葛晓霞
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：武汉生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- CsAHL25通过影响CsHB1、LEC1/B3基因表达调控柑橘体细胞胚发生
- 2024年
- 【目的】基于柑橘体细胞胚发生相关基因CsHB1的启动子筛选其上游转录因子,以期为柑橘体细胞胚发生分子机制研究提供可靠的候选基因。【方法】利用CsHB1启动子(-1018~-558 bp)进行酵母单杂筛库实验,筛选出CsHB1上游转录因子CsAHL25;利用亚细胞定位实验,确定CsAHL25在细胞中的位置;通过酵母单杂点对点、双荧光素酶实验验证CsAHL25对CsHB1表达的影响;利用qRT-PCR探究CsAHL25基因在柑橘体细胞胚诱导过程中的表达模式;在柑橘愈伤组织中瞬时表达该基因,并检测体细胞胚发生相关基因的表达变化。【结果】CsAHL25在柑橘体细胞胚诱导过程中呈现先上升后下降的表达模式,该蛋白定位在细胞核中,能与CsHB1启动子结合并下调CsHB1的表达。瞬时表达CsAHL25会导致CsHB1表达量下调,及CsABI3、CsFUS3、CsLEC1、CsL1L等促进体细胞发生的LEC1/B3基因表达量上调。【结论】CsAHL25能直接下调CsHB1的表达,并使LEC1/B3基因表达量上升。CsAHL25可能通过调整CsHB1、LEC1/B3基因的表达促进体细胞胚发生。
- 叶长宁徐梦梦刘兰兰付玉洁葛晓霞
- 关键词：HD-ZIPAT-HOOK
- 柑橘CitSERK-LIKE基因原核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2016年
- 用RT-PCR扩增伏令夏橙体细胞胚发生类受体蛋白激酶(somatic embryogenesis receptor-like kinase,SERK)基因ORF区全长,克隆入载体,酶切后亚克隆入原核表达载体,并用SDS-PAGE观察CitSERK-LIKE基因的原核表达情况。结果显示,成功构建了pET-CitSERK1-like原核表达重组质粒,该重组质粒在大肠杆菌中可经IPTG诱导表达分子量约为69 ku的融合蛋白,与预测蛋白一致。
- 葛晓霞
- 关键词：柑橘原核表达
- 柑橘CsHB1启动子的克隆及功能分析被引量：1
- 2018年
- 以‘伏令夏橙’叶片基因组DNA为模板,克隆了CsHB1启动子5′端转录起始位点上游分别为1 741 bp和1 613 bp的区域序列。序列分析表明这两个启动子区序列相似度为90.7%,存在141 bp的差异片段,该差异片段中含有2个Box4元件。通过PlantCare数据库对启动子序列的顺式作用元件进行预测,结果表明CsHB1的不同启动子序列含有多种响应元件,如胚乳特异性元件、分生组织表达元件、光反应元件、热应激反应元件、MYB结合位点等。为进一步分析CsHB1启动子的功能,构建该基因启动子与GUS基因融合的植物表达载体prCsHB1::GUS,并用农杆菌介导法转化拟南芥,获得prCs HB1-1::GUS拟南芥纯合材料13株和prCs HB1-2::GUS拟南芥纯合材料10株。对转基因拟南芥进行GUS组织化学染色鉴定,结果表明两类启动子表达载体已成功转入拟南芥中并进行了表达,其表达部位主要集中于愈伤组织和花药中,而在种荚、叶片及幼苗中未检测到GUS蛋白的表达。
- 张梦原谢幸男李盈葛晓霞
- 关键词：柑橘启动子顺式作用元件GUS染色
- 柑橘体细胞胚发生基因CsHB1特异肽段多克隆抗体的制备及其蛋白动态检测被引量：2
- 2017年
- 【目的】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达系统,制备多克隆抗体,并检测抗体在‘伏令夏橙’胚性愈伤体胚诱导阶段中的特异性,为研究CsHB1基因在柑橘体细胞胚发生过程中的功能奠定基础。【方法】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N,转化大肠杆菌诱导目的融合蛋白的表达,并制备获得多克隆抗体anti-CsHB1-N。通过Western blot检测抗体在原核表达系统和柑橘体细胞胚诱导阶段的特异性,并分析体细胞胚诱导阶段CsHB1蛋白水平表达的动态变化。【结果】重组原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N在Escherichia coli中高效表达出了分子质量约为49 ku的GST-CsHB1-N融合蛋白,并纯化获得多克隆抗体anti-CsHB1-N;经过Western blot分析表明,多克隆抗体可与‘伏令夏橙’愈伤体胚诱导阶段表达的目的蛋白特异结合;蛋白表达结果分析表明,在胚性愈伤组织中CsHB1蛋白呈现高的表达量,随着诱导培养的进行,呈现了先下降后上升的波动变化。【结论】多克隆抗体特异性好,可与‘伏令夏橙’胚性愈伤组织中目的蛋白特异性结合,可用于CsHB1基因功能分析。
- 谢幸男赖晓娜战爽程来超许全全葛晓霞
- 关键词：柑橘多克隆抗体
- 蕙兰CfAOC基因的克隆及表达分析被引量：6
- 2015年
- 以野生蕙兰为试材,利用分子手段解析CfAOC(allene oxide cyclase,丙二烯氧化物环化酶)在蕙兰花香合成途径中的作用,同时为揭示蕙兰花香合成的分子机制提供理论依据。结果表明:分别以蕙兰基因组DNA和cDNA为模板PCR扩增出CfAOC基因的全长序列和CDS序列,比较发现CfAOC基因由3个外显子和2个内含子构成,亚细胞定位预测该蛋白位于叶绿体中,氨基酸序列分析显示该基因编码的蛋白含有保守的丙二烯氧化物环化酶结构域,进化树结果也表明CfAOC与其它植物的AOC同源性较高,都参与茉莉酸及其衍生物的合成代谢。CfAOC基因的时空特异性表达分析发现该基因在蕙兰盛花期时的花中表达量最高,暗示该基因可能与蕙兰花香合成有关。
- 周银王松太董坤洪华珠葛晓霞
- 关键词：蕙兰
