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苹果树腐烂病菌CAP超家族蛋白VmPR1c降解功能域和降解途径探究: 真菌在与寄主互作过程中常分泌多种效应蛋白,植物病原菌分泌的CAP超家族蛋白在与寄主互作中发挥着多种功能,但关于植物病原真菌CAP超家族蛋白的蛋白特征仍知之甚少。课题组前期对苹果树腐烂病菌Valsa mali中的一个CAP...; 孟香尹志远聂嘉俊黄丽丽; 关键词：CAP蛋白免疫印迹降解; 文献传递

苹果黑腐皮壳菌CAP超家族蛋白VmPR1c的降解功能域和降解途径: 2019年; 真菌与寄主互作过程中常分泌多种效应蛋白,但植物病原真菌CAP超家族蛋白是否参与致病过程尚不明确。基于苹果黑腐皮壳菌Valsamali基因组CAP同源基因研究发现VmPR1c敲除后突变体致病性明显下降,但VmPR1c蛋白在表达过程中被降解。本研究借助BLAST、NCBI CDD web server、SignalP 4.1、TMHMM 2.0等进行序列分析,利用缺失突变法及在蛋白表达过程中加蛋白酶抑制剂分别对该蛋白的降解功能域和降解途径进行了探索。C端区段缺失突变结果显示,突变涉及CAP结构域中的α-helix结构和CBM区域时,Western blot条带呈现明显加深;涉及CTE区域及CAP结构域中的半胱氨酸时,Western blot条带则呈现不同程度地减弱。替换VmPR1c的信号肽或突变其信号肽切割位点序列,Western blot条带均有不同程度地加深。分别对CTE和NTE中的脯氨酸进行点突变后,蛋白降解更加严重。在蛋白表达过程中加入蛋白酶体抑制剂MG132和溶酶体抑制剂chloroquine,与对照VmPR1c△SP-GFP相比,Western blot结果无明显变化,表明VmPR1c蛋白序列C端区域中的CTE、信号肽及其切割位点序列以及CAP结构域中的α-helix结构介导其降解,其中CTE和NTE中的脯氨酸对该蛋白具保护作用。此外,VmPR1c的降解不通过蛋白酶体和溶酶体途径。; 孟香尹志远聂嘉俊黄丽丽; 关键词：CAP蛋白免疫印迹降解

苹果树腐烂病菌一个引起植物细胞坏死的效应基因VmE02的鉴定: 由死体营养型（Necrotrophic）真菌Valsa mali导致的苹果树腐烂病能够引起苹果树皮严重坏死甚至整株死亡,给苹果产业造成巨大经济损失。引起植物细胞坏死对于死体营养型真菌侵染定殖寄主有重要作用,鉴定该病原菌坏...; 聂嘉俊尹志远李正鹏康振生黄丽丽; 关键词：基因水平转移同源基因; 文献传递

腐烂病菌Valsa mali侵染过程中苹果抗性相关基因的鉴定: 由死体营养真菌Valsa mali引起的苹果树腐烂病（Apple valsa canker）作为苹果的主要病害,严重威胁着我国苹果产业的可持续发展。目前,由于病菌主要为害韧皮部并且对苹果的抗性机制知之甚少,导致病害很难得...; 尹志远柯希望康振生黄丽丽; 关键词：果树病害细胞色素P450 几丁质; 文献传递

苹果黑腐皮壳菌CAP超家族蛋白基因鉴定及毒性功能分析: 2021年; 【目的】CAP(Cysteine-rich secretory protein,Antigen 5 and Pathogenesis related protein 1)超家族蛋白广泛存在于真菌、细菌、动植物等物种,并且参与病原菌的致病过程。本研究旨在鉴定苹果树腐烂病致病菌——苹果黑腐皮壳菌(Valsa mali)的CAP超家族基因并明确CAP超家族基因在病菌致病方面的作用。【方法】通过BLASTP在苹果黑腐皮壳菌全基因组中检索具有CAP保守结构域的基因;利用特异性引物对鉴定到的CAP基因进行PCR扩增和凝胶电泳检测;使用生物信息学软件和在线数据库进行蛋白序列特征和系统发育分析;利用RT-qPCR分析基因在病菌侵染过程中的表达模式;使用特异性引物扩增CAP基因上、下游片段并从PDL2质粒上扩增筛选标记基因;利用Double-joint PCR构建基因敲除盒并通过PEG介导的原生质转化技术进行基因敲除和基因回补;以遗传霉素(G418)抗性为筛选标记并利用4对引物PCR检测获得基因敲除突变体;以潮霉素(HPH)抗性为筛选标记获得基因回补菌株;通过对菌株进行培养皿内生长试验明确基因对病菌营养生长的影响;通过离体苹果枝条接种试验分析该病菌CAP超家族基因的毒性功能。【结果】在苹果黑腐皮壳菌中鉴定到3个具有CAP保守结构域的基因,分别命名为VmPR1a、VmPR1b和VmPR1c。序列特征分析发现,3个CAP蛋白均包含4个保守区:N端信号肽、N端延伸区(NTE)、CAP保守功能域和C端延伸区(CTE)。系统发育分析显示,3个CAP蛋白聚于不同的进化支,VmPR1a聚于clade2进化支并与粗糙链孢霉(Neurospora crassa)CAP蛋白进化关系较近;VmPR1b聚于clade3且与镰孢菌属(Fusarium spp.)CAP蛋白的进化关系更近;VmPR1c聚于clade1,并且也与粗糙链孢霉的CAP蛋白进化关系较近。RT-qPCR分析结果显示,VmPR1a、VmPR1b和VmPR1c在病菌侵染早期(6 h和12 h)均显著上调表达。利用PEG遗传转化技术获得VmPR1a、VmPR1b和VmPR1c敲除突变体(ΔVmPR1a-7/23、ΔVm; 王程利尹志远聂嘉俊林永辉黄丽丽; 关键词：CAP蛋白基因鉴定基因敲除

苹果树腐烂病菌T-DNA插入突变体表型及致病突变体研究被引量：1: 2014年; 【目的】筛选苹果树腐烂病菌T-DNA插入表型或致病突变体,为研究该病菌的表型及致病相关基因提供起始材料。【方法】从建立的T-DNA插入突变体库中,随机挑选230株突变体菌株进行表型观察及致病性测定,并对部分致病突变体进行TAIL-PCR侧翼扩增。【结果】大部分的突变体与野生型菌株03-8在表型及致病性方面无明显差异,仅30.87%的突变体表现出了明显的变化;其中16株突变体(占突变体总数的6.95%)致病性发生了明显的增强,而表型与03-8相比无明显的变化;20株突变体(占突变体总数的8.69%)致病性与03-8无显著性差异,但是表型发生了明显的变化;16.1%的突变体则同时表现出表型及致病性的显著差异,其中28株表现为致病性显著降低,7株致病性丧失。通过对15株致病突变体侧翼序列的扩增,获得了7条T-DNA侧翼序列,其中突变体X912的侧翼序列被注释为黄曲霉(Aspergillus flavus)阿魏酸酯酶B前体。【结论】获得了多个不同的苹果树腐烂病菌表型或致病突变体,为研究该病菌的生长发育及致病相关基因奠定了良好的基础。; 黄定宣胡杨孙光超高小宁尹志远黄丽丽; 关键词：苹果树腐烂病菌 T-DNA插入侧翼序列 TAIL-PCR

苹果树腐烂病菌根皮苷水解酶基因Vmlph1的功能被引量：1: 2018年; 为明确根皮苷降解酶在苹果树腐烂病菌侵染过程中的作用,从苹果树腐烂病菌基因组序列中鉴定出候选根皮苷降解酶基因Vmlph1,利用Double-joint PCR和PEG介导的原生质体转化技术构建Vmlph1敲除突变体,观察突变体营养生长状况、产孢情况以及致病力的变化;利用HPLC方法检测基因敲除对根皮苷降解速率的影响。结果发现,经PCR及Southern blot验证后获得Vmlph1基因的敲除突变体;与野生型菌株相比,突变体菌落颜色变白,生长速率和产孢能力显著降低;接种到叶片和枝条上,突变体致病力显著降低;突变体根皮苷降解能力与野生型没有显著差异;在根皮苷诱导下,野生型菌株黑色素合成调控转录因子Cmr1基因的表达量显著上调,但突变体Cmr1基因的上调倍数显著低于野生型菌株。表明,根皮苷降解酶基因Vmlph1与苹果树腐烂病菌营养生长、致病力、分生孢子的产生及黑色素合成有关。; 朱百涛尹志远吴玉星高小宁冯浩韩青梅黄丽丽; 关键词：苹果树腐烂病致病力

苹果类受体蛋白激酶MdSRLK3通过影响Ca2+信号通路正向调节苹果对病原真菌Valsa mali的抗性: 苹果树腐烂病是由苹果黑腐皮壳菌(Valsa mali)引起的真菌病害,严重威胁苹果安全生产。病菌主要侵染苹果树枝干的皮层和木质部,引起主干、大枝树皮溃烂、整树枯死,严重时甚至造成大量死树毁园。苹果树腐烂病的防治方法主要以...; 韩朋良李芮岳倩宇李富东聂嘉俊尹志远许铭管清美黄丽丽

苹果树腐烂病菌全基因组解析及两个外泌蛋白被植物识别的机制研究: 由Valsa mali引起的苹果树腐烂病是危害苹果生产最为严重的病害之一,该病菌主要侵染皮层和韧皮部,导致树皮腐烂,严重时可致整树枯死,但基因组序列的缺乏严重限制了在分子水平对其致病机理的解析。病原菌与植物长期的协同进化...; 尹志远; 关键词：基因水平转移病程相关蛋白扩张蛋白诱导抗性; 文献传递

苹果树腐烂病菌高效基因敲除受体菌株ΔVmKu80的构建被引量：4: 2016年; 为验证苹果树腐烂病菌VmKu80的基因功能,构建高效率基因敲除的受体菌株。通过基因敲除技术获得介导非同源末端连接(NHEJ)途径的VmKu80基因缺失突变体,并对其生长速率、皿内菌落形态、致病力、分生孢子器的形成和基因敲除效率等进行分析。结果表明,该突变体的生长速率、皿内菌落形态、对苹果的致病力和分生孢子器产生等均与03-8菌株无显著差异,且以VmKu80缺失突变体为受体菌株的基因敲除效率是03-8菌株的12倍。说明,VmKu80缺失突变体的获得可以实现苹果树腐烂病菌基因敲除工作的高通量化,有助于苹果树腐烂病菌的基因功能研究。; 许铭尹志远高明煜芦文博高小宁黄丽丽; 关键词：苹果树腐烂病菌同源重组

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尹志远

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