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田宇: 作品数：12 被引量：5H指数：1; 供职机构：徐州医学院附属医院更多>>; 发文基金：江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学更多>>

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特异性敲除T细胞中Blimp-1对小鼠脾淋巴细胞数量及功能的影响: 2015年; 目的研究B淋巴细胞诱导成熟蛋白（Blimp-1）对脾脏淋巴细胞数量及功能的影响。方法实验小鼠分为T细胞Blimp-1敲除组（Blimp-1CKO）和对照组（wild-type，WT）。获取小鼠脾脏单个核细胞并计数，流式细胞仪检测T、B淋巴细胞各亚群细胞数、比例及其分泌的细胞因子、表面受体CCR7、S1P1表达。结果与对照组小鼠相比，Blimp-1CKO小鼠脾脏单个核细胞数，T、B淋巴细胞总数及CD4^＋T、CD8^＋T、CD19^＋CD5^＋CD1d^＋B细胞绝对数均明显升高（P〈0．05），Blimp-1CKO小鼠CD19^＋CD5^＋B细胞的数量和比例均显著上升（P〈0．01）。Blimp-1CKO组CD4^＋T和CD8^＋T细胞分泌的IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-2水平较对照组增高（P〈0．05）。Blimp-1CKO小鼠CD8^T细胞表面的CCR7表达较对照组降低（P〈0．05），而两者S1P1表达水平差异无统计学意义。结论Blimp-1对T细胞的数量、亚群平衡、表型、功能的维持都具有重要作用，特异性敲除T细胞Blimp-1对淋巴细胞的影响不仅局限在T细胞，还影响到B细胞亚群。; 阮素红赵恺田宇袁姝姝夏洁云陈翀徐开林; 关键词：T淋巴细胞 B淋巴细胞

60Coγ射线全身致死剂量照射对小鼠脾脏和淋巴结T细胞亚群表面免疫分子表达水平的影响: 目的:探讨小鼠接受60Coγ射线致死剂量全身照射(TBI)后,脾脏和肠系膜淋巴结T细胞活化分子和黏附分子表达水平的变化。方法:SPF级雄性BALB/c小鼠完全随机分为TBI组和未照射对照组,TBI组予60Coγ放射源一次...; 赵恺田宇赵冬梅尹玲玲阮素红徐开林; 关键词：TBI T细胞; 文献传递

60Coγ射线全身致死剂量照射对小鼠脾脏和淋巴结T细胞亚群表面免疫分子表达水平的影响: 目的：探讨小鼠接受60Coγ射线致死剂量全身照射(TBI)后,脾脏和肠系膜淋巴结T细胞活化分子和黏附分子表达水平的变化.方法：SPF级雄性BALB/c小鼠完全随机分为TBI组和未照射对照组,TBI组予60Coγ放射源一次...; 赵恺田宇赵冬梅尹玲玲阮素红徐开林; 关键词：TBI T细胞

特异性敲除T细胞中Blimp-1基因对小鼠脾淋巴细胞数量及功能的影响: 目的:研究Blimp-1基因对脾脏淋巴细胞数量及功能的的影响.方法:将实验小鼠随机分为T细胞Blimp-1基因敲除组(Blimp-1-/-组)和正常对照组(Normal组).获取小鼠脾脏单个核细胞并计数,流式细胞仪检测T...; 阮素红赵恺田宇袁妹妹夏洁云陈翀徐开林

60Coγ射线全身致死剂量照射对小鼠脾脏和淋巴结T细胞亚群表面免疫分子表达水平的影响: 赵恺田宇赵冬梅尹玲玲阮素红徐开林

^60Coγ射线致死剂量全身照射对小鼠脾脏和肠系膜淋巴结T细胞亚群表面免疫分子表达水平的影响被引量：1: 2016年; 目的探讨小鼠接受^60Coγ射线致死剂量全身照射（TBI）后，脾脏和肠系膜淋巴结T细胞活化分子和黏附分子表达水平的变化。方法于2012年7月至10月，选择12只无特定病原体（SPF）级雄性BALB／c小鼠为研究对象。研究对象纳入标准：周龄为10～12周龄，体重为20-25g。按照完全随机法将其分为TBI组（接受致死剂量TBI）和对照组（未照射），每组6只。TBI组予^60Coγ放射源一次性照射（剂量率为0．66Gy／min，总剂量为7．5Gy）。于照射后第7天，脊椎离断处死两组小鼠，无菌条件下，取其脾脏、肠系膜淋巴结，研磨后采用密度梯度离心法收集单个核细胞。采用流式细胞术检测两组小鼠脾脏和肠系膜淋巴结中，CD4^＋T，CD8^＋T，辅助性T细胞（Th）1及细胞毒性T细胞（Tc）1细胞表面CD44和CD62L的表达水平。并采用统计学方法比较两组小鼠上述免疫分子表达水平。结果照射后第7天，TBI组小鼠脾脏和肠系膜淋巴结CD44^＋CD4^＋T细胞比例为（88．1±1．1）％和（76．7±1．8）%，均低于对照组的（95．0±1．1）％和（92．8±1．4）％，且差异有统计学意义（t=-11．01、-17．82，P〈0．05）；而CD44^＋CD8^＋T细胞的比例分别为（99．0±0．3）和（92．5±1．7）％，均高于对照组的（88．7±0．8）％和（83．4±1．6）％，差异亦有统计学意义（t=31．15、9．54，P〈0．05）。TBI组小鼠肠系膜淋巴结CD44^＋Thl比例为（4．1±0．4）％，高于对照组的（1．0士0．2）O，且差异有统计学意义（t=14．78，P〈0．05）；而两组小鼠脾脏CD44^＋Th1比例比较，差异无统计学意义（t=-0．93，P〉0．05）。TBI组小鼠脾脏和肠系膜淋巴结CD44^＋Tc1比例分别为（65．5士4．6）O和（26．6±2．8）％，较对照组的（41．8±1．5）％和（18．7±1．3）％增高，且差异有统计学意义（t=9．97、6．51，P〈0．05）。TBI组小鼠的脾脏和肠; 田宇赵冬梅尹玲玲阮素红赵恺徐开林; 关键词：全身照射 CD8阳性T淋巴细胞 CD4阳性T淋巴细胞

抗人IL1RAP单克隆抗体重、轻链基因的克隆及重组嵌合受体的构建被引量：1: 2015年; 目的:克隆抗人IL1RAP(IL-1 receptor accessory protein)单克隆抗体(McAb)可变区基因及构建嵌合抗原受体(CAR)重组质粒。方法:采用RACE、重叠延伸PCR技术,从3H6E10、10D8A7杂交瘤细胞总RNA中克隆扩增IL1RAP McAb的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)段DNA,并连接成IL1RAP特异性单链抗体可变区基因片段(scFv)。将hCD8α跨膜段、hCD137胞内段、hTCRζ链、hCD8α引导肽(Signal peptide)、scFv-anti-IL1RAP连入载体LV-Lac,并与辅助载体pMD2.G、psPAX2共同转染293FT细胞,包装获得病毒颗粒。结果:获得了两种抗人IL1RAP McAb的VH及VL基因,3H6E10 VH和VL基因全长402 bp和393 bp,可分别编码134、131个氨基酸;10D8A7 VH和VL基因全长423 bp和381 bp,可分别编码141、127个氨基酸。构建重组表达载体LV-3H6E10 scFv-ICD、LV-10D8A7 scFv-ICD(ICD:CD8α跨膜段-CD137胞内段-TCRζ链)后,经测序证实目的片段序列正确。重组质粒转染293FT细胞获得慢病毒颗粒。结论:本实验成功构建了能特异性结合人IL1RAP蛋白的嵌合受体,为以后制备IL1RAP-CAR杀伤性T细胞疫苗打下基础。; 尹玲玲阮素红田宇赵恺徐开林; 关键词：基因克隆重组质粒

不同方法转染人外周血淋巴细胞效率比较被引量：1: 2015年; 目的采用不同方法转染原代人外周血淋巴细胞,以寻找一种简便、高效的淋巴细胞转染方法.方法采用聚蔗糖-泛影葡胺（Ficoll-Hypaque）分离法从健康人外周血中分离出单个核细胞,锥虫蓝检测细胞存活率.单个核细胞在6孔板内培养2h后吸出悬浮的淋巴细胞至24孔板中继续培养.分别采用电穿孔介导载体质粒（PEGFP-N1）转染活化的淋巴细胞、慢病毒（LVGFP）单次感染及慢病毒重复感染方法分别转染静息或活化的淋巴细胞,在荧光显微镜下观察感染后不同时间点细胞绿色荧光蛋白（GFP）表达情况,同时收集细胞用流式细胞术检测GFP阳性细胞的比例,比较不同条件下慢病毒感染淋巴细胞的效率.结果通过Ficoll-Hypaque分离的单个核细胞的纯度可达95％,其活细胞率＞95％,获得的淋巴细胞占90％～ 95％,形态较均一.“2 100V、10 ms、1个脉冲”电穿孔淋巴细胞后可见散在荧光,但随着时间推移荧光逐渐减弱,72 h基本看不到荧光.慢病毒单次感染静息期淋巴细胞48 h后无绿色荧光,流式细胞术检测GFP阳性细胞＜1％.慢病毒单次感染增殖期淋巴细胞可见绿色荧光,且随着病毒浓度增大,荧光逐渐增强,GFP阳性细胞在1％～5％之间.慢病毒重复感染增殖期淋巴细胞可见较强绿色荧光,GFP阳性细胞在5％～10％左右,随着时间推移荧光逐渐增强.结论慢病毒重复感染增殖期淋巴细胞,能有效地将外源基因导入淋巴细胞内稳定表达.; 尹玲玲阮素红田宇赵恺徐开林; 关键词：淋巴细胞转染电穿孔慢病毒

IL1RAP-嵌合受体T细胞疫苗抗慢性髓系白血病干细胞的研究: 目的:检测慢性髓系白血病干细胞表而标志蛋白IL1RAP(IL-1 receptor accessory protein)与其疾病分期的关系;制备抗人IL1RAP特异性嵌合抗原受体(CAR)T细胞疫苗,检测CAR-T细胞疫...; 尹玲玲阮素红田宇徐开林赵恺

IL1RAP单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 2015年; 目的:制备针对白血病干细胞(LSC)表面标志蛋白IL1RAP(IL-1 receptor accessory protein)的特异性单克隆抗体并对其进行鉴定。方法:杂交瘤细胞3H6E10、10D8A7种植BALB/c小鼠腹腔,收获腹水,纯化后得到特异性抗人IL1RAP的单克隆抗体。分别应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Nondenaturing-PAGE)、ELISA和Western blot法对纯化单克隆抗体分别进行抗体纯度、效价和敏感性检测。结果:获得了两种IL1RAP纯化单克隆抗体,命名为3H6E10 Mc Ab和10D8A7 Mc Ab,其纯度分别为95%和94%;两种纯化的单克隆抗体效价为1∶81000,且能特异性识别IL1RAP纯化蛋白、正常人及白血病病人的细胞内源性蛋白。结论:本研究成功制备了能特异性结合人IL1RAP的纯化单克隆抗体,为将来有效清除体内LSC提供了新途径。; 尹玲玲阮素红田宇徐开林赵恺; 关键词：单克隆抗体白血病干细胞

田宇

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