杨海杰
- 作品数：29 被引量：32H指数：3
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- 相关领域：生物学医药卫生文化科学更多>>
- 蛋白激酶CβⅡ负调控小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化被引量：1
- 2015年
- 目的观察蛋白激酶C(PKC)各亚型在小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化中的作用。方法Western blot检测小鼠BMSCs成骨分化中PKC各亚型的活化情况;利用PKC阻断剂GFX分析PKC在BMSCs体外成骨分化中的作用;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测成骨早期分化指标ALP的活性;茜素红染色检测BMSCs体外矿化能力;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测成骨分化相关基因Runx2、Ⅰ型骨胶原a1(ColⅠa1)和ALP的表达情况。结果小鼠BMSCs成骨分化过程中,仅检测到PKCβⅡ亚型活化,其他亚型均无明显活化。利用PKC阻断剂GFX抑制PKCβⅡ活化后,茜素红染色结果显示BMSCs的成骨分化过程受到促进;PCR结果显示成骨分化相关基因Runx2、ColⅠa1和ALP的mRNA水平均有不同程度增加;ALP活性检测结果也显示BMSCs的成骨分化过程受到促进。结论PKCβⅡ可负调控小鼠BMSCs的成骨分化。
- 崔阳阳杨海杰刘世饶张亚平马双平丰慧根
- 关键词：蛋白激酶C骨髓间充质干细胞成骨分化碱性磷酸酶
- 分枝状聚乙烯亚胺对不同细胞系的转染效率和细胞毒性作用被引量：1
- 2015年
- 目的探讨分支状聚乙烯亚胺(PEI)作为载体对不同细胞株的转染效率和细胞毒性。方法培养人类胚胎肾细胞293T、人上皮癌细胞Hela、小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)和大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12。悬浮转染p EGFP质粒与PEI的复合物,利用荧光细胞计数法分析转染效率;悬浮转染p Luc(luciferase基因来自Renilla)质粒与PEI的复合物,利用分光光度计分析各细胞的荧光素酶活性;采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法分析PEI对293T、Hela、BMSC和PC12细胞的毒性,分析转染效率和细胞毒性之间的相关性。结果293T、Hela、BMSC和PC12细胞的转染效率分别为(92.1±4.5)%、(29.2±3.4)%、(21.5±2.1)%和(17.0±3.2)%。293T、Hela、BMSC和PC12细胞的荧光素酶活性分别是2.87×108、3.35×107、1.94×107和1.08×107RLU·mg protein-1。293T、Hela、BMSC和PC12细胞转染效率排序:293T>Hela>BMSC>PC12细胞。同时,MTT比色法结果表明细胞毒性排序:293T>Hela>BMSC>PC12细胞。转染效率与细胞毒性呈正相关(r=0.865,P<0.05)。结论 PEI对不同细胞株的转染效率和细胞毒性存在一定的正相关性。
- 冯培杨海杰王磊李志超马双平王勉丰慧根
- 关键词：聚乙烯亚胺基因转染细胞毒性
- 浅谈高等学校青年教师的师德修养被引量：8
- 2017年
- 高等学校中青年教师的所占比例越来越高,高校青年教师的道德修养直接关系到大学生的培养质量,也关系到高等学校的综合办学水平。文章从当前时代的发展、大学生的健康教育、青年教师的师德修养缺憾等方面阐述加强高校青年教师师德修养的必要性;进一步从理论学习、职业观念、团结协作、沟通交流、完善制度和科学管理等方面浅析了加强高校青年教师师德修养的途径和策略。
- 程彬峰王磊杨海杰
- 关键词：师德修养青年教师
- 新型氟化的芳香类聚酰胺基因转染试剂其制备方法及应用
- 本发明公开了一种新型氟化的芳香类聚酰胺基因转染试剂其制备方法及应用，其其分子式为：((C<Sub>2</Sub>H<Sub>4</Sub>NCO(C<Sub>6</Sub>R<Sub>1</Sub>R<Sub>2</Su...
- 王勉薛寒杨海杰剧飞王磊程彬峰冯志伟
- 文献传递
- 奥氮平对骨髓间充质干细胞成脂分化的作用及机制被引量：2
- 2016年
- 目的探讨第2代抗精神病药物(SGA)奥氮平(olanzapine)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外脂肪分化的影响及其作用机制。方法培养小鼠BMSCs,MTT法检测不同浓度奥氮平对BMSCs增殖的影响;通过油红O染色观察细胞形态,Western blotting检测脂肪分化标志基因蛋白αP2和C/EBPβ的表达,Real-time PCR检测成脂相关基因Leptin、C/EBPα和TNF-α的mRNA表达情况;同时Western blotting检测Akt信号通路上下游相关分子的表达水平及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt特异性阻断剂对小鼠BMSCs脂肪分化的影响。结果 MTT法结果显示,20μmol/L奥氮平对BMSCs的毒性最小;油红O染色可见加入奥氮平的细胞内脂肪滴明显多于对照组;Western blotting结果显示,αP2和C/EBPβ的表达水平较对照组上升了36%(P<0.01)和25%(P<0.05);Realtime PCR结果显示,Leptin、C/EBPα和TNF-α的表达水平较对照组分别上升68%(P<0.001)、79%(P<0.01)和60%(P<0.01),均具有统计学意义;Western blotting检测结果显示,p-Akt的含量明显高于对照组,磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK-3β)的表达随着p-Akt表达的增加逐渐减少;加入PI3K/Akt特异性阻断剂(LY294002)后αP2和C/EBPβ的表达受到抑制,细胞中的脂肪滴也明显减少。结论奥氮平可能通过促使PI3K/Akt信号通路中Akt的磷酸化水平升高来促进小鼠BMSCs的脂肪分化。
- 纪晨燕李永海李萌杨海杰冯志伟
- 关键词：奥氮平骨髓间充质干细胞AKT信号通路免疫印迹法小鼠
- TGF-β1通过激活Smad信号途径抑制PI3K/AKT信号介导的BMSC成脂分化被引量：3
- 2015年
- 转化生长因子β1(TGF-β1)是参与骨髓间充质干细胞(BMSCs)脂肪定向分化的重要调节因子,其具体的调节机制尚不清楚.本研究证明,BMSCs在体外分化为脂肪细胞的过程中,TGF-β1的基因表达显著下调,重组TGF-β1能够抑制BMSCs体外脂肪细胞定向分化,其分化的标志蛋白C/EBPβ和αP2的表达水平显著降低.TGF-β1在激活Smad信号通路的同时,还抑制胰岛素(脂肪分化的主要诱导剂)对PI3K/Akt信号通路的激活.加入Smad特异性阻断剂后,C/EBP-β和α-P2的诱导表达恢复正常,同时PI3K/Akt信号通路的活化亦得以恢复.结果提示,TGF-β1可通过Smad信号通路干扰脂肪细胞分化的核心信号通路-PI3K/Akt的活化,从而实现对BMSCs脂肪分化的抑制.该研究结果为肥胖等导致的心血管疾病或Ⅱ型糖尿病等的临床治疗提供有价值的参考.
- 李志超杨海杰剧飞冯培马双平连俊江冯志伟
- 关键词：脂肪细胞分化SMAD信号通路
- 生物材料在核酸疫苗中的应用
- 2016年
- 核酸疫苗具有很多传统疫苗不能比拟的优势,是现代疫苗研发的新热点。然而,与传统疫苗相比,裸露的核酸疫苗最大的缺陷是不能引发足够强的免疫应答。因此,科学家们利用生物材料作为核酸疫苗的载体,以颗粒或非颗粒的形式帮助它克服各种人体障碍进入细胞,并保护其活性,从而提高核酸疫苗的免疫应答强度和效率。设计高效、低毒的疫苗载体有众多因素需要考虑,如疫苗的制备方法和配方比例、生物材料与疫苗之间的相互作用、生物材料的化学和物理性能、材料的微观和宏观形态等。本文就以上因素进行概括总结,以使读者了解生物材料在核酸疫苗方面的研究现状。
- 王勉解丽芹陈淑丽薛寒杨海杰冯志伟
- 关键词：生物材料核酸疫苗核酸无机材料高分子材料疫苗载体
- 一种TSP4促进NG2细胞分化为神经细胞的实验方法
- 本发明公开了一种TSP4促进NG2细胞分化为神经细胞的实验方法，该方法包括以下步骤：细胞培养；质粒pXJ40‑myc‑TSP4的构建；Western印迹检测；免疫荧光；总RNA提取及实时荧光定量PCR；统计学处理。本发明...
- 杨海杰马双平王勉王磊程彬峰
- 文献传递
- 细胞周期蛋白依赖性激酶PFTK1在少突胶质前体细胞分化中的潜在作用被引量：2
- 2015年
- 背景:少突胶质细胞主要来自少突胶质前体细胞,该分化过程被多种因子严格调控。一些细胞周期蛋白依赖性激酶可以调控少突胶质前体细胞分化的早期阶段,对少突胶质细胞形成具有重要意义。目的:分析细胞周期蛋白依赖性激酶PFTK1在少突胶质前体细胞分化中的潜在作用及相应机制。方法:利用siRNA技术和Western印迹实验来检测OLN-93细胞分化的相关分子标志物及相应信号通路的活化情况。结果与结论:撤去血清后,少突胶质前体细胞系OLN-93细胞可进行自发分化。形态观察表明,用siRNA技术沉默PFTK1基因表达后,OLN-93细胞的分化得以明显加快。Western印迹实验显示PFTK1基因沉默后,OLN-93分化的相关分子标志物环核苷酸磷酸二酯酶和髓鞘少突胶质细胞糖蛋白的诱导出现显著增加。对PFTK1相关信号通路的研究则发现,PFRK1基因的沉默表达可诱发PI3K/AKT信号通路的活化。而对PI3K/AKT信号通路的特异性抑制可抵消PFTK1沉默对OLN-93细胞分化的促进效果。实验结果首次发现细胞周期蛋白依赖性激酶PFTK1可通过PI3K/AKT信号通路抑制少突胶质前体细胞的分化,为脱髓鞘引起的神经退化性疾病的治疗提供了重要的理论参考。
- 杨海杰崔阳阳王磊马双平李志超丰慧根
- 关键词：少突胶质细胞少突胶质前体细胞分化基因沉默
- IL-6通过MAPK/ERK信号通路调节BMSCs软骨定向分化被引量：6
- 2015年
- 白细胞介素-6(IL-6)是参与骨髓间充质干细胞(BMSCs)软骨定向分化的重要调节因子.MAPK/ERK信号通路可介导骨关节炎软骨损伤.然而,IL-6调节BMSCs定向分化为软骨细胞的分子机制尚不清楚.IL-6通过激活MAPK/ERK信号途径,抑制BMSCs的成软骨分化.本文发现,BMSCs在体外向软骨细胞分化时,Il-6基因表达水平显著下调,同时分泌到培养基中的IL-6蛋白水平亦明显降低.重组IL-6可抑制BMSCs向软骨细胞分化,软骨分化标志蛋白Runx2和Sox9的诱导表达亦相应下调.IL-6可诱导MAPK/ERK信号通路活化,加入ERK特异性阻断剂后,Runx2和Sox9的诱导表达恢复正常.结果提示,IL-6通过激活MAPK/ERK信号通路抑制BMSCs的软骨细胞分化.炎症因子IL-6对软骨细胞的再生具有不利的影响,该研究为软骨组织工程研究和骨关节炎等软骨疾病的治疗提供有价值的参考.
- 杨海杰李志超王勉王磊程彬峰冯培冯志伟
- 关键词：IL-6软骨细胞分化MAPK信号通路
