杨轶
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
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- 相关领域：生物学更多>>
- 集成干扰素突变体Ⅱ的分子构建、表达及提纯被引量：5
- 2006年
- 目的:通过定点突变,构建集成干扰素突变体Ⅱ(IFN-Con-m2),以期获得兼具高效作用和可定点聚乙二醇(PEG)修饰的新型药物分子。方法:采用PCR体外定点突变技术,使集成干扰素突变体Ⅰ(IFN-Con-m1)基因的第86位密码子由TAC突变为TGC。将扩增片段克隆入pET-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。IPTG诱导后,表达的IFN-Con-m2经包涵体变复性、疏水层析、DEAE层析和凝胶过滤层析等纯化后,用WISH-VSV系统进行生物活性测定。结果:IFN-Con-m2以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,IFN-Con-m2的纯度大于95%,比活性大于5.0×108IU/mg。结论:构建了IFN-Con-m2的表达载体,并成功地在大肠杆菌中表达,获得了高活性突变分子IFN-Con-m2,建立了IFN-Con-m2的纯化工艺。
- 牛晓霞刘金毅杨轶吴晓东
- 关键词：定点突变纯化
- α干扰素-2bHis^58的分子构建、表达及纯化
- 2008年
- 目的通过定点突变,构建α干扰素-2bHis58(IFNα-2bHis58),以期获得高效的新型药物分子。方法采用PCR体外定点突变技术,使α干扰素-2b基因的第58位密码子由GAA突变为CAC。将扩增片段克隆入pET23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。表达的IFNα-2bHis58经包涵体变复性、DEAE层析和CM层析纯化后,用WISH-VSV系统进行生物活性测定。结果IFNα-2bHis58主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,IFNα-2bHis58的纯度>95%,比活性>3.4×108IU/mg。结论构建了IFNα-2bHis58的表达载体,并成功在大肠杆菌中表达,获得了高活性突变分子IFNα-2bHis58,建立了IFNα-2bHis58的纯化工艺。
- 王秀刘金毅牛晓霞杨轶金颖彭秀娟王艳
- 关键词：定点突变蛋白表达蛋白纯化
