万李
- 作品数：7 被引量：76H指数：4
- 供职机构：中南大学湘雅医学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项湖南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
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- 重组可溶表达结核分枝杆菌新基因编码蛋白Rv2742的相互作用蛋白质组研究
- 2019年
- 目的 Rv2742是基于蛋白质基因组学技术从结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis H37Rv,结核菌)中发现并验证的遗漏注释基因。该研究旨在筛选Rv2742在结核菌中的相互作用蛋白质,对Rv2742互作网络进行分析,为深入探索其在结核菌中所参与的生物学功能提供理论基础。方法采用免疫亲和纯化质谱(IP-MS)筛选Rv2742在结核菌中的互作蛋白质。以pMAL-c2X和pMAL-c2X-Rv2742载体诱导表达、纯化获得的麦芽糖结合蛋白(MBP)和MBP-Rv2742融合蛋白为诱饵,分别取等摩尔蛋白与H37Rv非变性全细胞蛋白质裂解物进行孵育,收集2次生物学重复实验得到的与MBP和MBP-Rv2742诱饵结合的蛋白质复合物,10%SDS-PAGE凝胶电泳验证,通过液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)分析、筛选出Rv2742在结核菌中的互作蛋白质,对筛选到的蛋白质进行基因本体(gene ontology,GO)和互作网络分析。结果共筛选到105个Rv2742的潜在互作蛋白质,其定位主要分布在细胞壁、细胞质膜和细胞外区域等细胞组分中,功能上主要参与低氧应激、宿主共生、运输、毒力因子分泌等生物学过程。结论结核菌中有105个蛋白质与Rv2742互作,生物学功能及互作网络分析发现Rv2742可能参与结核菌侵入人体后的致病过程。
- 王红万李武舒佳常蕾万康林张瑶徐平戴二黑
- 关键词：结核分枝杆菌蛋白质组相互作用蛋白质MBP
- 中国6个省份结核分枝杆菌耐药状况及影响因素分析被引量：39
- 2016年
- 目的 分析北京、吉林、新疆、陕西、湖南、河南6省份结核分枝杆菌耐药性数据，了解耐药性结核病分布特征及影响因素。方法 在6省份采用问卷调查收集背景资料，并使用比例法药物敏感性试验对4种一线抗结核药物（异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇）进行检测，再利用SPSS 20.0软件分析其危险因素。结果 总体耐药率和耐多药率分别为23.42%和13.51%。北京、吉林、湖南、河南、陕西、新疆分离株耐药率分别为21.50%、12.24%、36.27%、42.86%、27.78%、24.39%，耐多药率分别为4.67%、8.16%、24.51%、26.53%、15.28%、14.15%。χ^2检验结果显示，各省份间单种药物耐药率、总体耐药率和耐多药率差异均有统计学意义（P=0.000）。单因素分析结果显示，结核病的复发、治疗史与耐药结核病的产生具有明显的相关性，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 我国耐药结核病的形势非常严峻，调查地区结核病耐药性存在明显差异，应针对各地区主要的危险因素加强预防干预。
- 宋艺万李陈双双徐永娟刘志广赵秀芹刘海灿吴移谋万康林管茶香刘民
- 关键词：结核分枝杆菌耐药结核病耐多药结核病
- 中国西南地区结核分枝杆菌临床分离菌株一线药物耐药状况调查被引量：15
- 2017年
- 目的了解西南地区结核分枝杆菌临床分离株的耐药表型及其影响因素情况,为结核病的预防和控制提供基础参考数据。方法选取中国西南4个地区(贵州、广西、四川和重庆)2006—2013年从结核病患者痰标本中分离培养的500株结核分枝杆菌,用比例法药物敏感试验对4种一线抗结核药物进行药物敏感性检测,用SPSS22.0中的χ~2检验和Logistic回归进行统计学分析。结果 500株结核分枝杆菌临床分离株,对INH、RFP、EMB和SM的耐药率分别为30.40%、26.00%、9.80%和24.40%,总体耐药率和耐多药率分别是40.60%和27.20%;贵州、四川、广西和重庆的总耐药率和MDR率分别为64.10%和46.15%、59.54%和51.90%、28.88%和14.97%、20.19%和3.85%。χ~2检验结果显示,各地区间菌株对4种药物的耐药率、总体耐药率和耐多药率差异均有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,地区和病例类型是结核病耐药及耐多药发生的影响因素(P<0.05)。结论西南地区,特别是贵州和四川的耐药结核病、尤其是耐多药结核病的流行状况严峻。应加强结核分枝杆菌耐药性监测,以指导临床用药和预防控制耐药结核病的发生和流行。
- 陈杏李雨晴万李刘海灿赵秀芹管茶香万康林袁秀琴
- 关键词：结核分枝杆菌耐药性LOGISTIC回归分析
- 母牛分枝杆菌与结核分枝杆菌和卡介苗的交叉免疫应答研究被引量：6
- 2019年
- 目的探讨母牛分枝杆菌与结核分枝杆菌和卡介苗的交叉免疫应答状况,为以母牛分枝杆菌研制新型疫苗提供基础免疫学参考。方法固体培养法培养母牛分枝杆菌(ATCC95051)、结核分枝杆菌(H37Rv)和卡介苗(BCG,中国株),收集菌体,采用超声破碎菌体制备全菌菌体抗原,对BALB/c小鼠进行免疫。体液免疫采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗体IgG水平;细胞免疫用细胞因子释放试验(cytokine release assay,CRA)检测各类细胞因子水平。结果3种分枝杆菌抗原免疫小鼠均能产生较高水平的抗体(IgG)和细胞因子(IFN-γ和IL-2),而产生较低水平的IL-4和IL-10。交叉免疫试验结果显示,母牛分枝杆菌、H37Rv和BCG分别同免疫后小鼠进行交叉免疫检测,均能分别产生高水平的IFN-γ和IL-2,同时检测到高滴度IgG抗体。结论3种分枝杆菌的免疫特征均以Th1型为主,母牛分枝杆菌与结核分枝杆菌和卡介苗之间均存在较强的交叉免疫应答,为用母牛分枝杆菌研制新的抗结核疫苗提供基础免疫学依据。
- 肖彤洋李晓琴闫宇涵李娜万李刘海灿李马超赵秀芹刘志广万康林
- 关键词：母牛分枝杆菌结核分枝杆菌卡介苗交叉免疫疫苗
- Trustline结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测试剂盒(胶体金法)的临床应用评价被引量：4
- 2013年
- 目的评价Trustline结核抗体IgG/IgM检测试剂盒临床应用效果。方法选用3家医院的1009份血清标本,其中628份为结核病患者血清(308例菌阳病例,320例菌阴病例);对照组381份非结核病血清。采用Trustline试剂盒及一种已上市的试剂盒(对照试剂盒)分别检测1009份血清,计算多项检测指标,从而评价试剂盒的检测效果。结果通过检测1009份临床血清标本,Trustline试剂盒检测血清抗体(IgG+IgM)的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、Youden指数分别为61.3%、79.8%、83.3%、55.6%和0.411,对照试剂盒检测血清抗体(IgG)的结果分别为53.7%、89.0%、88.9%、53.8%和0.426。经统计分析表明Trustline试剂盒的灵敏度显著优于对照试剂盒(P<0.01),特异度低于对照试剂盒(P<0.01),但阳性诊断效率和阴性诊断效率方面差异无统计学意义,Youden指数相接近。进一步分析显示Trustline试剂盒对菌阳样本及菌阴样本的检出率分别77.6%和44.7%,对照试剂盒则为67.9%和40.0%,对菌阳样本检出率的差异有统计学意义。检测1009份标本,Trustline试剂盒共得IgM阳性35例,其中结核组阳性30例(4.8%),非结核组阳性5例(1.3%)。结论 Trustline试剂盒检测结核抗体的灵敏度显著优于对照结核抗体试剂盒,并可同时用于检测IgG/IgM抗体,可以应用于结核病的快速诊断。
- 吕冰万李潘其林孙桂芝杨宝财王金峰刘姣万康林
- 关键词：血清学诊断
- 戊型肝炎病毒诊断抗原的克隆表达及抗原性初步鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的 克隆、表达与纯化硫氧还原蛋白-戊型肝炎病毒（HEV）诊断抗原（命名为N5）,并对其抗原性和血清学检测效果初步评价。方法 根据GenBank上HEV-ORF2以及ORF3羧基端的基因序列,按照大肠埃希菌密码子偏好表进行密码子优化,全基因合成后插入M48原核表达载体中,在大肠埃希菌中表达融合硫氧还蛋白的融合蛋白N5。并利用亲和层析技术对融合蛋白进行纯化,用Western blot技术评价其抗原性,并利用实验室和临床检测确定的HEV感染阴、阳性血清评价其血清学检测效果。结果 成功构建表达N5诊断抗原的重组质粒;高水平表达并纯化获取纯度高、浓度大的可溶性诊断抗原;Western blot结果显示融合蛋白N5可与HEV IgM抗体阳性血清特异性结合,具有良好的抗原性;以融合蛋白N5作为捕获抗原,建立间接ELISA,对病原检测和临床诊断确诊的40份戊型肝炎病例血清和40份健康人血清进行检测,其灵敏度和特异度分别为95%（38/40）和90%（36/40）。结论 成功构建了可表达融合硫氧还蛋白的HEV诊断抗原的重组质粒,并获得表达量高、抗原性强的可溶性融合蛋白N5,可应用于HEV血清学诊断,且有良好的应用前景。
- 万李苏秋东伊瑶毕胜利管茶香
- 关键词：戊型肝炎病毒血清学检测
- 中国西北四省(区)结核分枝杆菌分离株一线药物耐药状况及其影响因素分析被引量：24
- 2017年
- 目的了解西北地区结核分枝杆菌耐药状况及其影响因素,为预防和控制耐药结核病提供基础科学依据。方法选取中国西北4省、自治区(甘肃、西藏、新疆、内蒙古)2005-2011年从结核病患者痰标本中分离培养的757株结核分枝杆菌(MTB),采用比例法检测MTB对4种一线抗结核药物链霉素(SM)、利福平(RFP)、异烟肼(INH)和乙胺丁醇(EMB)的敏感性,结合病例背景资料分析相关影响因素。结果共检测了757株结核分枝杆菌,对SM、RFP、INH和EMB的耐药率分别为28.14%、26.68%、26.02%和7.53%,总的耐药率和耐多药率分别为40.55%和18.63%。西藏、新疆、甘肃和内蒙古的总耐药率和MDR率分别为64.42%和42.94%、40.48%和23.81%、41.61%和3.36%、27.90%和11.29%。χ2检验结果显示,各省份间菌株对INH、RFP和SM 3种药物的耐药率以及耐多药率差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,影响结核病耐药产生的主要原因是病例类型。复治病例发生耐药的危险性是新发病例的2.582倍(95%CI 1.869-3.566)。结论中国西北地区耐多药情况较为严重,特别是西藏和新疆。加强对结核病耐药性监测,规范化和针对性的全程治疗,防止疾病复发,是预防和控制耐药结核病的关键。
- 李雨晴万李陈杏刘海灿蒋毅赵秀芹管茶香万康林袁秀琴
- 关键词：结核分枝杆菌耐药性LOGISTIC回归分析
