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SARS冠状病毒N基因的扩增与克隆被引量：2: 2004年; 目的RT-PCR扩增、克隆SARS冠状病毒N蛋白基因。方法根据GenBank数据库中TOR2株的全基因组序列,利用Primer Premier 5.0软件设计引物RT-PCR巢式扩增SARS冠状病毒的N基因,PCR产物克隆后进行测序鉴定。结果序列分析表明,pMD18-T载体中已成功重组了N基因。结论N蛋白基因的扩增、克隆成功,为N蛋白的表达、N蛋白结构与功能的研究奠定了基础。; 肖维威马文丽张宝王艳毛向明彭翼飞宋艳斌吴清华郑文岭; 关键词：严重急性呼吸综合症传染性非典型肺炎冠状病毒基因扩增 N蛋白

正痘病毒检测基因芯片的研制被引量：3: 2004年; 目的研制正痘病毒的检测基因芯片 ,以应用于此类病毒引起疾病的早期诊断。方法运用长片段PCR方法从痘苗病毒中扩增 30kb的正痘病毒保守区域 ,PCR产物经Sau 3AI限制性内切酶消化后与T载体连接 ,筛选阳性克隆 ,扩增探针 ,用CartesianPixsys 5 5 0 0打印仪制备成芯片。采用限制性显示技术对痘苗病毒和牛痘病毒样品进行标记 ,与芯片杂交 ,用Agilent扫描仪扫描 ,检测杂交信号。结果大小分别为 1 0 0 35bp ,984 5bp ,92 93bp的正痘病毒保守区被扩增出来 ,构建了其酶切片段克隆的探针库 ,经测序验证正确。根据正痘病毒保守区域制备的芯片与痘苗病毒有明显的杂交信号 ,与牛痘病毒杂交信号稍弱 ,且有杂交信号的探针数目减少。阴性对照和空白对照均无杂交信号。结论本研究中制备的正痘病毒检测基因芯片具有较高的敏感性。; 王艳马文丽宋艳斌郑文岭; 关键词：基因芯片

痘苗病毒寡核苷酸检测芯片的设计及研制被引量：11: 2004年; 目的对痘苗病毒进行寡核苷酸检测芯片的初步研究,为建立寡核苷酸芯片检测该类病毒提供初步研究依据。方法根据痘苗病毒特异基因设计寡核苷酸探针,人工合成探针后制备寡核苷酸芯片。在病毒感染的不同阶段提取病毒样品DNA及阴性样品DNA,采用限制性显示技术标记,标记样品与芯片杂交后,用Agilent芯片扫描仪检测杂交结果。结果芯片与病毒样品杂交有较强的杂交信号,而与阴性样品杂交除阳性探针外均无信号。结论病毒样品与阴性样品杂交信号区别明显,在病毒感染的各个时段也都有明显的杂交信号,反映了寡核苷酸芯片具有较高的特异性和灵敏度。; 王艳马文丽毛向明吴清华李凌王洪敏肖维威郑文岭; 关键词：寡核苷酸痘苗病毒核酸探针 DNA芯片疫苗天花

2型登革病毒检测基因芯片的研制被引量：7: 2003年; 利用长片断PCR扩增含几乎全长的2型登革病毒cDNA,酶切PCR扩增产物,通过建立2型登革病毒cDNA文库获取芯片探针.用点样仪将探针制备成2型登革病毒检测基因芯片.杂交时采用限制性显示(Re strictionDisplayRD)技术标记样品,ScanArray芯片扫描仪检测杂交信号.杂交结果显示,样品和2型登革病毒基因芯片杂交的敏感性强、特异性高.; 肖维威马文丽王洪敏黄海王艳张宝郑文岭; 关键词：基因芯片基因诊断 2型登革病毒

天花及其他正痘病毒基因组结构研究: 2002年; 天花虽然已在全球灭绝,但天花病毒因其强致病性和传染性而仍有可能被恐怖分子利用作为生物武器。为认识这种病毒,本文对天花病毒基因组结构研究及其与同属的其他病毒基因的比较研究作了综述。; 王艳马文丽郑文岭; 关键词：天花病毒基因组结构

反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒被引量：23: 2003年; 目的探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA,用巢式PCR外侧下游引物进行反转录,以反转录产物为模板,进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行测序鉴定。结果被检样品扩增出特异片段,经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列,证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。; 王艳马文丽宋艳斌肖维威张宝黄海王洪敏马晓冬郑文岭; 关键词：SARS冠状病毒

用于SARS冠状病毒检测的60mer寡核苷酸基因芯片的设计及应用被引量：19: 2003年; 设计并应用60mer寡核苷酸基因芯片实现对SARS冠状病毒的检测。根据寡核苷酸基因芯片的原则设计出30条60mer的寡核苷酸片段,覆盖SARS冠状病毒(以最先提交全序列的TOR2株作为参考,GenBank登录号:AY274119)全基因组,点样制备成12×12的寡核苷酸基因芯片,从临床诊断SARS患者痰液标本抽提病毒RNA,采用限制性显示技术进行标记,将标记好的样品与芯片杂交,洗脱,扫描。初步探索寡核苷酸芯片诊断SARS冠状病毒的可行性。杂交结果表明,来自SARS患者样品与芯片上的多个SARS探针杂交,出现了明显的荧光信号;阴性和空白对照探针上没有杂交信号,而对照样品仅与3个SARS探针有杂交。由此可知,采用60mer寡核苷酸基因芯片可以从基因水平实现对SARS冠状病毒多段序列的平行检测,对于提高检出率有一定意义,此外,尚可用于监测在发病过程的各个阶段中病毒基因的活动状况。; 石嵘马文丽吴清华张宝宋艳斌郭秋野肖维威王艳郑文岭; 关键词：SARS冠状病毒基因芯片芯片设计寡核苷酸基因芯片荧光标记分子杂交

SARS冠状病毒的密码子偏爱性分析被引量：42: 2003年; 为了分析SARS(SevereAcuteRespiratorySyndrome)冠状病毒的密码子偏爱性(codonpreference),为SARS冠状病毒基因表达中宿主系统的选择提供参考.运用EMBOSS(TheEuropeanMolecularBiologyOpenSoftwareSuite)的CHIPS(CodonHeterozygosityinaProtein codingSequence)和CUSP(Createacodonusagetable)程序对SARS冠状病毒的6个编码蛋白的基因进行分析,并将这6个编码序列拼接在一起进行全基因组的密码子偏爱性分析.分析结果与大肠杆菌、酵母及人的密码子偏爱性进行比较.结果显示SARS冠状病毒的CHIPS分析Nc(effectivenumberofcodons)值为53.338,S、E、M、N蛋白、3CL水解酶、RNA聚合酶的Nc值分别为45.733,61.000,59.040,46.618,46.924,51.902.编码SARS冠状病毒A,P,R,S,T,L等氨基酸的不同密码子使用频率有较大差异.大肠杆菌有25个、酵母有12个、人有20个密码子与SARS冠状病毒密码子使用偏爱性差异较大.因此可以得出结论:编码SARS冠状病毒氨基酸的密码子出现的频率较均一.SARS冠状病毒的密码子偏爱性与真核生物较接近,与原核生物相差较远,其基因表达选择在酵母等真核系统可能更为合适.; 王艳马文丽郑文岭; 关键词：SARS冠状病毒密码子

天花疫苗接种前后的风险及收益评估: 2004年; 天花被认为是最有可能被生物恐怖主义者利用的武器。恐怖集团甚至政府机构可能会存贮产于前苏联的天花。作为回应，美国联邦政府已经开始生产和储备大约3亿剂的天花疫苗。该疫苗有效性达到95％～98％。然而其中含有一种活病毒(痘苗)，存在有严重的疫苗副作用的风险。这导致了这些天花疫苗储备该如何使用的争论。该文提出了一种关于天花疫苗接种前后的风险一收益模型，将有助于公共卫生官员更好地理解公众的风险-收益评估。; 王艳; 关键词：天花疫苗接种

用巢式PCR方法制备基因芯片的探针被引量：5: 2003年; 制备出高纯度的探针,用于诊断基因芯片的打印.采用巢式PCR技术,M13作为外侧引物并自行设计内侧引物,扩增克隆在T载体上的基因片段.可制备出成分单一,上下游仅含19bp和20bp的短载体序列的探针,能使打印出的芯片得到较好的杂交效果.该法充分利用巢式PCR的优点,对制备探针的方法进行改进,且简便快速,能得到更高质量的探针,满足打印芯片的要求.; 黄海马文丽王洪敏肖维威王艳郑文岭; 关键词：巢式PCR 基因芯片探针 T载体

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王艳

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