刘丽
- 作品数：17 被引量：23H指数：3
- 供职机构：大连海洋大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金海洋公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 刺参精子冷冻保存方法研究被引量：1
- 2021年
- 为获得适宜的刺参Apostichopus japonicus精子冷冻保存技术,综合借鉴现有水产动物精子冷冻保存方法,对刺参精子降温方式、冷冻保存液、精子与冷冻保存液混合比例及复苏温度进行了筛选,在筛选出适宜的刺参精子降温方式基础上,分别以煮沸消毒海水和超纯水为溶剂,加入葡萄糖、NaCl、KCl、海藻糖、无水CaCl2和冷冻保存剂[二甲基亚砜(DMSO)、甘油(Gly)或1,2-丙二醇(1,2-G)]配制冷冻保存剂终体积分数为5%、10%和15%的冷冻保存液(Aj-1~Aj-27),以体积比为1∶1、1∶2和1∶3的比例混合精子与冷冻保存液进行冷冻保存,冷冻48 h后分别在37℃和30℃水浴条件下进行精子复苏,以精子活率、快速运动时间和精子寿命为指标,综合筛选冷冻保存刺参精子的适宜冷冻保存液、精子与冷冻保存液混合比例及复苏温度。结果表明:将刺参精子与以超纯水为溶剂配制的Aj-20精子冷冻保存液(12 g/L葡萄糖、7 g/L NaCl、0.7 g/L KCl、5 g/L海藻糖、0.1 g/L无水CaCl2和终体积分数为10%的DMSO)以体积比为1∶2的比例混合,以三步法降温方式冷冻保存,并在30℃水浴短时迅速复苏,该技术方法为本研究筛选到的最优刺参精子冷冻保存方法;与本研究中其他冷冻技术方法相比,应用该优选方法冷冻保存的刺参精子在复苏后精子活率最大(19.00±4.00)%、快速运动时间最长(1178.67 s±14.57 s)、寿命最久(2817.33 s±93.76 s);应用该优选方法冷冻保存72、120、408 h的精子复苏后受精率可达70%以上(精子与卵子数量比为1×106∶1),受精的卵囊孵化率可达到50%。研究表明,本研究中筛选获得的冷冻保存液配方及其冷冻保存方法比较适宜刺参精子的长期冷冻保存,具有应用于生产实践的潜力。
- 赵谭军尹文露邹炀刘丽宋坚常亚青湛垚垚
- 关键词：刺参精子孵化率
- 中间球海胆smad2/3基因克隆、组织表达及其脂多糖刺激响应被引量：6
- 2019年
- 为明确中间球海胆Strongylocentrotus intermedius smad2/3基因(命名为Si-smad2/3)信息,初步研究了该基因的序列特征、组织表达模式及脂多糖对其表达的影响,采用RACE技术克隆获得了成体中间球海胆Si-smad2/3基因的全长cDNA序列。结果表明:Si-smad2/3基因的cDNA全长为2146 bp,共编码446个氨基酸;生物信息学分析发现,Si-smad2/3基因所编码的蛋白相对分子质量为50 300,等电点为6.93,属于亲水性非跨膜蛋白;通过与9种已公布物种的smad2/3蛋白氨基酸序列进行多重序列比对和系统进化分析发现,中间球海胆Si-smad2/3蛋白的氨基酸序列与其他真核生物smad2/3蛋白序列具有较高的相似性,与紫球海胆Strongylocentrotus purpuratus smad2/3蛋白的一致性高达96%,符合中间球海胆的分类和进化地位;实时定量PCR(qRT-PCR)检测结果显示,Si-smad2/3基因在中间球海胆不同组织中均有表达,其相对表达量从高到低为体腔细胞>管足>性腺>围口膜>肠>齿间肌;利用脂多糖(LPS,0.1 mg/mL)对中间球海胆进行免疫刺激发现,与对照组相比,LPS刺激后Si-smad2/3基因在中间球海胆体腔细胞、管足和围口膜中均呈先升高后降低的表达趋势,其中,Si-smad2/3基因在中间球海胆体腔细胞中的相对表达量在LPS刺激9 h时达到峰值,管足中表达量在LPS刺激6 h时达到峰值,而围口膜中的表达量在LPS刺激72 h时达到峰值。研究表明,Si-smad2/3可能参与中间球海胆的免疫应答过程且免疫响应具有组织特异性。
- 柳林张宝警李莹莹姜惠婷刘丽刘印常亚青湛垚垚
- 关键词：中间球海胆克隆生物功能
- 以小分子代谢物为标志筛选耐酸化中间球海胆的方法
- 本发明公开一种以小分子代谢物为标志筛选耐酸化中间球海胆的方法，首先剪取待筛选中间球海胆管足并经过前期处理制成样本，通过液相色谱‑质谱联用分析仪对样本进行小分子代谢物检测，进而筛选样本中15种小分子代谢物的相对含量均位于标...
- 湛垚垚常亚青宋坚崔东遥赵谭军刘丽
- 文献传递
- 海胆和海参中microRNAs的研究进展
- 2021年
- MicroRNAs(MiRNAs)是一种长度为20 nt左右的内源调控型非编码RNA,主要参与基因的转录后调控,在真核生物的生长发育、细胞分化和免疫防御等过程中发挥重要作用。海胆和海参属棘皮类动物,是高等的海洋无脊椎动物,它们不仅是研究无脊椎动物向脊椎动物进化的重要模式生物,其中的一些种类还是重要的渔业资源,具有较高的经济价值。近年来,探明各类miRNAs在海胆和海参生长发育及生理代谢过程中的调控功能及调控机制已逐渐成为海胆和海参研究领域的热点。本研究中综述了近年来海胆和海参中miRNAs的研究成果和相关进展,以期进一步丰富和完善海胆和海参中miRNAs的基础资料,为系统了解和掌握海胆和海参中miRNAs的序列特点、生物学功能及其参与调控重要生理过程的分子机制提供参考资料。
- 尹文露刘丽赵谭军韩森荣宋坚李莹莹常亚青湛垚垚
- 关键词：海胆海参MICRORNA生长发育生理代谢
- 酶联免疫吸附法和液相色谱-质谱联用法分析海洋生物中记忆缺失性贝毒被引量：5
- 2015年
- 采用酶联免疫吸附法(ELISA)和液相色谱-质谱联用法(LC-MS)分析检测我国大连周边海域生物样品中的记忆缺失性贝毒(ASP)。实验结果表明,4个浮游生物样品和2个贝类样品中检出ASP,两种方法检测结果基本一致,相关系数为0.996。ELISA方法适合初步筛选阳性样品;LC-MS方法适合深入研究样品中的ASP结构信息。使用商业ELISA试剂盒以及LC-MS两种方法,证明在某些海域的浮游生物样品和贝类样品中含有ASP,报道了在浮游生物中存在记忆缺失性贝毒主要成分软骨藻酸。
- 赵芮刘磊刘丽韦宁刘仁沿梁玉波王艳洁
- 关键词：软骨藻酸酶联免疫吸附法液相色谱-质谱联用法
- 酶联免疫吸附分析检测鳍藻毒素DTX1和DTX2被引量：3
- 2016年
- 利用BALB/c小鼠腹水大量制备抗大田软海绵酸(Okadaic Acid,OA)的单克隆抗体,并以此抗体为探针建立了检测鳍藻毒素(Dinophysistoxins,DTXs)DTX1和DTX2的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)。DTX1和DTX2各组分的标准曲线在一定范围内都有良好的线性范围和相关系数,最低检出浓度为0.53μg/L和0.45μg/L;批内和批间平均变异系数为6.18%、5.11%和7.28%、5.79%;加标样品平均回收率为76.4%、79.9%;OA与DTX1和DTX2的交叉反应率分别为53%和79%。结果表明,该方法可用于贝类样品中DTX1和DTX2的残留检测。
- 刘丽刘磊赵芮韦宁杨琳刘仁沿梁玉波孙茜
- 关键词：酶联免疫吸附分析
- 仿刺参IKKβ基因(AjIKKβ)cDNA克隆、表达模式分析及其免疫功能研究被引量：1
- 2020年
- 为了明确仿刺参(Apostichopus japonicus)IκB[Inhibitor of nuclear factor kappa-B(NF-κB)]激酶(IKK)基因的序列及分子进化信息,掌握仿刺参中该基因的组织表达规律及其对海参致病菌的响应规律。本研究利用转录组数据库挖掘和c DNA末端快速扩增(RACE)技术首次获得仿刺参IKKβ基因(命名为AjIKKβ)的全长cDNA序列。结果表明,仿刺参AjIKKβ基因的cDNA全长为2854 bp,其中5’非编码区长度为159 bp,3’非编码区长度为331 bp,开放阅读框(ORF)长度为2364 bp,共编码787个氨基酸。生物信息预测显示AjIKKβ蛋白的相对分子量为89.6 kD,理论等电点为6.83。同源性及系统进化分析结果显示,仿刺参与其它6种海洋生物IKKβ蛋白序列的相似性为51.37%,具有一定的保守性。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测发现,AjIKKβ基因在仿刺参管足,体腔液,呼吸树,肠,体壁和纵肌6种组织中均有表达,其相对表达量从高到低依次为体腔液>呼吸树>管足>肠>纵肌>体壁,且具有鲜明的组织特异性。利用灿烂弧菌(Vibrio splendidus)进行感染实验,发现,与未感染致病菌的对照组相比,致病菌感染组仿刺参体腔细胞中AjIKKβ的相对表达量在感染后的4 h、8 h、24 h、48 h和72 h均呈现显著的上调趋势(p<0.05),提示AjIKKβ基因在仿刺参免疫防御中发挥重要作用。本研究结果不仅丰富了棘皮动物IKKβ基因的序列和结构信息,更为初步了解棘皮动物IKKβ基因的免疫调控功能提供基础数据。
- 任丽媛常亚青李开全刘丽姜惠婷湛垚垚
- 关键词：仿刺参IKKΒ基因克隆免疫功能
- 水产动物Akt基因研究进展被引量：2
- 2019年
- Akt(RAC-alpha serine/threonine-protein kinase)是一种丝氨酸(Ser)或苏氨酸(Thr)蛋白激酶,也称为蛋白激酶B(PKB),可以磷酸化多种转录因子,在细胞增殖、细胞免疫应答、细胞代谢调控、细胞发育及存活等过程中发挥重要作用。目前有关水产动物Akt基因及其生物学功能的研究处于起步阶段,资料尚缺乏,本研究中就近年来水产动物Akt基因的序列特征、进化特点、参与的主要通路,以及参与调控鱼类的胚胎发育过程、甲壳类与贝类的免疫防御过程等生物功能等进行综述,指出今后可利用同源克隆或基因组数据挖掘技术获得更多水产动物的Akt基因信息,以便系统和全面地了解该基因在水产动物中的系统进化特点和规律,深入探究不同生理、病理条件下,不同水产动物的Akt基因的响应规律及该基因与其下游靶基因的互作机制,进一步筛选和挖掘能够调控水产动物Akt基因表达的表观遗传调控因子。本研究结果可为充分认识和利用水产动物Akt基因的生物学功能提供更为丰富的资料和线索。
- 刘丽孙景贤常亚青崔东遥李莹莹李开全湛垚垚
- 关键词：AKT基因蛋白激酶B水产动物
- 网状原角藻(Protoceratium reticulatum)产毒特性及虾夷扇贝毒素的提取与纯化研究
- 虾夷扇贝毒素(Yessotoxins, YTXs)是近年来发现的一类聚醚类海洋生物毒素，主要由甲藻门中的网状原角藻产生，另外多边舌甲藻和具刺膝沟藻也被报道可产此类毒素。此前世界多个国家和地区均有检出，该毒素不像传统的腹泻...
- 刘丽
- 关键词：水产养殖虾夷扇贝生物毒素
- 棘皮动物线粒体基因组研究进展被引量：1
- 2021年
- 线粒体基因组是存在于真核生物线粒体中的重要遗传物质,可独立进行复制、转录和蛋白质合成。与核基因组相比,线粒体基因组具有长度相对较短、点突变率高等特点,被认为是研究生物系统进化的重要对象之一。近年来,在海洋生物研究中,线粒体基因组已被广泛应用于遗传分析、种质鉴定、分子标记挖掘以及系统进化研究等领域并取得了丰富的成果。棘皮动物在全球海洋中分布广泛,属无脊椎动物的高等类群,也是无脊椎动物向脊椎动物进化的重要节点生物。目前已有97个物种完成了线粒体基因组的测序。棘皮动物的线粒体基因组包含37个基因,其中ND6基因均分布于轻链。海胆和海星的基因排列顺序最为保守。棘皮动物在绝大多数情况下会使用ATG作为起始密码子,使用TAA和TAG作为终止密码子。根据现有的线粒体基因组数据和分析方法可以阐明绝大多数棘皮动物的分类与系统进化关系,但仍有一些物种的分析结果缺乏足够的可信度。棘皮动物线粒体基因组研究尚有很多方面仍需进一步开展。
- 孙景贤赵谭军尹文露刘丽常亚青湛垚垚
- 关键词：棘皮动物线粒体基因组系统发育
