刘真
- 作品数：20 被引量：47H指数：4
- 供职机构：广州医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学社会学更多>>
- 2D-PAGE电泳和质谱分析筛选鼻咽癌中NESG1调控蛋白被引量：2
- 2012年
- [目的]利用蛋白质组学筛选抑癌候选基因NESG1在鼻咽癌中可能调控蛋白。[方法]提取NESG1稳定高表达的鼻咽癌3D8和对照鼻咽癌C6细胞蛋白,并采用双向凝胶电泳(2D-PAGE)技术进行有效分离,图像扫描后获得高分辨率的2D-PAGE图谱。选用差异蛋白质组学技术筛选差异蛋白位点,然后用肽质量指纹谱(PMF)和数据库检索技术给予鉴定。荧光定量PCR和Western Blot验证差异基因表达水平。[结果]质谱分析显示,PKM2、ERO1L和BCAS2在NESG1过表达的3D8细胞中表达下调,其下调倍数分别为-5.25,-3.65和-4.52倍。荧光定量PCR在mRNA水平验证了PKM2、ERO1L和BCAS2(-3.65、-3.42和-4.55倍)以及Western Blot在蛋白水平验证了PKM2和ERO1L蛋白在3D8细胞中表达下调。[结论]PKM2、ERO1L和BCAS2可能是NESG1调控的靶基因,参与了NESG1介导的鼻咽癌生长抑制。
- 方唯意江庆萍刘真
- 关键词：鼻咽癌蛋白质组学双向凝胶电泳
- 慢病毒介导的siRNA靶向干扰EIF4G1鼻咽癌稳定细胞株的建立被引量：8
- 2009年
- 目的检测人真核翻译起始因子4G1(EIF4G1)基因在8株鼻咽癌细胞中的差异表达,寻找最高表达的细胞株。构建EIF4G1基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,建立稳定干扰EIF4G1表达的鼻咽癌细胞株,测定干扰效率。方法应用荧光定量PCR检测EIF4G1mRNA在鼻咽癌细胞株5-8F、6-10B、C666-1、CNE1、CNE2、HNE1、HONE1、SUNE1表达水平。构建重组靶向EIF4G1shRNA慢病毒表达质粒pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA。用293FT细胞包装后产生的成熟慢病毒颗粒感染5-8F细胞,经杀稻瘟菌素筛选后,建立稳定表达siRNA的5-8F鼻咽癌细胞株。最后荧光定量PCR检测干扰效率。结果在8个鼻咽癌细胞株中,EIF4G1显示在5-8F细胞株中表达最高。PCR和测序验证pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA重组质粒构建成功;经293FT细胞病毒包装,感染5-8F细胞后,与阴性对照组和未干扰组相比可明显抑制EIF4G1mRNA水平EIF4G1表达。结论成功构建了pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA慢病毒重组质粒,建立了稳定靶向干扰EIF4G1表达的siRNA5-8F鼻咽癌细胞株。
- 涂露霞方唯意刘真李欣何英谢思明姚开泰
- 关键词：慢病毒重组质粒鼻咽癌细胞
- 人NESG1基因慢病毒载体的构建及其在293FT细胞中的表达被引量：6
- 2011年
- 目的克隆人NESG1基因,构建与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的慢病毒载体pGC-FU-NESG1-EGFP,包装慢病毒,感染293FT细胞并进行鉴定。方法以NESG1全长克隆为模板扩增其编码框序列,通过限制性内切酶AgeI酶切、T4 DNA连接酶连接,将NESG1插入慢病毒载体pGC-FU-EGFP,构建pGC-FU-NESG1-EGFP重组载体。质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经PCR及测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒三质粒系统共转染人胚肾细胞系293FT,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。病毒感染293FT细胞,荧光显微镜下观察感染效率,Western blot方法检测NESG1-EGFP融合蛋白的表达情况。结果成功构建慢病毒表达载体pGC-FU-NESG1-EGFP,三质粒共转染293FT细胞后可见大量绿色荧光;浓缩病毒后测定其滴度为2×107 TU/ml;以复感染系数MOI为1感染293FT细胞,感染效率在90%以上。Western blot证实细胞表达NESG1。结论成功构建NESG1慢病毒表达载体,包装得到高滴度慢病毒,为后续感染鼻咽癌细胞,探索其在鼻咽癌发生和发展中的作用奠定了基础。
- 刘真甄艳于晓黎江庆萍龙捷方唯意
- 关键词：慢病毒增强型绿色荧光蛋白鼻咽癌
- CASP8在鼻咽癌中的表达及临床意义被引量：1
- 2012年
- 目的探讨CASP8在鼻咽癌中的表达及临床意义。方法利用基因芯片比较了8组鼻咽癌组织与混合的非癌鼻咽组织之间的差异表达基因。荧光定量PCR和免疫组化鉴定CASP8基因表达结果的可靠性,并分析CASP8在鼻咽癌中的表达与临床参数之间的相关性。结果荧光定量PCR确证CASP8 mRNA在鼻咽癌组织中表达下调(P<0.0001),与芯片结果相一致。免疫组化结果显示,与非癌鼻咽组织相比,CASP8蛋白在鼻咽癌组织中表达明显下调(P=0.02),且下调的表达与淋巴结转移(P=0.002)及临床分期(P=0.026)呈负相关。结论 CASP8表达下调作为不利因素促进了鼻咽癌的发生发展。
- 方唯意张千兵刘真江庆萍
- 关键词：鼻咽癌基因芯片免疫组化
- Cyc1慢病毒干扰载体的构建及在鼻咽癌细胞中干扰效率检测被引量：1
- 2010年
- 目的检测Cyc1在鼻咽癌中的表达。构建稳定干扰Cyc1慢病毒载体及检测其在鼻咽癌细胞中的干扰效率。方法应用基因芯片技术检测Cyc1基因在鼻咽癌组织中的表达。Real-time PCR确证Cyc1基因在鼻咽癌组织和细胞中高表达。构建重组靶向Cyc1的shRNA慢病毒质粒pLentiU6/Cyc1-shRNA。建立稳定干扰Cyc1基因的鼻咽癌细胞系,荧光定量PCR检测干扰效率。结果基因芯片检测显示,Cyc1基因在鼻咽癌组织中高表达。qRT-PCR确证了基因芯片结果的可靠性。在8个鼻咽癌细胞株中,Cyc1基因基本上都显示了高表达,其中最高的为鼻咽癌5-8F细胞。测序验证pLentiU6/Cyc1-shRNA重组质粒构建成功。重组质粒能明显稳定地抑制Cyc1基因在鼻咽癌细胞中的表达。结论 Cyc1基因在鼻咽癌中高表达。构建的靶向Cyc1基因的慢病毒载体能明显抑制其表达。这为研究Cyc1基因在鼻咽癌中的功能及分子机制奠定了基础。
- 刘真王红艳龙捷方唯意
- 关键词：重组质粒RNA干扰鼻咽癌细胞
- CDK4蛋白在胞浆中的表达与肺癌临床病理学特征及预后的关系被引量：4
- 2012年
- 目的评估CDK4蛋白在胞浆中表达与肺癌患者临床病理学特征的关系。方法利用免疫组化和统计学方法分析CDK4蛋白在胞浆中表达以及与肺癌患者临床病理参数及预后之间的相关性。结果与正常肺组织相比,CDK4蛋白在肺癌胞浆中的表达并没有明显增高(P=1.000)。然而,在肺癌组织中,CDK4表达上调正向相关于患者的临床分期和淋巴结转移(P=0.001,P=0.00 1)。预后分析表明,CDK4蛋白在胞浆表达越高,患者生存时间越短。多变量分析显示,CDK4在胞浆中过表达是预测肺癌患者预后不利因素(P<0.001)。结论 CDK4蛋白在细胞胞浆中过表达也促进肺癌的发病过程,且其是预测肺癌患者预后的不利因子。
- 张月周颖刘真方唯意
- 关键词：CDK4蛋白肺癌预后因子
- 鼻咽癌候选侵袭和转移相关基因的筛选被引量：1
- 2011年
- 目的筛选影响鼻咽癌侵袭和转移能力的相关基因。方法利用cDNA基因芯片,比较高转移鼻咽癌细胞株5-8F和非转移鼻咽癌细胞株6-10B之间的差异表达基因,并利用在线Milano程序筛选鼻咽癌侵袭和转移相关基因,GOstat分析这些基因功能,最后荧光定量PCR鉴定差异表达基因。结果芯片分析结果显示,鼻咽癌细胞株5-8F与6-10B之间共有200多个差异表达基因。基于Milano程序分析后,发现与侵袭和转移能力相关的基因有33个,其中27个上调,6个下调。GOstat分析显示,这些基因参与了细胞移动、调节凋亡、细胞黏附等。结论经在线Milano程序分析鉴定的鼻咽癌5-8F和6-10B细胞株之间的这33个差异表达基因可能参与了鼻咽癌的侵袭和转移。
- 刘真方唯意
- 关键词：鼻咽癌基因芯片
- EBV全基因组基因芯片构建与初步验证被引量：1
- 2007年
- 目的:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)高发于中国南方,是一种恶性度较高的肿瘤,与EB病毒关系非常密切。本研究利用前期已经设计和克隆好的EB病毒(EBV)已知和预计的编码基因作为cDNA探针,用于研制EBV微阵列。利用能高产EBV病毒颗粒的B95-8细胞作为检测对象,观测基因芯片检测的效果,已确定是否将来用于临床检测。方法:87个EBV基因探针通过一对设计于载体多克隆两端的引物进行PCR扩增。产物纯化后,探针被打印在Corning玻片上。通过与Cy3标记的B95-8细胞cDNA进行杂交反应,检测B95-8细胞内EBV基因表达。RT-PCR验证检测。结果:利用构建的EBV芯片,成功地在B95-8细胞中检测到了几乎所有的EBV潜伏基因的表达,随后RT-PCR验证了该结果。结论:我们成功地构建了EBV微阵列,且设计的EBV探针检测是有效的。但EBV微阵列是否可以用于鼻咽癌标本的检测还有待进一步证实。
- 方唯意刘真李欣刘求真刘腾飞姚开泰
- 关键词：NPC
- 兔VX2肝癌放疗后MR扩散加权成像与细胞凋亡的比较研究
- 目的探讨VX2肝癌三维立体定向适形放疗后的DWI成像特征、肿瘤细胞凋亡情况及两者的相关性。
方法成功制成60只新西兰大白兔肝癌模型。观察肿瘤直径≥1.0cm时,采用随机数表法抽取40只瘤兔行三维立体定向适形单次放...
- 刘真
- 关键词：肝癌扩散加权成像放疗动物模型
- 文献传递
- TGFBR2表达下调可能是鼻咽癌的恶性生物标志被引量：4
- 2008年
- 目的该研究拟探索在鼻咽癌发病过程中起着重要作用的关键癌基因或抑癌基因。方法利用基因芯片比较了混合的鼻咽癌细胞株与混合的非癌人鼻咽组织之间的差异表达基因。利用MILANO在线分析程序,寻找已知的癌基因和抑癌基因。免疫组化分析鉴定重要癌基因或抑癌基因表达结果的可靠性。结果MI-NANO分析所有差异表达基因后发现,在鼻咽癌细胞中表达下调比较明显的TGFBR2基因是一个重要的抑癌基因,该基因在TGFβ抑制性信号通路中起着重要的作用,参与了许多肿瘤的发病过程,而且该基因在鼻咽癌的研究中尚未见报道。在免疫组化共检测了56个非癌鼻咽组织和49个鼻咽癌组织后,Mann-Whitney test统计分析发现,与非癌鼻咽组织相比,TGFBR2在鼻咽癌组织中表达明显下调(P<0.001)。结论TGFBR2参与了鼻咽癌发病过程,其表达下调可能促进了鼻咽癌的发生发展,但是否与转移、预后及复发等临床参数相关还有待进一步研究。
- 方唯意江庆萍刘真李欣刘求真王爽谢思明鲁娟刘腾飞谢卫兵涂露霞黄静姚开泰
- 关键词：鼻咽癌基因芯片免疫组化
