冯强
- 作品数：25 被引量：43H指数：5
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
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- 重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的表达、纯化及黏膜佐剂活性研究被引量：6
- 2005年
- 目的 对大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和黏膜佐剂活性分析。方法 应用PCR技术从产肠毒素大肠杆菌基因组中扩增出不耐热肠毒素B基因,将此构建于原核表达载体pET 11C,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,然后采用D(+) immobilizedgalactose亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。以纯化后重组LTB为佐剂,与幽门螺杆菌重组尿素酶B亚单位蛋白(rUreB)共同口服和滴鼻免疫BALB c小鼠,分析重组LTB的黏膜佐剂活性。结果 PCR扩增出390 bp LTB基因,与GenBank公布的核苷酸序列的相似性为99.5%。重组LTB蛋白的表达率为6%,以胞周质分泌形式表达,经亲和层析后蛋白纯度大于95%。该重组蛋白保持了与神经节苷脂GM1结合的生物学活性和良好的免疫原性及免疫反应性。动物试验表明,重组LTB与rUreB抗原共同口服和滴鼻免疫小鼠后的特异性血清IgG及鼻腔、气管、胃黏膜和小肠黏膜sIgA水平显著高于单独rUreB抗原免疫组(P<0.05)。结论 所获得的重组LTB具有较好的黏膜佐剂活性,为其在黏膜疫苗中的应用奠定基础。
- 吴超冯强曾韦锟郭桐生高志刚邹全明
- 关键词：黏膜佐剂活性研究BL21(DE3)产肠毒素大肠杆菌神经节苷脂GM1LTB基因
- 脉动流场中离体血管段长度与内皮细胞内皮素代谢相关——内皮细胞膜张应力累加效应实验研究III
- 2002年
- 用离体血管灌流实验验证冯元桢等关于血管内皮细胞的膜张应力逆血流方向累加的理论分析。长度分别为 11、2 1cm的离体血管段内皮细胞分别置于平均切应力均为 0 .12 N / m2 的脉动流环境中剪切 42 h。11cm处理的内皮素 - 1( ET- 1)平均分泌速率 ( 16.93± 0 .89pg/ cm2 · h)显著低于 2 1cm处理 ( 2 6.13± 1.79pg/ cm2 · h) ,差异比率为 1∶ 1.5。脉动流作用引起的 ET- 1平均分泌率显著高于定常流的作用。总体上表明在脉动流条件下 ,血管段长度与其血管内皮细胞 ET- 1代谢 (分泌量 )间有密切的相关关系。
- 王贵学胥成浩蔡绍皙冯强王远亮
- 关键词：内皮素生物力学
- 鲍曼不动杆菌锌依赖寡肽A1S_1610蛋白及其制备方法和应用
- 本发明涉及一种鲍曼不动杆菌A1S_1610蛋白以及包含蛋白的载体、工程菌、组合物或试剂盒，以及该蛋白的制备方法和应用。本发明的A1S_1610蛋白从未用于重组亚单位疫苗领域，本发明的A1S_1610蛋白能够有效激发机体引...
- 曾浩邹全明冯强石云敬海明赵莉群
- 文献传递
- 三种LT突变体的幽门螺杆菌疫苗黏膜免疫佐剂效应比较
- 2007年
- 目的探讨3种大肠杆菌不耐热肠毒素突变体在辅佐幽门螺杆菌候选疫苗尿素酶B亚单位(rUreB)中的佐剂效应。方法各组Balb/c小鼠分别用PBS、rUreB、rUreB+LTK63、rUreB+LTR72、rUreB+LTKR及rUreB+CT进行4次口服免疫。ELISA检测胃、肠、气管冲洗液sIgA以及血清IgG亚类(IgG1,IgG2a);RT-PCR差异显示T淋巴细胞IFN-γ、IL-4 mRNA;ELISPOT检测肠派伊尔氏结IgA、IgG抗体分泌细胞。结果①各rUREB加突变体佐剂组在胃、肠、气管的sIgA和血清IgG1、IgG2a水平显著高于PBS组和单独rUreB组(P<0.01);②抗原刺激后取自各rUreB加突变体佐剂组T淋巴细胞表达的IFN-γ、IL-4 mRNA显著高于PBS组和rUreB组(P<0.01);③各rUreB加突变体佐剂组小肠派伊尔氏结抗体分泌细胞数都显著高于PBS组和单独rUreB组(P<0.01)。结论3种突变体都能辅佐rUreB在小鼠上产生特异的抗rUreB的抗体,且3种突变体诱导的免疫应答可能都是Th1/Th2型。LTR72的佐剂效应强于LTK63及LTKR。LTKR无毒,其稳定性高于LTR72,佐剂活性高于LTK63,是一个有希望的新型黏膜免疫佐剂。
- 冯强邹全明郭桐生
- 关键词：幽门螺杆菌佐剂尿素酶B亚单位
- LT质粒的新法提取及无毒突变体LTS63K的构建和序列分析被引量：5
- 2002年
- 目的 获取野生型产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素 (LT)基因、构建LTS63K突变体并进行序列分析。方法 用改进的细菌基因组提取含野生型LT基因质粒 ,用PCR技术扩增LT的DNA ,并亚克隆至pMD1 8 T中进行点突变和序列分析。结果 从野生型大肠杆菌提取大质粒的新法可行 ,所克隆的LT基因与GenBank公布的完全一致 ,点突变正确。
- 冯强邹全明蔡绍皙毛旭虎冉向阳
- 大肠杆菌不耐热肠毒素的表达及其纯化保存策略被引量：11
- 2003年
- 编码完整大肠杆菌不耐热肠毒素 (LT)的基因被引入pET11c形成pET11 LT ,该质粒在E .coliBL2 1(DE3)中得到较高效率的表达 ,约 4 6mg L。用D(+) Immobilizedgalactose柱可以在很宽的pH范围 (pH7 3～ 10 4 )内用多种方法对LT进行纯化且保持其结构完整。溶于TEAN(pH7 3)或碳酸盐缓冲液 (pH10 4 )的LT ,冻干后保存于 4℃ ,可长久保持其完整结构 ,此为保存LT的较好策略。与GM1结合实验、CHO细胞及Patent mouse毒性检测实验证明纯化的LT具有生物学活性。
- 冯强蔡绍皙杨珺罗萍张卫军邹全明
- 关键词：大肠杆菌不耐热肠毒素纯化
- 鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S1969的克隆表达及免疫保护机制初步研究被引量：3
- 2016年
- 目的制备鲍曼不动杆菌(Ab)A1S_1969重组蛋白,利用小鼠全身脓毒血症感染致死模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,探讨可能的免疫保护机制,为筛选Ab疫苗有效的保护性抗原奠定基础。方法基于反向疫苗学技术筛选出Ab外膜蛋白A1S_1969,利用p GEX-6P-2质粒构建GST融合表达载体,重组表达的A1S_1969蛋白经亲和层析高效纯化后与铝佐剂吸附制备而成重组A1S_1969免疫原;采用Balb/c小鼠全身感染模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,通过ELISA检测免疫小鼠Ig G抗体滴度和Ig G抗体亚型。制备A1S_1969重组蛋白抗血清进行体外调理吞噬杀菌实验。结果成功克隆、表达并纯化A1S_1969重组蛋白,纯度>90%。动物免疫保护结果显示A1S_1969重组蛋白组小鼠存活率为55.6%,对照组小鼠存活率为20.0%(P<0.05);末次免疫7 d后小鼠体内总Ig G抗体滴度为1∶64 000,以Ig G1亚型为主;体外调理吞噬杀菌实验结果显示A1S_1969特异性血清抗体可以增强中性粒细胞对Ab的杀菌作用,实验组杀菌率可达55%,对照组无杀菌活性。结论 A1S_1969重组蛋白可显著提高全身脓毒血症感染致死模型小鼠的存活率,具有良好的免疫保护效果。
- 蔡昌芝冯强杨赟魏振波纪永军牟道华敬海明邹全明曾浩
- 关键词：鲍曼不动杆菌基因工程疫苗克隆表达免疫保护
- 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的分泌表达与性质鉴定被引量：10
- 2004年
- 目的 较高效率分泌表达大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位并鉴定其性质。方法 将编码成熟大肠杆菌不耐热肠毒素 (LTB)的基因引入pET2 2b(+)并转化E .coliBL2 1(DE3) ;重组工程菌在改良M9 CAA培养基内进行表达 ;对分泌表达的LTB进行纯化后进行神经节苷脂 (GM1)结合活性、免疫原性与黏膜免疫佐剂活性的鉴定。结果 LTB既能分泌表达至胞周质又能以包含体形式表达 ,两者都与pelB信号肽准确分离。纯化出的LTB具有正常的GM1结合活性、免疫原性及黏膜免疫佐剂活性。结论 pET2 2b(+)质粒的pelB信号肽可使LTB以较高效率分泌表达。
- 冯强杨珺张卫军郭桐生刘开云邹全明
- 关键词：分泌表达
- 盐酸氨基乙酰丙酸的合成研究
- 2006年
- 盐酸氨基乙酰丙酸是一种光敏剂,它是光动力治疗药物,广泛用于一些癌症疾病的治疗。本文选择以琥珀酸酰氯单乙酯为起始原料,经氰化、还原、水解等反应合成了盐酸氨基乙酰丙酸。参照该路线,通过条件试验及计算机数据处理分析,研究了合成盐酸氨基乙酰丙酸的条件,得到了水解反应的最佳工艺条件,并讨论了影响产品收率的主要因素。
- 蔡其勇冯强
- 一种大肠杆菌不耐热肠毒素新型突变体及其制备方法
- 本发明涉及一种大肠杆菌不耐热肠毒素新型突变体及其制备方法，可作为疫苗中的免疫原性成分，例如抗肠毒素引起的腹泻的疫苗或作为其他疫苗的佐剂。该突变体通过重组DNA技术从编码野生型大肠杆菌不耐热肠毒素的基因获得，其特征在于该蛋...
- 邹全明冯强杨珺罗萍张卫军毛旭虎
- 文献传递
