罗兰芳
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡Ii与B-L基因表达产物的细胞定位与结合活性特征的研究
- 主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex, MHC）是由一群位于脊椎动物特定染色体区域基因所编码的高度多态性蛋白分子。MHC分子分布于不同细胞表面，通过呈递抗原来调节免疫应答...
- 罗兰芳
- 关键词：家鸡MHC分子基因表达细胞定位结合活性抗原性
- 文献传递
- 鸡B-FA分子中结合Ii链功能片段特性的研究被引量：1
- 2016年
- 目的:研究鸡Ii链结合的B-FA分子的功能片段及其特征。方法:将克隆的B-FA基因片段(α1α2、sα1α2和α3TC)分别插入原核或真核表达质粒,然后分别转染或与Ii共转染工程菌E.coli(BL-21)或293T细胞,经过诱导表达、亲和层析纯化和SDS-PAGE鉴定后,分别用Pull-down法观察B-FA片段与Ii结合与在细胞内的共定位特征。结果:首先,构建了3个重组原核表达质粒和4个重组真核表达质粒。原核表达的B-FA片段经亲和层析纯化可获得单一蛋白分子。其次,用Pulldown从共转染工程菌表达的蛋白分子中分别检测到Ii/B-FA-α1α2和Ii/B-FA-sα1α2,而未能检测到Ii与α3TC的结合物,而免疫印迹结果也表明该两片段是结合Ii链形成复合物的功能片段。最后,在真核表达的293T中,B-FA-α1α2具有同B-FA相同的细胞定位特性。结论:鸡B-FA-α1α2片段是结合Ii的功能片段,并保持了B-FA的细胞定位的作用。本研究结果首次提供了B-FA分子与Ii的互相作用的实验依据。
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- 关键词：复合物
- 鸡Ii与B-L基因表达产物的细胞定位与结合活性特征被引量：3
- 2015年
- 目的:研究鸡Ii与B-L基因表达产物在细胞内定位和互相结合的活性特征。方法:将克隆的Ii、B-LA和B-LB基因片段分别插入原核或真核表达质粒;然后分别单独转染或共转染工程菌Rosetta(DE3)或293T细胞。所有重组菌经鉴定后进行诱导表达后再复性。单一表达产物用免疫印迹检测它们的抗原性,共转染表达的产物用pull-down法和(SDS-)PAGE观察其互相结合特征。结果:成功构建了6个原核和真核表达重组质粒。在真核细胞中Ii、B-LA和B-LB基因表达产物定位于细胞浆膜,而原核表达产物经复性后和亲和层析纯化,获得单一蛋白分子。其次,原核表达的Ii与B-LA和B-LB复性蛋白能够诱导产生鼠源抗体,这些抗体特异性结合真核表达产物,表明它们保持相同的免疫原性。最后,用pull-down从共转染的工程菌表达并复性的蛋白分子中分别获得纯化的Ii/B-LA和Ii/B-LB复合物,它们经SDS处理后分别被解离成单体。结论:鸡Ii和B-L基因的原核与真核表达的产物能够保持其抗原性,而原核共表达的Ii和B-L蛋白分子复性后可以互相结合。本研究的结果为进一步研究Ii与B分子关系提供了方法。
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- 关键词：复合物
