噬菌体抗体库
- 一种猪肺炎支原体的融合基因及其制备方法
- 本发明公开了一种猪肺炎支原体的融合基因及其制备方法，属于基因工程技术领域，本发明中所使用的P46和P65基因，直接根据NCBI？GeneBank中发布的编码区序列，设计含有相应酶切位点的特异性引物。P46基因的PCR产物...
- 赵宝华刘思远彭丽萍朱晓萍陈珍姚昌茹
- 猪肺炎支原体168弱毒株P46-P65融合蛋白的免疫原性被引量：1
- 2017年
- 根据猪肺炎支原体168(Mycoplasma hyopneumoniae 168,Mhp168)弱毒株p46和p65基因序列设计特异性引物,进行PCR扩增并构建表达载体pET-28a-p46,pET-28a-p65以及pET-28a-p46-p65。以表达载体pET-28a-p46和pET-28a-p46-p65为模板,将其中p46基因3个TGA密码子突变为TGG。原核表达并纯化的蛋白与佐剂以体积比1∶1乳化后免疫小鼠,通过酶联免疫吸附反应(ELISA)测定小鼠血清的抗体效价。分别选取抗体效价较高的小鼠进行攻毒试验。经间接ELISA试验证明单蛋白P46、P65以及融合蛋白P46-P65的血清效价分别为:1∶1 280000,1∶128 000和1∶2 560 000;攻毒试验证明,P46、P65单蛋白和P46-P65融合蛋白疫苗的保护率分别可达82%,78%和98%。融合蛋白P46-P65具有良好的免疫原性,并且要优于单蛋白P46和P65的免疫原性。
- 彭丽萍刘思远朱晓萍陈珍姚昌茹赵宝华
- 关键词：猪肺炎支原体P46基因P65基因融合蛋白
- 抗产气荚膜梭菌ι毒素Phage-ScFv库的构建与筛选被引量：1
- 2017年
- 选取经产气荚膜梭菌ι毒素免疫且抗体效价较高的小鼠,提取脾脏mRNA,通过PT-PC技术,分别获得340,325bp的重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)获得大小为750bp的VH-Linker-VL单链抗体基因(ScFv)。利用One Step Cloning Kit试剂盒将ScFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB5E连接,构建库容约为3.5×106抗ι毒素噬菌体初级抗体库。以Ia、Ib为抗原进行Phage-ScFv表面展示文库的5轮亲和富集筛选,最终阳性率均可达70%。选取亲和力最强的3株阳性抗体(Ia-4、Ia-8和Ib1)进行可溶性表达,为ι毒素特异性抗体的大量制备奠定基础,并对产气荚膜梭菌ι毒素感染病例的检测和临床治疗研究具有一定的理论价值和实践意义。
- 王琳刘思远杜乐妍景心怡赵宝华
- 关键词：IB单链抗体噬菌体单链抗体库
- 一种猪肺炎支原体的融合基因及其制备方法
- 本发明公开了一种猪肺炎支原体的融合基因及其制备方法，属于基因工程技术领域，本发明中所使用的P46和P65基因，直接根据NCBI GeneBank中发布的编码区序列，设计含有相应酶切位点的特异性引物。P46基因的PCR产物...
- 赵宝华刘思远彭丽萍朱晓萍陈珍姚昌茹
- 文献传递
