刘韩
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：集美大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 定向进化提高Pseudoalteromonas carrageenovora芳香基硫酸酯酶热稳定性的研究
- 本研究以提高Pseudoalteromonas carrageenovora芳香基硫酸酯酶的热稳定性为目的，基于易错PCR对酶进行定向进化，获得了热稳定性提高的突变体。对P.carrageenovora芳香基硫酸酯酶进行...
- 刘韩
- 关键词：定向进化热稳定性
- 文献传递
- 一种高温酯酶、基因及其应用
- 本发明公开了一种高温酯酶、基因及其应用，从海洋嗜热菌Geobacillussp.JM6中克隆得到新的酯酶基因，并在E.coli中进行表达和纯化，得到重组酯酶；酶学性质研究表明，酶的最适反应温度和pH分别为60℃和7.5；...
- 朱艳冰倪辉刘韩蔡慧农肖安风杜希萍李利君
- 文献传递
- Pseudomonas syringae褐藻胶裂解酶基因的克隆及信息学分析被引量：4
- 2015年
- 以Pseudomonas syringae的基因组为模板,使用褐藻胶裂解酶引物进行PCR扩增,将目的基因克隆至p MD18-T载体后进行测序.结果显示,克隆基因的大小为1137 bp,预测编码含有378个氨基酸残基的蛋白质.对该蛋白质进一步进行生物信息学分析,结果表明,该蛋白质序列与其他菌株来源的褐藻胶裂解酶具有高的相似性,预测本研究克隆的基因编码褐藻胶裂解酶.该褐藻胶裂解酶的理论分子质量为42.5 ku,理论等电点为8.15.采用同源建模法建立P.syringae褐藻胶裂解酶的三维结构,富含螺旋结构.
- 吴丽云刘韩倪辉肖安风蔡慧农朱艳冰
- 关键词：假单胞菌褐藻胶裂解酶克隆生物信息学
- 易错PCR法提高土芽孢杆菌ZH1羧酸酯酶的热稳定性被引量：3
- 2015年
- 【目的】对土芽孢杆菌(Geobacillus sp.)ZH1的羧酸酯酶基因进行定向进化,筛选得到酶热稳定性提高的突变酶。【方法】利用易错PCR技术向羧酸酯酶基因中随机引入突变,建立酶基因突变文库,筛选获得热稳定性提高的突变体,并对突变酶进行诱导表达、纯化及部分酶学性质研究。【结果】通过筛选,获得羧酸酯酶热稳定性提高的突变菌株65。序列分析表明,突变酯酶65有2个氨基酸发生了改变,包括T113S和M160K。突变酶的三维结构模拟显示,突变T113S位于酶分子的第5个β-折叠上;突变M160K处在酶分子第5个和第6个α-螺旋之间的环结构上,位于酶分子表面,突变后的Lys160与邻近的Thr162形成一个额外氢键。在90℃下,突变酶65和亲本酶的半衰期分别为3.1 h和1.9 h,表明筛选到的突变酶65比亲本酶的热稳定性好。【结论】基于易错PCR技术对Geobacillus sp.ZH1羧酸酯酶的热稳定性进行了定向进化,对改善酶的性质、扩大酯酶的应用范围,以及研究酯酶的结构与功能的关系具有重要意义。
- 刘韩吴丽云高贺倪辉蔡慧农朱艳冰
- 关键词：定向进化易错PCR羧酸酯酶热稳定性
