杨向君
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 发文基金：国家自然科学基金唐山市科学技术研究与发展指导计划项目河北省高等学校科学技术研究指导项目更多>>
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- QDPR基因表达水平对肾小管上皮细胞系NRK-52E细胞DHFR表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的 OLETF大鼠醌式二氢生物喋呤还原酶(Quinoid dihydropteridine reductase,QDPR)存在K93T点突变,QDPR催化醌型二氢生物喋呤还原成四氢生物喋呤(tetrahydrobiopterin,BH4);二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase,DHFR)能将二氢喋呤还原成BH4,提示生物喋呤代谢与叶酸代谢通路之间有串扰。文中通过研究QDPR基因表达水平对肾小管上皮NRK-52E细胞DHFR表达的影响,探讨QDPR基因在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的作用机制。方法 Western blot检测高糖环境下NRK-52E细胞及OLETF大鼠DHFR蛋白表达情况。利用慢病毒技术感染NRK-52E细胞,制作空载过表达、过表达QDPR敲低随机序列对照和敲低QDPR模型。每组再分别给予5.4 mmol/L正常糖培养基和30 mmol/L高糖培养基培养细胞72 h,模拟DN模型。实验分组:NRK-52E对照组、NRK-52E高糖组、空载过表达病毒对照组、空载过表达病毒高糖组、QDPR基因过表达组、QDPR基因过表达高糖组、敲低随机序列对照组、敲低随机序列高糖组、QDPR基因敲低组、QDPR基因敲低高糖组。观察高糖环境QDPR基因的表达情况对DHFR蛋白表达水平的影响。结果 NRK-52E高糖组DHFR蛋白含量(0.33±0.16)低于NRK-52E对照组(0.64±0.05),差异有统计学意义(P<0.05);OLETF大鼠DHFR蛋白的表达水平(1.03±0.12)明显低于LETO大鼠的表达水平(1.56±0.16),差异有统计学意义(P<0.01)。与空载过表达病毒高糖组(0.63±0.08)相比,QDPR基因过表达高糖组DHFR蛋白含量(0.12±0.09)降低,差异有统计学意义(P<0.01);与敲低随机序列对照组(0.52±0.08)相比,QDPR基因敲低高糖组DHFR表达量(0.62±0.27)差异无统计学意义(P>0.05)。结论DHFR蛋白在DN的发生发展中可能起到重要作用,QDPR基因过表达使DHFR蛋白表达含量下降,QDPR基因过表达通过下调DHFR蛋白的表达水平进而影响DN的发展。
- 杨向君蒲志杰孟令宇马艳红何海兰熊浩吴雪静张浩军李治国
- 关键词：二氢叶酸还原酶肾小管上皮细胞
- 敲低QDPR基因慢病毒构建及其干涉NRK-52E细胞效果研究被引量：2
- 2014年
- 目的构建醌型二氢生物碟呤还原酶(quinonoid dihydropteridine reductase,QDPR)敲低慢病毒模型,检测其对肾小管上皮NRK-52E细胞QDPR基因的敲低情况。方法设计合成QDPR的干涉shRNA序列,并重组入GP2慢病毒载体质粒,测序检验重组质粒是否转入该序列。三质粒共转染获得干涉慢病毒,将其感染NRK-52E细胞,新霉素筛选抗性细胞,用实时定量PCR、western blot和QDPR酶活性测量检测干涉效果。结果重组入GP2的序列与设计序列一致,病毒转染NRK-52E细胞使其获得了新霉素抗性,QDPR基因表达、蛋白含量及酶活性显著降低。结论本研究合成的QDPR基因敲低慢病毒能使NRK-52E细胞QDPR基因的mRNA转录、蛋白浓度及活性降低,为后续QDPR基因在糖尿病肾病中的作用研究提供了模型。
- 蒲志杰张景义孙耀东杨振邦杨向君何海兰刘业强孟令宇沈宏杨方李治国
- 关键词：慢病毒糖尿病肾病肾小管上皮细胞
