张文广
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：重庆市渝中区科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- AQP9过表达抑制肝癌SMMC-7721细胞裸鼠皮下移植瘤的生长及其作用机制的研究被引量：6
- 2015年
- 目的 ：观察水通道蛋白9（aquaporin 9,AQP9）对人肝癌SMMC-7721细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响,并初步探讨其可能的机制。方法 ：将重组慢病毒LV-AQP9（以空载体LV-GFP作为阴性对照）导入SMMC-7721细胞中,构建SMMC-7721/LV-AQP9重组细胞。激光共聚焦显微镜下观察重组慢病毒LV-AQP9在SMMC-7721细胞中的感染效率,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测AQP9 m RNA和蛋白在SMMC-7721细胞中表达的改变。采用FCM法和DAPI染色检测细胞的凋亡情况。CCK-8法检测SMMC-7721细胞增殖能力的变化。将重组肝癌SMMC-7721/LV-AQP9细胞和SMMC-7721/LV-GFP细胞分别接种于裸鼠皮下,观察2组小鼠中移植瘤生长的情况,并采用HE染色观察移植瘤及肺组织病理学的情况,免疫组织化学法检测移植瘤中增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达水平。结果：激光共聚焦显微镜下观察发现,重组慢病毒LV-AQP9在SMMC-7721细胞中的感染效率为90%左右,且AQP9 m RNA以及蛋白在SMMC-7721细胞中的表达水平显著增加（P值均〈0.01）。与空白对照组和阴性对照组（GFP组）相比,AQP9过表达组（AQP9组）细胞的总凋亡率显著增加（P〈0.01）;而AQP9组细胞在48-96 h各时间点的细胞增殖能力均受到抑制（P值均〈0.05）。重复测量方差分析比较2组移植瘤体积的结果提示,AQP9组移植瘤体积显著小于GFP组（F分组=79.161,P分组=0.000）,AQP9组皮下移植瘤生长速度明显小于GFP组（F分组×时间=18.481,P分组×时间=0.002）。AQP9组移植瘤中PCNA蛋白表达水平较GFP组下调。结论 ：AQP9过表达抑制人肝癌SMMC-7721细胞在裸鼠皮下生长,并可能通过促进凋亡及抑制增殖两种途径参与调控,为深入研究分子机制奠定基础,且有望成为肿瘤治疗的新靶点。
- 张文广李传飞刘敏陈小凤吕琳梅浙川
- 水通道蛋白9对人肝癌细胞系HepG2增殖、凋亡和侵袭迁移的影响被引量：2
- 2015年
- 目的 探讨水通道蛋白9（AQP9）对人肝癌细胞系HepG2增殖、凋亡和侵袭迁移的影响.方法 构建靶向AQP9基因的慢病毒过表达载体,转染HepG2细胞并用嘌呤霉素筛选出稳定细胞株,用激光共聚焦验证转染效率,用qRT-PCR及Western blot检测AQP9表达情况.实验分组：“CC组”为无慢病毒转染的HepG2细胞、“PWPI组”为空载体慢病毒转染的HepG2细胞,“过表达AQP9组”为含过表达AQP9基因慢病毒载体转染的HepG2细胞.利用平板克隆、划痕愈合实验、Transwell小室侵袭实验以及流式细胞仪分别检测AQP9对HepG2增殖、迁移、侵袭、凋亡以及周期的影响.多组间数据比较采用单因素方差分析,两组间数据比较采用独立样本t检验. 结果 激光共聚焦结果显示,HepG2转染AQP9后细胞膜高表达绿色荧光蛋白,qRT-PCR及Western blot检测AQP9的mRNA和蛋白质表达较其他2组均上升,差异均有统计学意义（P值均＜0.01）.平板克隆结果显示,CC组、PWPI组和过表达AQP9组克隆形成率分别为23.53％±2.10％、23.00％±2.022％、16.93％±3.19％,组间比较,差异有统计学意义（F=6.46,P=0.032）.流式测凋亡结果显示,CC组、PWPI组和过表达AQP9组总凋亡率分别为19.70％±2.49％、24.37％±2.38％、44.96％±3.53％,组间比较,差异有统计学意义（F=66.88,P＜0.01）,与PWPI组和CC组比较,差异均有统计学意义（P值均＜0.01）;流式测周期结果显示,CC组、PWPI组和过表达AQP9组细胞停留在S期和G1期的细胞百分比分别为34.39％±4.33％和54.58％±0.89％;35.65％±1.39％和53.08％±2.06％;15.25％±1.81％和66.58％±0.99％,组间比较,差异均有统计学意义（F值分别为49.25和82.09,P值均＜0.01）.划痕愈合实验结果显示,过表达AQP9组细胞24h的迁移率为6.38％±1.70％,与PWPI组16.74％±1.40％比较,差异有统计学意义（t=8.133,P=0.01）.Transwell实验结果显示,过表达AQP9组24h穿过细胞数为（17±8）个,与PWPI组（95�
- 李传飞陈小凤张文广刘佳吕琳梅浙川
- 关键词：慢病毒属细胞增殖
