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动物血液学检测影响因素: 2010年; 血液对于维持动物机体的正常生命活动具有极其重要的意义。血液的各种成分是能够客观反映机体的代谢状况或患病情况的重要参考指标，也是进行试验研究重要的数据资料。但是随着自动化仪器的使用，检验员过多的依赖于仪器而忽视了在使用仪器时仪器本身及其他外在影响测定的因素，造成测定的参数数值不准确，为动物的机体状况和疾病诊断带来了不便。; 丁雷; 关键词：动物血液学

成体兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因的打靶研究: 2010年; 目的构建兔HPRT基因打靶载体。方法在已经筛选到含有兔全长次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（Hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase，HGPR乃基因BAC克隆（LBNL1—304M19）的基础上，利用Red重组系统，从此克隆上将一段12．5kb无启动子的HGPRT基因组片段克隆到pKS-质粒上，产生pKS-HGPRT质粒。然后基于pKS-HGPRT和pEGFP—C1-SD1211质粒，构建了含有绿色荧光蛋白（GFP）及新霉素（neo）筛选标记基因的打靶载体pKS-HGPRT-GFP—neo。结果将线性化的打靶载体通过脂质体转染的方法整合到成体兔成纤维细胞基因组中，利用G418及6-TG进行细胞克隆的抗药物筛选，共得到抗性细胞克隆20个。对细胞克隆进行PCR及测序初步鉴定，获得8个发生同源重组的细胞克隆，还需利用Southern blotting做进一步验证。结论成功快速地构建了且PR丁基因敲除型打靶载体，为下一步进行体细胞核移植制备HGPRT基因敲除转基因克隆兔奠定基础。; 王伟张传山郭毅谷瑞环丁雷姚刚陈学进; 关键词：基因敲除细胞筛选

成体兔转基因成纤维细胞的克隆分离及其核移植研究被引量：3: 2009年; 哺乳动物体细胞核移植及其与转基因技术的结合为转基因动物的研究提供了新的思路和方法.然而,单个转基因细胞克隆的分离培养一直比较困难,很大程度上限制了转基因动物的研制.将pRNAT-U6.1/Neo质粒转染成体兔成纤维细胞,通过24孔细胞培养板分离培养法获得来源于单个转基因成纤维细胞克隆.由于单个成纤维细胞克隆在新鲜DMEM培养液中生长比较困难或缓慢,采用由DMEM/F12制备的条件性培养液进行筛选.以转基因成纤维细胞为供体细胞进行核移植,囊胚率为23.5%,与来源于成体兔正常成纤维细胞相比较差异不显著.并且利用PCR或多重PCR方法鉴定筛选的转基因细胞克隆及其核移植胚胎中整合的NeoR基因和常染色体β-actinDNA.为转基因哺乳动物细胞的分离培养和核移植胚胎的鉴定提供可靠的方法,缩短了转基因动物的研制周期,降低生产成本,同时为进一步通过核移植技术获得转基因克隆兔提供了条件.; 张传山郭毅谷瑞环李善刚李峰王伟丁雷邢凤英姚刚陈学进; 关键词：细胞分离多重PCR 核移植转基因检测

电穿孔介导外源基因转染兔成体成纤维细胞的初步研究被引量：5: 2010年; 目的采用电穿孔方法，介导质粒载体pEGFP-cl转入兔成体成纤维细胞，探讨建立电穿孔介导外源基因转染兔成体成纤维细胞的基本条件。方法电穿孔介导质粒载体pEGFP—cl转入7．10代兔耳成体成纤维细胞系GG，研究不同电压、电容、DNA剂量，孵育温度的条件下，观察细胞存活数，流式细胞仪测试GFP的含量。结果以PBS作为电击基础液、细胞浓度2×10^6个／ml，电压250V、电容700μF，DNA用量30μg时，兔耳成纤维细胞的转染率和存活率最佳。且电击前冰浴10min，电转染后37℃孵育10min有利于提高细胞的转染率和存活率。结论在合适电压、电容、DNA剂量条件下，电转染提供了外源基因转染兔耳成体成纤维细胞适用性；电转染前的一定时间冰浴和电转染后一定温度孵育可使电转染效率得到改善。; 谷瑞环李善刚宋伟杰王伟丁雷张艳邢凤英李垚陈学进; 关键词：电穿孔转染

基因打靶技术在动物生产中的应用: 2010年; 基因打靶技术是20世纪80年代发展起来的一项分子生物学技术，它利用基因转移的方法，将外源DNA序列导入靶细胞，通过外源DNA序列与靶细胞内染色体上同源DNA序列间的重组，将外源DNA定点载入靶细胞基因组上某一特定的位点，或对某一预先确定的靶位点进行定点突变，从而改变细胞的遗传性状，实现精确、定向的基因删除或替代，而不累及其它基因。; 丁雷王伟; 关键词：基因打靶技术动物生产 DNA序列定点突变外源DNA 靶细胞

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丁雷