张惟材
- 作品数：107 被引量：386H指数：11
- 供职机构：北京生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 酮古龙酸菌细胞色素c的表达、成熟及活性分析被引量：1
- 2011年
- 目的:从酮古龙酸菌Y25中扩增细胞色素c基因,在大肠杆菌中表达、成熟并进行生物活性分析。方法:从酮古龙酸菌Y25基因组中PCR扩增细胞色素c基因,构建pET22b表达载体;从大肠杆菌BL21(DE3)中扩增细胞色素c成熟基因簇ccmABCDEFGH,连接到带有山梨糖脱氢酶组成型启动子的pBBR1MCS2-P200载体中;将构建的2个质粒共转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行血红素染色检测;通过氧化还原光谱法对Ni柱亲和纯化的重组蛋白进行活性分析。结果:扩增得到1404 bp的细胞色素c基因及6481 bp的ccmABCDEFGH基因簇;重组菌株经IPTG诱导表达后行SDS-PAGE分析,可见相对分子质量为50×103的表达条带;血红素染色显示重组蛋白结合有血红素;经氧化还原光谱扫描,显示亲和层析纯化得到的目的蛋白有细胞色素c特征吸收峰。结论:从酮古龙酸菌Y25中扩增得到了细胞色素c基因,在大肠杆菌中进行了表达和成熟,表达蛋白具有细胞色素c生物活性。
- 程红熊向华赵岩汪建华张怡轩张惟材
- 关键词：细胞色素C电子传递
- 甲基营养菌MP688基因组完成图构建
- 2011年
- 目的:在Solexa测序建立的甲基营养菌MP688基因组精细图的基础上,构建MP688基因组完成图。方法:根据MP688基因组序列设计引物,进行常规PCR扩增,填补Scaffold内部缺口;利用BLASTN、BLAT软件分析预测6个Scaffold定位关系;通过组合PCR、长距离PCR等填充Scaffold间的物理缺口。结果:常规PCR填充Scaffold内部4个缺口;BLASTN、BLAT软件分析预测了Scaffold定位关系;组合PCR填充Scaffold间的2个物理缺口,长距离PCR填充其余4个物理缺口。结论:得到了MP688的基因组完成图,为MP688的吡咯喹啉醌生物合成途径的阐明和进一步的代谢工程育种奠定了基础。
- 智静娟熊向华何建勇汪建华何涛张惟材
- 关键词：甲基营养菌
- 短芽孢杆菌细胞壁蛋白基因多启动子和信号肽编码序列的分离被引量：3
- 2002年
- 具有高蛋白分泌能力的短芽孢杆菌分泌到胞外的蛋白质主要是细胞壁蛋白。本文通过PCR从5株筛得的具有高蛋白分泌能力且没有胞外蛋白酶活性的短芽孢杆菌中分离出细胞壁蛋白基因多启动子和信号肽编码序列,对其分析发现与具有高蛋白分泌能力的短芽孢杆菌47和HPD31的相应序列高度同源。该结果表明分泌蛋白能力强的短芽孢杆菌细胞壁蛋白的合成可能受同样的机理调控。
- 彭清忠张惟材朱厚础
- 关键词：短芽孢杆菌聚合酶链式反应
- 甲基营养菌MP688胞外多糖合成的影响因素研究
- 2013年
- 目的：考察培养基组分和发酵条件对甲基营养菌MP688合成胞外多糖的影响，确定最主要的影响因素。方法：将甲基营养菌MP688接种到基础培养基中，通过改变基础培养基的氮源、培养温度、初始pH值和培养时摇床转速等条件，检测在每种条件下培养5 d后发酵液中的多糖含量，确定每种因素的最适范围；进而选取8个因素，通过Plackett-Burman实验设计12组实验，通过检测每种组合条件下的多糖产量和结果统计分析，确定影响多糖合成的最主要因素。结果：甲基营养菌合成胞外多糖的最适氮源为硝酸钠，最适温度为30-37°C，最适pH值为6.5-7.0，最适摇床转速为200-250 r/min；甲醇、硝酸钠、初始pH值和接种量是MP688合成多糖的主要影响因子。结论：运用Plack-ett-Burman实验设计筛选到甲基营养菌MP688胞外多糖合成的主要影响因子，MP688是具有多糖生产潜力的菌株。
- 葛欣韩月梅熊向华汪建华刘党生张惟材
- 关键词：甲基营养菌胞外多糖
- Arthrobacter K1108乙内酰脲酶反应条件和立体选择性研究被引量：6
- 2001年
- 研究了ArthrobacterK110 8乙内酰脲酶的反应条件 ,结果表明 ,K110 8乙内酰脲酶的最适反应温度为 5 5℃ ,最适pH为 7 0 ,Co2 + 和Fe2 + 对该酶有激活作用 ,而Ca2 + 有严重抑制作用。K110 8乙内酰脲酶的底物专一性较强 ,其最适底物为 5 苄基乙内酰脲 ,5 苯基乙内酰脲和 5 吲哚甲基乙内酰脲均不能作为其有效底物。对K110 8乙内酰脲酶立体反应机制研究结果表明 ,其乙内酰脲水解酶不具立体选择性 ,决定产物立体构型的酶是N 氨甲酰氨基酸水解酶。
- 张惟材袁红杰郝淑凤彭清忠王书锦朱厚础黄留玉
- 关键词：节杆菌乙内酰脲酶底物专一性酶法生产
- 氧化葡糖杆菌sndh-sdh基因簇的克隆表达被引量：1
- 2012年
- 目的:从氧化葡糖杆菌H763中克隆sndh-sdh基因簇,在大肠杆菌和氧化葡糖杆菌621H中分别表达山梨酮脱氢酶-山梨糖脱氢酶(SNDH-SDH),并检测其活性。方法与结果:以氧化葡糖杆菌H763基因组DNA为模板,PCR扩增包括启动子、结构基因及终止序列在内的sndh-sdh基因簇,回收3533 bp的扩增产物,连入pMD18T载体,转化至大肠杆菌DH5α中表达;以山梨糖或木糖为底物,DCIP法检测菌体裂解液,DCIP检测液颜色由蓝绿色变为黄色,表明大肠杆菌表达产物具有脱氢酶活性。构建pBBR1MCS2-sndh-sdh载体,通过接合转移导入氧化葡糖杆菌621H,重组葡糖杆菌在以山梨醇或山梨糖为底物的培养基中培养,采用薄层层析检测法检测其培养上清中的代谢产物,层析板上显示了2-酮基-L-古龙酸斑点。结论:重组大肠杆菌DH5α和氧化葡糖杆菌621H中均表达了有脱氢酶活性的SNDH-SDH。
- 侯伟熊向华陈微微汪建华舒伟袁志刚张惟材
- 关键词：山梨糖脱氢酶2-酮基-L-古龙酸
- 吡咯喹啉醌在恢复放射后骨髓造血功能中的应用
- 本发明公开了吡咯喹啉醌在恢复放射后骨髓造血功能中的应用，具体公开了吡咯喹啉醌或其药学上可接受的盐或酯，或含有它们中任一种的药物组合物在制备治疗骨髓造血功能破坏的药物中的应用。服用受试药物PQQ对于白细胞的恢复有一定的促进...
- 张惟材汪建华熊向华周满祥魏琳申云飞
- 文献传递
- 一种发酵生产吡咯喹啉醌过程中消除副产物多糖的方法及其应用
- 本发明提供了一种发酵生产吡咯喹啉醌过程中消除副产物多糖的方法，该方法是在微生物发酵生产吡咯喹啉醌的过程中，通过基因敲除手段敲除吡咯喹啉醌生产菌株多糖合成基因簇中的一个重要基因，使该生产菌株丧失了胞外多糖合成的能力，而不降...
- 葛欣张惟材熊向华
- 文献传递
- 甲基营养菌MP681基因组测序文库的构建
- 2010年
- 目的:建立甲基营养菌MP681基因组文库,用于鸟枪法测序。方法:提取MP681基因组DNA,经超声随机片段化及T4 DNA聚合酶末端修平处理后,与经SmaⅠ酶切、小牛肠碱性磷酸酶(CIP)去磷酸化处理的pUC19载体连接,电击转化大肠杆菌DH5α感受态,并通过末端双向测序对文库质量进行评价。结果:分别构建了2～4 kb和4～6 kb基因组文库,电泳结果显示插入片段长度与预期符合,文库库容均在10万以上。结论:构建了插入片段大小和库容符合要求的甲基营养菌MP681全基因组鸟枪法2～4 kb、4～6 kb测序文库。
- 杨璐熊向华汪建华张惟材
- 关键词：甲基营养菌基因组测序鸟枪法文库构建吡咯喹啉醌
- 抗A型肉毒毒素鼠源性单克隆抗体的制备和鉴定被引量：4
- 2016年
- 目的制备与鉴定抗A型肉毒神经毒素重链C端(heavy chain of botulinum neurotoxin serotype A,Bo NT/AHc)特异性鼠单克隆抗体。方法通过纯化Bo NT/AHc抗原、免疫BALB/c小鼠并建立杂交瘤细胞以制备鼠单抗,用ELISA、Western印迹实验和抗体分型试剂盒进行分析鉴定,并通过ELISA检测鼠单抗与Bo NT/AHc突变体结合,初步鉴定其在Bo NT/AHc的结合表位。结果得到纯度较高的Bo NT/AHc抗原,制备了4株特异性鼠单抗1A4、3H3、3H7、5H8。间接ELISA结果显示,单抗细胞上清效价均>3.0×103;Western印迹检测结果显示,单抗均能与Bo NT/AHc特异性结合;抗体亚型鉴定结果为1A4、3H7属于Ig G1(Κ),3H3属于Ig M(Κ),而5H8属于Ig G2b(Κ);叠加ELISA实验表明,4株单抗抗原识别表位相近;用ELISA检测单抗与Bo NT/AHc突变体结合实验结果初步确定了4株单抗与Bo NT/AHc的结合表位。结论对抗A型肉毒毒素鼠源性抗体完成了制备和鉴定,为肉毒毒素中和抗体的开发与阐明中和抗体的表位奠定了基础。
- 赵巧林陆璐毕波景爱霞汪建华张惟材熊向华
- 关键词：肉毒杆菌毒素重链抗体单克隆中和抗体表位
