熊丽娟
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗FKBP52人源单链抗体的筛选及其完整抗体真核表达载体的构建被引量：1
- 2015年
- 目的:从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗FKBP52人源单链抗体,并进一步构建其真核表达载体。方法:以FKBP52为抗原,通过吸附、扩增、洗脱等过程,从大容量天然噬菌体抗体库中筛选特异性单链抗体,采用ELISA方法进行特异性测定,采用生物膜干涉方法测定亲和力,再经同源重组方法构建完整抗体的真核表达载体,通过PCR及序列测定对构建的载体进行验证。结果:经过4轮筛选,获得15种与FKBP52特异结合的噬菌体抗体,其中7种得到可溶性表达;序列分析表明,7种单链抗体重链可变区分属VHⅠ、VHⅢ和VHⅣ亚群,轻链可变区分属VκⅠ、VκⅢ和VλⅠ亚群;特异性结合活性较好的4株抗体的亲和常数分别为9.723×10-8、3.500×10-8、1.203×10-8和5.323×10-8;将亲和力较好的一株单链抗体轻、重链可变区基因分别拼接到含有人κ及Ig G1恒定区基因的p CMV-L和p CMV-H真核表达载体中。结论:筛选获得多株人源抗FKBP52单链抗体,并构建了完整抗体的真核表达载体。
- 丁立熊丽娟王欲晓吴成林付凯飞周丽君
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体真核表达载体
- 一种抗HER2双特异性抗体及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种抗HER2双特异性抗体及其制备方法与应用。本发明公开的一种抗体，由两个相同的半分子组成，其中每个半分子由通过二硫键连接的一条轻链和一条重链组成，所述两个半分子的两条重链之间通过二硫键连接；所述重链的氨基酸...
- 周丽君王欲晓熊丽娟付凯飞
- 文献传递
- 利用大型天然噬菌体抗体库筛选抗死亡受体5人源抗体被引量：1
- 2015年
- 目的从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗人死亡受体5(DR5)单链抗体(sc Fv)并对其抗原结合活性进行鉴定。方法以前期真核表达纯化的DR5-Fc蛋白包被筛选管,从自主构建的大容量天然噬菌体抗体库中,通过4轮筛选过程获得噬菌体抗体,采用免疫细胞化学染色、ELISA鉴定其抗原结合活性;DNA指纹图谱分析和序列测定确定其抗体类型。结果经过4轮筛选,获得26株与DR5特异性结合的阳性克隆,DNA指纹分析有4种不同的可变区片段;经过基因测序,分析可变区基因的亚群,并将其制备成可溶性的抗体,进一步用免疫细胞化学技术证实所获得的抗体可特异性结合SW480细胞的DR5蛋白。结论利用噬菌体抗体库技术成功获得了特异性抗DR5的人源性sc Fv。
- 蒋效何立东王欲晓丁立吴成林熊丽娟周丽君王育红
- 关键词：人源单链抗体
- 人源性抗人FKBP52 IgG的表达和纯化
- 2016年
- 目的将噬菌体抗体库中筛选到的抗52-k Da FK506结合蛋白(FKBP52)人源单链抗体(sc Fv)转换为完整人IgG并在真核细胞中表达。方法噬菌体抗体库获得的5株抗人FKBP52-sc Fv,PCR扩增其轻重链可变区(V_H/V_κ),利用同源重组技术将5对V_H、V_κ拼接至分别包含有人κ链及IgG1恒定区的真核表达载体p CMV/R-L、p CMV/R-H上,转染HEK293F细胞进行完整抗体表达,ELISA鉴定抗体活性,蛋白A柱分离纯化活性最高的抗体,SDS-PAGE、Western blot法鉴定纯化后抗人FKBP52-IgG。结果 PCR及测序结果证实正确构建得到5对抗人FKBP52真核表达载体,转染HEK293F细胞后经ELISA鉴定均有完整抗体表达,对活性最高的5号克隆进行抗体分离纯化,经SDS-PAGE及Western blot验证获得高纯度的特异性人源抗FKBP52-IgG。结论成功将原核表达的抗人FKBP52-sc Fv转换为真核表达的完整人IgG。
- 丁立熊丽娟王欲晓吴成林付凯飞周丽君
- 关键词：真核表达
- 一种抗HER2双特异性抗体及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种抗HER2双特异性抗体及其制备方法与应用。本发明公开的一种抗体，由两个相同的半分子组成，其中每个半分子由通过二硫键连接的一条轻链和一条重链组成，所述两个半分子的两条重链之间通过二硫键连接；所述重链的氨基酸...
- 周丽君王欲晓熊丽娟付凯飞
