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中药丹参资源开发现代研究进展被引量：4: 2014年; 唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge.)是治疗心血管系统疾病的临床常用中药,主要含有两类有效成分:脂溶性的二萜醌类化合物和水溶性的酚酸类化合物,具有显著的抗菌消炎、抗血栓形成、抗心肌缺血、保肝及抗氧化作用。由于直接从丹参中提取有效成分纯度低、效率低,提取纯化困难,加之丹参资源有限,影响了临床用药质量和天然药物的开发与持续利用。为解决此问题,化学及分子生物学等多种现代技术手段应用到丹参资源质量及产量的提高中,并已取得不同程度的进展。本文从丹参活性成分的人工合成、生物技术手段的应用、次生代谢调控及次生代谢工程研究四个角度全面综述了丹参资源研究现状,为进一步推动丹参资源开发现代化进程提供借鉴。; 张夏楠关红雨高伟刘长利罗容李佳王秀娟; 关键词：丹参化学合成生物技术次生代谢调控

雷公藤牻牛儿基焦磷酸合酶基因TwGPPS克隆与表达分析被引量：7: 2017年; 根据雷公藤悬浮细胞转录组数据设计特异引物,采用cDNA末端快速扩增技术克隆雷公藤牻牛儿基焦磷酸合酶基因TwGPPS1,TwGPPS2全长cDNA,并进行生物信息学分析和蛋白表达研究。首次克隆得到TwGPPS1核苷酸的完整开放阅读框长度为1 278 bp,编码425个氨基酸蛋白,预测蛋白等电点为6.68,相对分子质量为47.189 kDa;TwGPPS2核苷酸的完整开放阅读框长度为1 269 bp,编码422个氨基酸蛋白,预测蛋白等电点为6.71,相对分子质量为46.774 kDa;进一步构建了原核重组表达载体pET-32a-TwGPPS1,pET-32a-TwGPPS2,并成功诱导出TwGPPS1,TwGPPS2重组蛋白,为深入研究此关键酶基因功能和雷公藤萜类生物合成途径奠定基础。; 屠李婵张逸风苏平胡添源童宇茹关红雨赵瑜君张夏楠袁媛高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤生物信息学分析蛋白表达

雷公藤甾醇C-24甲基转移酶(TwSMT2)的cDNA克隆及表达分析被引量：3: 2016年; 24-烷基甾醇具有构成膜结构和调节植物生长发育的作用,本研究根据雷公藤悬浮细胞转录组数据,克隆得到雷公藤甾醇生物合成途径上的一个重要限速酶:甾醇C-24甲基转移酶(SMT),其c DNA全长1 631 bp,开放阅读框1 080 bp,编码359个氨基酸。在线预测所编码蛋白的理论等电点为6.43,分子质量为40.0 k Da。生物信息学分析结果将此SMT基因归为SMT2家族。进一步构建p MAL-c2X-Tw SMT2重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3),茉莉酸甲酯诱导表达分析结果显示:相比于对照组,经诱导后的Tw SMT2基因在24 h处有显著提高。SDS-PAGE及Western blot检测蛋白表达结果显示,IPTG可诱导表达出Tw SMT2蛋白。本研究首次克隆得到Tw SMT2基因,并获得重组蛋白,为进一步阐述雷公藤甾醇生物合成途径奠定基础。; 关红雨苏平赵瑜君童宇茹刘雨佳胡添源张逸风张夏楠王秀娟高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤生物信息学分析蛋白表达

甾体皂苷生物合成相关酶及基因研究进展被引量：17: 2016年; 甾体皂苷是植物中广泛存在的一种次生代谢产物,其种类繁多且大多数有很强的生理活性,具有很大的药用研究价值和广泛应用前景。甾体皂苷生物合成途径复杂,受到多种酶的调控。本文综述了植物甾体皂苷的生物合成途径及途径中关键酶及基因的研究进展,并对其研究前景做简要展望。; 尹艳关红雨张夏楠; 关键词：甾体皂苷生物合成糖基转移酶糖苷酶

雷公藤4α-甲基氧化酶基因(TwSMO1)的cDNA全长克隆及表达分析: 2017年; 目的:克隆得到雷公藤一型4α-甲基氧化酶(Tw SMO1)(Gen Bank KX987126)全长基因,并对其进行序列分析及初步的功能验证。方法:根据雷公藤转录组数据,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到雷公藤4α-甲基氧化酶基因(TwSMO1),并利用相关软件对所得核酸序列及其所编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。用茉莉酸甲酯(MeJA)诱导雷公藤悬浮细胞,用实时荧光定量(RT-PCR)的方法分析诱导不同时间点后雷公藤悬浮细胞中的TwSMO1基因的相对表达量。结果:克隆所得的TwSMO1基因cDNA全长1505 bp,开放阅读框900 bp,编码299个氨基酸,在线预测其所编码蛋白分子量为34.55 k Da,理论等电点为6.89。多重序列比对结果显示其与其他物种的SMO1氨基酸序列有较高同源性,且包含SMO1基因家族的3个保守域,系统进化树将其归为4α-甲基氧化酶第一家族基因,遂将其命名为TwSMO1。RT-PCR结果表明MeJA诱导后TwSMO1基因在1 h后表达量达到最高,约是对照组的450倍。结论:本研究首次克隆得到雷公藤TwSMO1基因,并对其进行生物信息学分析及MeJA诱导表达分析,为深入研究此基因功能及阐述雷公藤甾醇生物合成途径奠定基础。; 关红雨胡添源赵瑜君苏平童宇茹张逸风张夏楠高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤克隆生物信息学分析

雷公藤贝壳杉烯酸氧化酶基因的全长cDNA克隆与表达分析被引量：2: 2017年; 贝壳杉烯酸氧化酶(kaurenoic acid oxidase)是二萜赤霉素生物合成途径上的关键酶,参与植物生长发育等重要生物学过程。该文根据雷公藤转录组数据设计特异性引物,采用PCR技术克隆得到贝壳杉烯酸氧化酶全长c DNA序列,并进行生物信息学分析;使用实时定量PCR(qRT-PCR)研究基因的诱导表达水平。克隆得到Tw KAO长度为1 874 bp,编码487个氨基酸,蛋白相对分子质量56.02 k Da,理论等电点8.89;经茉莉酸甲酯(Me JA)诱导后,Tw KAO基因相对表达量在12 h达到峰值;经植株组织表达分析证实,Tw KAO基因在雷公藤的叶中表达量最高,根中最低。该研究首次克隆得到雷公藤KAO基因,并分析其mRNA表达特征,为深入研究雷公藤生长发育以及萜类活性成分次生代谢研究奠定基础。; 张逸风苏平胡添源周家伟关红雨高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤克隆生物信息学分析

雷公藤单萜合酶基因TwMS的克隆及蛋白表达分析被引量：4: 2017年; 该研究克隆得到1条雷公藤单萜合酶基因TwMS。其完整开放阅读框为1797bp,编码579个氨基酸,相对分子质量为69.75kDa、理论等电点为5.37。生物信息学分析表明,TwMS具有单萜合酶的特征结构域,属于萜类合酶TPSb亚家族。实时荧光定量PCR检测显示,经茉莉酸甲酯(MeJA)诱导后,TwMS的相对表达量显著上调,并在24 h达到最高。此外,该研究在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达TwMS蛋白,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。; 胡添源苏平张逸风关红雨周家伟童宇茹高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤生物信息学分析基因表达分析蛋白表达

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关红雨