尹雯雯
- 作品数：9 被引量：31H指数：4
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- 二甲双胍抑制SREBP-1c改善高脂诱导的骨骼肌胰岛素抵抗被引量：11
- 2016年
- 目的二甲双胍已成为治疗2型糖尿病的一线药物,前期研究结果提示固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)抑制胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)基因转录表达,在高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗中起关键作用。该研究探讨SREBP-1c在二甲双胍改善高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗中的作用及机制。方法经500μmol·L-1PA处理的L6细胞被二甲双胍(1、10 mmol·L-1)干预24 h后,采用2-NBDG方法检测其葡萄糖摄取水平,Western blot检测SREBP-1c、FAS、p-IRS-1(Tyr608/612)、IRS-1、p-AKT(Ser473)、AKT的蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测二甲双胍对SREBP-1c和IRS-1基因转录的调控。CHIP定量分析二甲双胍处理后SREPB-1c蛋白与IRS-1启动子区域的相互作用。结果 L6肌管细胞经PA处理后,糖摄取下降,SREBP-1c及其下游分子FAS表达升高,胰岛素信号通路相关分子p-IRS-1(Tyr608/612)、IRS-1、p-AKT(Ser473)/AKT表达下降;不同浓度二甲双胍干预后,L6肌管细胞糖摄取呈剂量依赖性增加,SREBP-1c、FAS表达下降,而p-IRS-1(Tyr608/612)、IRS-1、p-AKT(Ser473)/AKT表达升高。双荧光素酶报告基因实验结果显示二甲双胍抑制SREBP-1c启动子活性,增加IRS-1启动子活性。CHIP结果显示二甲双胍使SREBP-1c蛋白结合到IRS-1启动子区域的量下降约30%。结论二甲双胍通过抑制SREBP-1c改善高脂诱导的骨骼肌胰岛素抵抗。
- 吴文君汤孙寅炎时俊锋尹雯雯曹殊朱大龙毕艳
- 关键词：二甲双胍固醇调节元件结合蛋白-1C胰岛素受体底物-1骨骼肌细胞
- 固醇调节元件结合蛋白1c对骨骼肌细胞胰岛素受体底物1表达调控的影响
- 目的 探讨固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物1(IRS-1)表达调控的影响.方法 采用酶联合消化法取大鼠原代骨骼肌细胞,免疫组化法鉴定.将原代细胞分为对照组(C)、对照+胰岛素组...
- 尹雯雯毕艳朱大龙陈莹莹汤孙寅焱吴文君
- 转录因子SREBP1c在高脂诱导L6细胞胰岛素抵抗中的作用及机制被引量：9
- 2015年
- 目的 探讨固醇调节元件结合蛋白-1c （SREBP-1c）对骨骼肌细胞胰岛素受体底物-1（IRS-1）的调控机制,以明确SREBP-1 c在高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗中的作用.方法 L6细胞经2％胎牛血清（FBS）诱导分化成肌管细胞,经500 μmol/L棕榈酸（PA）处理建立胰岛素抵抗模型.采用Western印迹检测L6肌管细胞经PA处理后0.5、1、3、6、12、24、48 h的SREBP-1c、p-IRS-1（Tyr608/612）、IRS-1、p-AKT（Ser473）、AKT的蛋白表达.检测L6肌管细胞过表达SREBP-1 c或用肝X受体（LXR）激动剂TO901317（5 μmol/L）处理后SREBP-1 c、脂肪酸合成酶（FAS）及胰岛素信号通路相关分子的蛋白表达.采用双荧光素酶报告基因实验分析SREBP-1 c转录因子对IRS-1启动子区域的调控作用.结果 L6肌管细胞经PA处理后,SREBP-1c蛋白表达在1h后即显著增高,胰岛素信号通路蛋白p-IRS-1（Tyr608/612）、IRS-1及p-AKT（Ser473）表达在6h后显著下降,AKT蛋白表达无变化.L6肌管细胞经LXR激动剂TO901317处理后SREBP-1c、FAS基因及蛋白表达增高,IRS-1基因表达下降,p-IRS-1（Tyr608/612）、IRS-1及p-AKT（Ser473）/AKT蛋白表达下降.L6肌管细胞过表达SREBP-1c后相关蛋白出现与LXR激动剂干预相似的变化.双荧光素酶报告基因实验结果显示SREBP-1c显著抑制IRS-1的启动子活性,SREBP-1c DNA结合域的酪氨酸突变成丙氨酸后则对IRS-1启动子无作用.结论 SREBP-1c通过抑制IRS-1基因转录表达而影响胰岛素信号通路,在高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗中起关键作用.
- 吴文君毕艳汤孙寅炎尹雯雯陈莹莹朱大龙
- 关键词：固醇调节元件结合蛋白-1C棕榈酸骨骼肌胰岛素抵抗胰岛素受体底物-1
- 促红细胞生成素通过叉头状转录因子O1-糖原合酶激酶3β信号改善棕榈酸诱导HepG2细胞糖代谢被引量：5
- 2016年
- 目的观察促红细胞生成素（EPO）处理对棕榈酸（PA）诱导HepG2细胞糖异生及糖原合成的影响及作用机制。方法250μmol／L的PA作用HepG2细胞24h，分别用5、10U／mlEPO作用24h，另外，EPO处理的HepG2细胞分别加入磷脂酰肌醇3激酶（P13K）特异性抑制剂LY294002或渥曼青霉素（wortmannin）预孵育1h。比色法检测HepG2细胞糖原含量，Western blotting检测磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）、P13K蛋白表达、蛋白激酶B（AKT）、叉头状转录因子01（FOX01）、糖原合酶激酶3β（GSK-3β）表达。多组间比较采用方差分析。结果与PA处理组相比，5U／ml和10U／mlEPO处理组细胞下游分子GSK-3β（分别为1．02±0．03比0．74±0．11、1．06±0．02比0．74±0．11，t=4．236、4．996，均P〈0．05）及FOX01磷酸化水平明显增强（分别为0．99±0．05比0．73±0．09、1．13±0．06比0．73±0．09，t=4．798、6．757，均P〈0．05）。与EPO治疗组比较，加入抑制剂LY294002或wortmannin后，GSK．313（0．68±0．09比1．12±0．14、0．76±0．10比1．12±0．14，t=-4．632、-3．655，均P〈0．05）及FOX01（0．92±0．02比1．15±0．06、0．72±0．07比1．15±0．06，t=-6．532、-7．984，均P〈0．05）磷酸化水平均明显被抑制。结论在PA诱导的HepG2细胞，EPO可能通过P13K／AKT介导的FOX01、GSK-3β通路改善糖代谢。
- 张红毕艳葛智娟汤孙寅炎尹雯雯孟然张芃子朱大龙
- 关键词：促红细胞生成素HEPG2细胞糖原合酶激酶3Β
- 胰岛素对骨骼肌细胞固醇调节原件结合蛋白1c的调节作用
- 2015年
- 目的研究胰岛素对骨骼肌细胞固醇调节原件结合蛋白1c(SREBP-1c)的调节作用。方法将诱导分化完成的大鼠骨骼肌L6肌管细胞分为对照组、胰岛素组、磷酸酰基醇3激酶抑制剂wortmannin+胰岛素组、单磷酸腺苷依赖的蛋白激酶(AMPK)抑制剂compound C+胰岛素组、高脂对照组、高脂+胰岛素组、高脂+wortmannin+胰岛素组和高脂+compound C+胰岛素组。Western blot检测SREBP-1c、苏氨酸蛋白激酶(Akt)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、AMPK-mTOR通路相关蛋白的表达。结果与对照组相比,胰岛素组SREBP-1c、p-Akt、p-AMPK、p-mTOR蛋白表达升高(P<0.05);与胰岛素组相比,wortmannin+胰岛素组SREBP-1c表达降低(P<0.05);与高脂对照组相比,高脂+胰岛素组SREBP-1c、p-mTOR蛋白表达降低,p-Akt、p-AMPK蛋白表达升高(P<0.05);与高脂+胰岛素组相比,高脂+compound C+胰岛素组SREBP-1c表达升高(P<0.05)。结论骨骼肌细胞生理状态下,胰岛素对SREBP-1c的上调作用可能主要通过Akt-mTOR通路;胰岛素抵抗状态下,胰岛素治疗对SREBP-1c的下调作用可能主要通过AMPK-mTOR通路。
- 曹姝毕艳汤孙寅焱吴文君尹雯雯朱大龙
- 关键词：胰岛素抵抗骨骼肌细胞
- 固醇调节元件结合蛋白1c对骨骼肌细胞胰岛素受体底物1表达调控的影响被引量：4
- 2014年
- 目的 探讨固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物1（IRS-1）表达调控的影响.方法 采用酶联合消化法取2～3 d SPF级雄性SD大鼠原代骨骼肌细胞,将原代细胞分为对照组（C）、对照＋胰岛素组（C＋I）、高脂组（PA）及高脂＋胰岛素组（PA＋I）.将表达SREBP-1c腺病毒转染L6细胞,根据感染复数（MOI）分为含绿色荧光蛋白阴性载体（GFP）组、MOI值为5、50、100、200组.将靶基因为SREBP-1c的干扰RNA （siRNA）转染L6细胞,并分为空白对照组、阴性siRNA组及SREBP-1c siRNA组.Western blotting和实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测SREBP-1c、IRS-1、蛋白激酶B（Akt）基因及蛋白表达,油红O染色法检测细胞内脂质沉积情况.多组资料比较采用方差分析,两两比较采用最小显著差异法.结果 与C组相比,PA组SREBP-1c基因和蛋白水平升高（分别为2.72±0.08比1.00±0.18,3.02 ±0.19比1.00±0.05,t=15.240、18.289,均P＜0.05）,IRS-1基因和蛋白水平降低（分别为0.71 ±0.04比1.00 ±0.05,0.82 ±0.04比1.00±0.04,t=-7.960、-6.052,均P＜0.05）,丝氨酸磷酸化IRS-1蛋白表达升高,丝氨酸磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达下降（t=20.987、-5.869,均P＜0.05）.与GFP组相比,MOI值为50、100和200组的SREBP-1c基因和蛋白表达呈剂量依赖性上升（均P＜0.05）,IRS-1基因和蛋白表达水平呈剂量依赖性下降（均P＜0.05）.与空白对照组和阴性siRNA组相比,SREBP-1c siRNA组SREBP-1c基因和蛋白水平降低,IRS-1蛋白表达升高（均P＜0.05）.结论 SREBP-1c可抑制骨骼肌IRS-1胰岛素信号通路,参与肌细胞胰岛素抵抗的发生.
- 尹雯雯毕艳陈莹莹汤孙寅焱孙婧吴文君曹姝朱大龙
- 关键词：固醇调节元件结合蛋白1C胰岛素受体底物1胰岛素抵抗骨骼肌细胞
- 固醇调节元件结合蛋白1c抑制骨骼肌胰岛素受体底物1基因表达的分子机制被引量：2
- 2015年
- 目的探讨固醇调节元件结合蛋白lc（SREBP—lc）抑制骨骼肌细胞胰岛素受体底物1（IRS-1）基因转录的具体分子机制。方法将SREBP-1c表达质粒、IRS-1启动子荧光素酶报告质粒及海肾质粒胸腺嘧啶核苷激酶启动子{pRL-TK）采用Lipofectamin2000共转染L6细胞，以pCDNA3．1空质粒为对照，36h后裂解细胞按双荧光素酶报告基因检测试剂盒说明书检测荧光素酶。将表达SREBP-1c的腺病毒感染L6肌管细胞，以表达绿色荧光蛋白（GFP）的腺病毒作对照，感染48h后收取细胞抽提核蛋白，进行凝胶迁移滞后实验（EMSA）和染色质免疫共沉淀（CHIP）实验，分析SREBP-1c转录因子与IRS-1启动子区域的相互作用。组间比较采用双因素方差分析。结果荧光素酶截断实验显示IRS．1启动子区域-450～-210bp为SREBP-1c的作用范围。序列分析显示IRS-1启动子-302～-292bp处存在SREBP-1c潜在的结合序列GCCTCCCGAG，该序列突变为TGTYAAATTA，荧光素酶实验显示SREBP．1c抑制野生型IRS-1启动子活性，而对突变型IRS-1启动子无抑制作用（分别为7．03±1．28比19．09±2．45、3．55±1．68比3．96±1．09，F=114．437、0．251，均P〉0．05）；EMSA结果显示SREBP-lc蛋白与野生型探针直接结合，而不被突变探针所竞争。CHIP结果显示SREBP-1c可直接结合到IRS-1的启动子区域，定量分析显示PA组细胞SREBP-1c结合到IRS．1启动子区域的量为对照组的2倍，SREBP-1c过表达组为GFP组的5倍（分别为2．15±0．03比1．07＋±0．24，5．48±1．28比0．86±0．19，t=6．8775、5．495，均P〈0．05）。结论SREBP-1c通过直接结合到IRS．1启动子区域的非典型固醇反应元件序列抑制IRS-1基因转录表达，继而影响胰岛素信号通路的转导。
- 吴文君时俊锋汤孙寅炎陈莹莹尹雯雯朱大龙毕艳
- 关键词：固醇调节元件结合蛋白1C棕榈酸骨骼肌胰岛素受体底物1分子机制
- 艾塞那肽对糖尿病大鼠脂肪细胞脂代谢的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察比较艾塞那肽和甘精胰岛素治疗对糖尿病大鼠脂肪细胞脂代谢的影响。方法7～8周龄雄性sD大鼠，体重180～200g，按随机数字表法分为2组（对照组8只，高脂组30只）：对照组仅予普通饮食，高脂组予高脂喂养5周，联合小剂量链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病SD大鼠模型，3d后将成模大鼠随机分为3组进行不同干预：对照组和糖尿病组给予生理盐水，另外2组分别予艾塞那肽或甘精胰岛素干预4周。通过Westernblotting和实时定量聚合酶链式反应检测大鼠附睾周围脂肪组织中脂肪细胞脂质合成酶如磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）、脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶-1（ACC-1）蛋白及基因表达，以及脂质水解相关酶如脂肪组织甘油三酯脂酶（ATGL）、色素上皮衍生因子（PEDF）基因表达。多组定量资料间比较采用方差分析，两两比较采用最小差异显著性分析。结果与对照组比较，糖尿病大鼠脂肪细胞脂质合成酶PEPCK和FAS基因及蛋白表达降低，ACC-1基因水平降低，脂质水解相关蛋白ATGL和PEDF基因表达升高（均P〈0．05）。艾塞那肽及甘精胰岛素治疗后，PEPCK、FAS基因及蛋白水平升高，ACC-1基因表达增加，ATGL、PEDF基因表达降低（均P〈0．05）。与甘精胰岛素组比较，艾塞那肽组PEPCK、FAS基因[艾塞那肽与甘精胰岛素：PEPCKmRNA（1．68±0．45）VS（1．15±0．24）；FASmRNA（7．12±0．13）vs（1．18±0．16）]及蛋白[PEPCK（1．11±0．08）vs（0．87±0．08）；FAS（1．95±0．10）VS（0．99±0．08）]水平明显升高（t=2．525、69．374、5．312、18．670，均P〈0．05）。结论艾塞那肽可促进脂肪组织甘油三酯合成、减少脂质分解，其作用强于甘精胰岛素。
- 陈莹莹房其军李晓倩沈山梅汤孙寅焱张红孙婧尹雯雯朱大龙毕艳
- 关键词：糖尿病胰岛素脂肪细胞
- SREBP-1c对骨骼肌细胞IRS-1表达调控的影响
- 目的：探讨固醇调节元件结合蛋白-1c /(SREBP-1c/)对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物1/(IRS-1/)表达调控的影响。
方法：采用酶联合消化法取2-3d SPF级雄性SD大鼠原代骨骼肌细胞,将原代细胞分为...
- 尹雯雯
- 关键词：固醇调节元件结合蛋白-1C胰岛素受体底物1骨骼肌细胞棕榈酸
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